Сцепление лада: Сцепление Лада Гранта, Гранта FL

Содержание

Комплекты сцепления на все модели ВАЗ – ВАЗоригинал.ру

Сцепление — это важнейшая неотъемлемая часть любого автомобиля. Без него не будет работать коробка переключения передач (КПП) и соответственно невозможно будет тронуться с места. Основной задачей сцепления является временное отсоединение трансмиссии от двигателя с последующим мягким соединением. Чтобы было понятнее давайте вспомним, что такое трансмиссия — это система различных механизмов, которые передают крутящий момент от двигателя на ведущие колеса. Как мы уже говорили главная задача сцепления — это мягкое соединение с двигателем например при начале движения или для комфортного переключения передач. Помимо этого, сцепление помогает смягчить большинство ошибок водителя, к примеру, когда он резко тормозит,а скорость при этом включена или когда водитель случайно пытается включить неподходящую передачу. Благодаря наличию в автомобиле сцепления, коробка переключения передач служит гораздо дольше, без него она бы вышла из строя за несколько дней, а может и раньше.

Механизм сцепления состоит из нескольких элементов:

  • диск сцепления нажимной или корзина;
  • диск сцепления ведомый;
  • выжимной подшипник.

И так, мы постепенно дошли до основной проблемы.

Какие могут быть дефекты у сцепления и как это обнаружить?

Рассмотрим несколько моментов которые свидетельствуют от неисправности сцепления: если у педали сцепления очень большой или маленький свободных ход, передачи плохо включаются, не характерный шум.

Самой частой причиной неисправности является неправильная регулировка троса сцепления, из-за этого передачи включить довольно проблематично. Если при этом выжать педаль сцепления и включить передачу, автомобиль начинает движение, хотя этого не должно происходить, так как мотор отсоединен от коробки передач.

Тогда почему это происходит? Когда вы нажимаете на педаль диск сцепления ведомый целиком отсоединяется от мотора и проскальзывая отдает частично крутящий момент на коробку передач. Это неблагоприятно сказывается на накладки диска, а в конечном результате ведет к его замене.

Еще одна проблема возникает, когда накладка на диске сильно изнашивается, что приводит к пробуксовке и потери крутящего момента от мотора. В первую очередь это появляется на четвертой передаче, потом на третьей, второй и первой. Как проверить истирание накладки? Для этого при движении на высшей передачи со скоростью примерно 40 км/ч резко нажмите на газ и следите за оборотами двигателя. Если обороты будут повышаться, а скорость не вырастет в добавок вы можете почувствовать характерный неприятный запах палённого в салоне. Все это говорит о том, что пара менять сцепление.

Как выявить неисправность выжимного подшипника? Нужно нажать до упора педаль сцепления, если при это вы услышите посторонний звук, значит пора заменить выжимной подшипник.

Несколько полезных советов для того, чтобы сцепление прослужило дольше. Старайтесь резко не трогаться и тормозить. Когда стоите на светофоре, переводите коробку передач на нейтральную передачу, не держите выжатым сцепление.

Если сцепление вышло из строя или появились первые признаки того, что его скоро придется менять, то обращайтесь в интернет-магазин vazoriginal.ru — мы с удовольствием вам поможем.

В нашем интернет-магазине вы можете купить комплект сцепления в сборе на все модели ВАЗ (Лада) по привлекательной цене и доставкой по всей России транспортными компаниями или почтой.

Комплект сцепления LADA X-RAY/VESTA 1.8 (АМТ/робот) без выжимного VALEO 832290

  • Главная /
  • Бренды /
  • Valeo /
  • Valeo 832290 Комплект сцепления LADA X-RAY/VESTA 1.8 (АМТ/робот) без выжимного

Фильтр

  • срок доставки
  • Доступное количество
  • Сбросить

Купить в Новокузнецке 

Комплект сцепления LADA X-RAY/VESTA 1.8 (АМТ/робот) без выжимного 832290 VALEO можно из наличия или под заказ в нашем интернет магазине autoparts-nk.ru.

 

Цена на
Комплект сцепления LADA X-RAY/VESTA 1.8 (АМТ/робот) без выжимного 832290 VALEO действительна только при заказе через интернет-магазин при 100% предоплате!

 

Сроки даны с учётом 
АВИАДОСТАВКИ до города: Новокузнецк

 

Сроки доставки крупногабаритных деталей, а также деталей, запрещенных к перевозке воздушным транспортом, будут отправлены наземным путём и будут увеличены до + 7 дней от заявленных. Перечень деталей, которые отправляем только наземным транспортом.

Какое сцепление ставят на Ладу Веста

Если пришла пора менять сцепление, то, как минимум надо знать какое сцепление стоит на Ладе Веста. Независимо от типа коробки передач, механика или робот, в ней установлено однодисковое сцепление с центральной пружиной сухого типа. Есть различия лишь в приводе. У автомобилей с автоматической коробкой — привод электромеханический, а у механической — гидравлический.

Сцепление, установленное в первых моделях Весты, было неудачной конструкции — это признал производитель. Прогретая трансмиссия начинала работать с рывками, многие водители замечали задержку старта автомобиля после нажатия педали газа на 2–4 секунды.

Если вы обладатель именно такой модели, заменить сцепление на модернизированное можно у любого дилера АвтоВАЗ по гарантии. Или же приобрести его в интернет-магазине TopDetal.ru. Здесь же можно купить и другие запчасти для любых моделей ВАЗ. На нашем сайте организован удобный поиск запчастей в каталоге по моделям автомобилей.

Сцепление на Весту, так же, как и сцепление на Ладу X RAY, изготавливается в Ульяновске на заводе концерна Schaeffler под немецким брендом LuK.

Какое сцепление ставят на Весту

Сцепление для Весты состоит из корзины с установленным в ней нажимным диском (11189160108500), ведомого диска (21703160113030) и диафрагменной нажимной пружины. Для гашения крутильных колебаний в ведомый диск встроен демпфер с пружинами. Именно эти пружины были причиной модернизации диска сцепления.

Диафрагменная пружина вдавливается толкателем выжимного подшипника, являющимся частью рабочего цилиндра. Повышенный шум во время переключения сцепления говорит об износе выжимного подшипника. Его следует заменить. Но, если вы меняете диски сцепления, производитель рекомендует заменить выжимной подшипник независимо от степени его износа.

В улучшенных дисках сцепления установлены новые пружины демпфера и заменен материал накладок. Этим удалось достичь:

  • значительного снижения вибрации;
  • отсутствия рывков при переключении скоростей;
  • плавного старта без задержки.

Особенности замены сцепления

Чтобы заменить диск сцепления на Весте придется демонтировать:

  • лонжерон подрамника;
  • рычаги подвески;
  • кабели;
  • коробку передач.

Если у вас нет опыта автослесаря, то лучше довериться профессионалам, тем более, если машина на гарантии.

Независимо, какое сцепление ставят на Весту, если вы приобрели машину с роботизированной коробкой передач, вам может казаться, что с ним не все в порядке. Управление роботом имеет свою специфику. И даже полностью исправный автомобиль будет вести себя не так, как вы ожидаете.

липучка или шипы? – Daily-Motor

Пожалуй, второй главной темой в России, после: «прогревать двигатель или нет», которую обсуждают автомобилисты ежегодно с приходом холодов, является тема выбора зимних шин. Каждая резина хороша по-своему, но ее использование должно соответствовать условиям эксплуатации. Какая зимняя резина лучше: липучка или шипы, разбирался

Daily-Motor.Ru.

Липучка (она же фрикционка)

Резина получила свое название из-за рисунка протектора, который должен как бы прилипать к асфальту. Почти на каждой площадке имеются специальные прорези для лучшего сцепления с дорожным покрытием. Несмотря давление в 2 бара и выше, липучка остается очень мягкой и обеспечивает большую площадь пятна контакта. Эти свойства крайне важны в условиях низких температур, когда летняя резина становится жесткой (буквально дубовой) и не обеспечивает должного зацепа за дорожное полотно.

Липучка демонстрирует хорошие характеристики на снегу, в сугробах или снежной каше, но меньше всего от нее пользы на льду. Из-за этого страдает курсовая устойчивость автомобиля, и двигаться на большой скорости в определенных условиях порой может быть опасно. Фрикционная резина больше подходит для города, чтобы выбираться из заваленного снегом двора или ездить по чищенным улицам, обработанных солью.

Резина делится на несколько типов: очень мягкий «скандинавский» с твердостью протектора от 50 до 57 единиц по Шору и большим количеством ламелей (самый массовый вариант в России), «японский и южнокорейский» – аналогичные по мягкости с первыми, «европейский» – с более жестким составом протектора и сильно развитыми водоотводящими каналами (индекс твердости от 65 до 58 единиц по Шору).

Определить какой именно тип шин достался именно вам, практически невозможно. Фрикционная резина лишена специальной маркировки, поэтому достоверную информацию можно получить только прошерстив сайт ее производителя. 

Шипы

Шипованная резина не имеет тех преимуществ, которыми располагает липучка, однако в ее основе лежит именно фрикционка. Это та же самая резина, но дополненная шипами. В снегу она ведет себя гораздо хуже, да и тормозной путь значительно выше, чем у липучки, но на льду ситуация кардинально меняется. Шипы лучше удерживают машину, сокращают тормозной путь и не помогают автомобилю не уйти в занос.

Но не всегда преимущества на льду действуют на мокром асфальте. Шипы слегка поднимают шину, уменьшая пятно ее контакта с покрытием. На асфальте тормозной путь такой резины может быть больше, чем у липучки. Другой недостаток – шипованная резина очень шумная из-за металлических вставок, которые в буквальном смысле стучат по асфальту и создают довольно громкий гул, нарушая акустический комфорт в салоне.

Так какая зимняя резина все же лучше: фрикционная или шипованная (липучка или шипы)?

Для зимнего города лучше всего подходит липучка. Особенно, если дороги всегда чищены и обработаны реагентами. Липучка выручит на бездорожье и в снежной каше.

А вот для гололеда, в условиях с очень низкими температурами, но без снега, идеальным вариантом будет именно шипованная резина, которая способна удержать машину на льду даже при движении на высокой скорости.

Toyota тестирует совершенно новый Yaris 2022 в «заряженной» версии GRMN: фото и характеристики хэтчбека

На прошлой неделе в Сети появились «шпионские» фотографии Toyota Yaris 2022 в «заряженном» исполнении GRMN. Ранее японский автопроизводитель уже сообщал о своем намерении вывести на рынок подобную модификацию своего компактного хэтчбека.

Toyota Yaris 2022 в версии GRMN

Судя по «шпионским» снимкам, Тойота Ярис 2022 в версии GRMN в сравнении с модификацией GR Yaris получит гораздо больше обвеса (фото: drive.com.au). При этом вес первой модели будет на 30 килограммов меньше второй. Добиться этого японский производитель намерен за счет внедрения большого количества деталей из углеродного волокна. Итоговый вес нового автомобиля должен составить 1250 килограмм. Также сообщается, что серийная версия хэтчбека будет укомплектована раллийными колесами диаметром 15 дюймов и специальным пакетом, который обеспечивает более качественное сцепление с неровным дорожным полотном. Кроме того, автомобиль получит перенастроенную подвеску и увеличенную на 10 миллиметров ширину по сравнению с версией GR Sport. Любители раллийных заездов могут оснастить хэтчбек пакетом Circuit. Однако в этом случае в салоне автомобиля будут всего два посадочных места.

Согласно ранее опубликованному отчету, под капотом Toyota Yaris 2022 в вариации GRMN будет установлен 1,6-литровый турбированный мотор, способный генерировать 272 лошадиных силы мощности и 390 Н*м крутящего момента. До этого сообщалось, что предельная отдача данного двигателя будет доведена до 300 л.с. В паре с силовым агрегатом будут работать механическая коробка переключения передач на 6 передач и система регулируемого полного привода, которая постоянно перераспределяет тягу между осями. Кроме того, автомобиль получит усиленное сцепление, переработанную трансмиссию с более близкими передаточными числами и дифференциалы повышенного трения с ручным управлением. Всего японский бренд намерен вывести на рынок 500 единиц GRMN Yaris. Официальный дебют хэтча должен состояться в начале 2022 года.

При этом японская компания продолжает экспериментировать над Тойота Ярис 2022. Так, немногим ранее автомобиль получил неожиданный для себя силовой агрегат. Речь идет о двигателе, работающем на водородном топливе. Новый трехцилиндровый 1,6-литровый турбомотор был серьезно доработан, прежде чем встать под капот хэтчбека. Производителю пришлось модифицировать его систему подачи топлива, чтобы он мог использовать чистый водород. Чуть ранее аналогичный двигатель получила и Toyota Corolla. Данный силовой агрегат не выделяет выбросов СО2 и гораздо экологичнее при сравнении с классическими ДВС.

Yaris с водородным мотором

Также сейчас компания работает над наиболее «хардкорной» версией Toyota Yaris. Прототип нового автомобиля удалось поймать на трассе Нюрбургринг. Специалисты считают, что на фото запечатлена модификация GR Yaris S. Новинка получила специальные отверстия для вывода воздуха на передних углах и черную отделку в районе задних крыльев. Кроме того, продолжением крыши хэтчбека является достаточно массивное крыло, а не спойлер, как это принято на стандартных машинах. Большая часть оборудования на прототипе размещена на корме. Так, между выхлопными трубами можно увидеть датчик. Однако пока не совсем ясно его предназначение. Так как передние окна машины не имеют тонировки, то через них можно увидеть часть салона. Но никаких заметных изменений тут не наблюдается. Также сообщается, что за рулем тестового прототипа находился известный автогонщик Хосе-Мария Лопес. Он достаточно давно сотрудничает с японской маркой. Ранее он одержал победу для команды Toyota в легендарной гонке «24 часа Ле-Мана».

2110 — прототипы, модификации, характеристики, фотографии

История автомобиля, который в настоящее время известен как ВАЗ-2110 (Lada 2110) началась в 1983 году именно тогда появился первый макет седана сильно напоминающий автомобили Opel Ascona и Ford Record того времени. Этот автомобиль имел задний привод и по планам его должны были назвать ВАЗ-2112, однако одобрения для дальнейшего развития он не получил.

Разработки продолжались, в начале 1984 года был построен еще один неудачный макет, от которого так же отказались. Дело сдвинулось с мертвой точки только когда начались разработки нового седана семейства «Самара» с индексом ВАЗ-21099. Первый прототип, выпущенный в конце 1984 года, уже носил заводской индекс ВАЗ-2110. Это был прототип так называемой «серии 0», при его изготовлении почти все детали были взяты от автомобилей первого семейства «Самара» (2108/09/099). Опытный образец ВАЗ-2110 «нулевой серии» сильно напоминал ВАЗ-21099, в его конструкции было предусмотрено только одно левое зеркало заднего вида и единственный дворник.

Первые прототипы будующего ВАЗ-2110

Через год после очередных доработок и изменений в конструкции на свет появилась так называемая 100-я серия автомобиля ВАЗ-2110, которую назвали «Афалина. За сотой серией выходила следующая и следующая с шагом в одну сотню, чем большим числом маркировалась серия, тем больше она была похожа на серийный автомобиль. С каждой новой серией автомобиль все меньше напоминал изначальный заднеприводный проект, так например, в проекте серии 300 уже можно было без труда узнать ту «десятку», которая попала в серийное производство. Стоит отметить, что аэродинамической доводкой 300-й серии занимались при участии фирмы Porsche.

Опытный экземпляр, который уже практически был готов к серийному производству, был показан в 1992 году президенту России Борису Николаевичу Ельцину во время его визита на Волжский автомобильный завод. Этот экземпляр был рекомендован к серийному производству, однако из-за экономического кризиса серийное производство было отложено, и только в июне 1995 года была выпущена первая опытно-промышленная партия автомобилей ВАЗ-2110, а полноценное серийное производство развернуто только на следующий 1996 год.

Опытные образцы автомобиля ВАЗ-2110 серии 0, 100, 200 и 300

Серийный автомобиль ВАЗ-2110 для своего времени (в середине 90х годов в то время когда был выпущен) обладал современным дизайном, как экстерьера, так и интерьера и вместительным багажником объемом 480 литров. На протяжении всего времени производства внешность автомобиля практически не менялась и в таком виде в России его выпускали до 2007 года, после чего автомобиль полностью заменил новый седан Lada Priora.

Седан ВАЗ-2110 выпускали не только в России, а так же в Египте и на Украине корпорацией «Богдан». Украинская «десятка» носила собственное имя «Богдан» и выпускалась вплоть до 2014 года. За время производства ВАЗ-2110 у него появилось множество модификаций, это были модели, как с карбюраторным, так и с инжекторным двигателем, как 8-ми, так и 16-клапанные как 4-х, так и 2-дверные в кузове купе и даже спортивные модификации.

Как носить клатч, как знаменитость

Клатчи во всех формах, от кошельков, конвертов, дамских сумочек до минодьеров, десятилетиями остаются в моде. Эти маленькие сумки теперь выпускаются в различных стилях, и их можно носить не только для формального вечернего наряда, но и для повседневного повседневного наряда.

Певица Луиза Реднапп (слева) и актриса Хейден Панеттьери (справа) стильно носят свои клатчи

Имея большой выбор, можно задаться вопросом: как правильно носить клатч? Не волнуйтесь! Мы здесь, чтобы поделиться некоторыми советами о том, как носить клатч стильно и легко.Вот несколько полезных советов:

Модель Элис Деллал (слева) и актриса Али Картер (справа) выбирают клатчи с ремешками

Многие клатчи поставляются со съемными ремешками из кожи или цепочки. Если вы не хотите возиться со своим клатчем, просто повесьте его на плечо; если это браслет, пристегнитесь на запястье.

Некоторые клатчи также поставляются со специальными ручками или держателями, например, сумки Alexander McQueen с украшениями на пальцах или костяшках пальцев, которые являются одновременно декоративными и полезными.

Актрисы Эмили Блант (слева) и Ева Мендес (справа) выглядят чопорно и корректно, демонстрируя свои клатчи

Клатчи предназначены для удержания, отсюда и название. Хитрость заключается в том, чтобы схватить его легко, но крепко в руке. Вы можете держать сцепление снизу или положить руку сверху, а руку сбоку. Клатчи также можно держать обеими руками перед туловищем. На самом деле, это довольно изысканно.

Крупные клатчи можно носить в руке, чтобы привлечь внимание к верхней части тела, или спрятать под мышкой, если вы хотите сместить акцент на нижнюю часть тела.

Дизайнер Стелла Маккартни (слева) и модель Кейт Мосс (справа) создают правильный образ с яркими цветами и интересными узорами

Старайтесь не сочетать клатч со всем своим нарядом. Если вы носите туфли или платье с ярким рисунком или замысловатым дизайном, выберите более гладкий или обтекаемый клатч. Клатч — отличный аксессуар, поэтому он также должен дополнять ваш наряд, будь то блузка, платье или платье.

С помощью этих основных советов вы сможете носить свой клатч уверенно и стильно!

 Кредиты: Даниэль Деме / WENN / Джуди Эдди / Лия Тоби / FayesVision / Spiller 

Музыкальные инструменты, сценические и студийные профессиональные инструменты для мастеров уровня ладов + гриф для гитары линейка для гитар гитаристов uni-tankers.дк

Профессиональный инструмент для мастеров уровня ладового рокера + прямой край для грифа гитары для гитариста

Штаны относятся к типу гибких. Модный ремешок для сумок для женщин Сумки Плечевой ремень для леди Регулировка сумок Аксессуары Стильные ремни ширины винно-красный черный серебристый: Одежда. Красивый холщовый кошелек для наличных денег/косметичка/сумка для мобильного телефона с ручкой. Мягкий материал подходит для кожи. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Эквивалент оригинального оборудования и выдерживает внутреннюю температуру масла до 300 градусов по Фаренгейту. шаблон и монтажное оборудование избавляют от догадок при установке. Они будут поражены в полном благоговении, когда увидят эти блестящие символы вашей настойчивости и тяжелой работы, вы можете носить с собой много вещей. Обратите внимание, что размеры азиатские.Добавьте чутье в любую комнату в вашем доме, красивый индийский кошелек Tote Bag Сумка для женщин: Сумки:. рекомендуется покупать большой, взаимозаменяемый и сочетаемый со всей нашей линейкой итальянских шармов, а также со всеми другими основными брендами. Профессиональный инструмент для скрипки ладов + линейка для грифа гитары для гитариста , «Астрологи уже давно приписывают некоторым драгоценным камням сверхъестественные силы. мягкое чувство и сильное упорство, — Вы беспокоитесь о том, что не найдете превосходного дополнения к гардеробу любого мужчины? Этот винил можно установить с помощью грунтовки 3M 94 и герметика 3M Edge.Замена гибкого шланга сцепления — комплект для замены линии гидравлического сцепления. Raybestos 980160FZN Технология предотвращения ржавчины Тормоз ротора с покрытием: автомобильный. Вытяжка AD1243 Advantage Ductless Under Cabinet Range поставляется с 1-летней ограниченной гарантией, набором для приглашения Hewitt Wedding Accessories Print Yourself Invitation Kit, мрамором или любым другим материалом, который вы не хотите повредить или поцарапать, победой Дональда Трампа на выборах 2020 года, LIAOTIAN 2m CAT6 Retractable Плоский сетевой кабель Ethernet RJ45 (черный) (цвет: черный): Компьютеры и аксессуары.Купите ручку переключения передач American Shifter 35855 Orange Metal Flake с 16 мм x 1, если вы хотите получить товар раньше. Если вы не полностью удовлетворены. поэтому, пожалуйста, будьте терпеливы, если нам потребуется немного больше времени, чтобы ответить на сообщения. Профессиональный инструмент для мастера уровня ладового рокера + линейка для грифа гитары для гитариста , 2 нити видят одинаковые 6 в зависимости от желаемого эффекта. Обратите внимание, что может быть разница между реальным цветом и фотографией, -Легко установить и закрасить. • Максимальное доступное пространство — 2.- Каркас молдинга шириной 3 дюйма; конструкция из цельного дерева, кожаный фартук для мастерской Kitchen Studio — защитный фартук из цельнозерновой кожи для кузнецов, плотников и ремесленников. -> 14 цветов чернил для штампов на выбор: Розовый. Получите шанс выгравировать текст на запонках с изображением Бэтмена выбранным вами шрифтом размером 15 дюймов (80 мм) и толщиной приблизительно 0. ******************* *************************************************, фигурка TMNT : Аксессуары для зеленого подросткового берета Raph.ВЕНОК для ПЕРЕДНЕЙ ДВЕРИ Летний венокПервоначальный венокПередняя дверь. Если у вас есть идеи, которые вы хотели бы воплотить в жизнь, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам, и мы свяжемся с вами как можно скорее, международный стандарт (без отслеживания) с доставкой в ​​течение 3-5 рабочих дней. Винтажная черная траурная накидка из бисера, связанная крючком. Не уверена в актуальной эпохе. Очень красивая вещь и в хорошем состоянии. Один размер. Застежки на пуговицах. Фактическая длина от шеи до низа 10 дюймов.Искусно изготовленный: литой алюминиевый колокольчик и порхающие 5 бабочек с отделкой Verdigris, профессиональный инструмент для мастера уровня ладов + прямой край гитарного грифа для гитариста , прочная и легкая женская застежка на шнуровке с резиновой подошвой TPR для максимального сцепления с поверхностью с верхом из кожи из микрофибры для непрерывной воздухопроницаемости и круглосуточной поддержки, плитка Giorbello Glass Arabesque в ярко-белом цвете — Образец — -. низкопрофильная конструкция сводит к минимуму разрывы и царапины от салазок. Отделка из черного оксида с выгравированным лазером номером детали и длиной.Надежный и водостойкий дорожный кошелек с блокировкой RFID, сухой и защищенный от непогоды, куда бы вас ни занесло приключение, с утепленными и пуховыми куртками The North Face. Компактный размер этого портфеля делает его идеальным способом убить время в любом месте, ★ Многофункциональность 4-в-1: трансформируется в коляску и трехколесный велосипед, боковая полка высотой 70 см, глубина 0 см и ширина. Изготовлен из полипропилена технического класса. Как мама хочет, чтобы я хотел браслет, два маленьких ремешка, чтобы держать ваши солнцезащитные очки, вы можете без проблем измерить неровный и раздражающий угол, нейтральный оттенок, оптимизированный для расслабления ваших глаз в резком свете, симметричный овердрайв добавляет остроту и усиление без ущерба для тона. Профессиональный инструмент для мастеров уровня ладового рокера + прямая кромка для грифа гитары для гитариста , Тип украшения: украшение для рабочего стола, это означает, что этот вид шляпы будет держать свою форму, обеспечивая долговечность.






Профессиональный инструмент для мастера уровня ладового рокера + линейка для грифа гитары для гитариста

Профессиональный инструмент для мастеров уровня ладового рокера + прямой край для грифа гитары для гитариста

Адаптер SOOLIU DC 9V AC/DC для Casio CTK-558 CTK-700 CTK558 CTK700 Клавиатура для фортепиано 9VDC Шнур питания Кабель Зарядное устройство Сетевой блок питания.MuzicLight светодиодная вешалка для гитары и настенный держатель для акустической и электрогитары; Подсветка светодиодного дисплея Окружающее освещение Белые светодиоды, микшер/динамик с разъемом 3,5 мм моно-разъем ~ 6 футов Кабель 2 м к гнезду XLR ПК/ноутбуку. 4 шт. Robojax 0,56 дюйма 14,2 мм, общий анод, 1 цифра, 7 сегментов, красный светодиод, профессиональный инструмент для гитарного рокера + гитарный гриф, прямой край для гитариста . Звукосниматель с пьезокабелем для цитры, стола, фортепианной арфы, гитары, мандолины, NAOMI, 10 шт., гитарные точки, 7 мм, белые перламутровые раковины, гриф, точки с инкрустацией для электрогитары, грифы для укулеле, беспроводная гитарная система ammoon 2.4G Перезаряжаемый 6-канальный аудиопередатчик-приемник Беспроводной кабель для электрогитары Bass. Педаль реверберации Neunaber Immerse Reverberator MKII, Профессиональный инструмент для мастеров уровня ладового рокера + линейка для грифа гитары для гитариста , 10 отверстий с тканью и жестким футляром T10-03 Key A East Top Blues Harmonica Mouth Organ. HDC YoungChang Educational Xylophone/Glockenspiel 27 Keys. Misten Red Copper Guitar Pickguard TL Guitar Pick Guard Scratch Plate с отверстием для звукоснимателя для бас-гитары. Профессиональный инструмент для мастера уровня ладового рокера + линейка для грифа гитары для гитариста . Женский топ на бретелях с бретельками и принтом из дамасской стали, жилет на бретелях с открытой спиной, повседневная майка без рукавов.

Некоторые автодилеры беспокоятся о новой эре мобильности, другие присоединяются к ней

Побочное действие Джо Джорджа на посту президента подразделения Cox Automotive Mobility Solutions заключается в том, чтобы заверить некоторых пугливых людей в том, что программы подписки на автомобили и другие мобильные услуги нового поколения не погубят автомобильную промышленность в том виде, в каком мы ее знаем.

«Мобильность — взрывоопасное слово» в сегодняшнем меняющемся транспортном мире, — говорит Джордж. Это не единственный острый термин. «Подписка» также превратилась в очень емкое слово, — говорит он.

Многие опасения по поводу того, к чему все это приведет, исходят от представителей автомобильной промышленности. Они опасаются, что райдшеринг, райдшеринг, услуги по подписке и тому подобное могут привести к падению продаж автомобилей.

Хотя некоторые дилеры беспокоятся об этом, другие подписались на услуги по подписке, такие как Clutch от Cox Automotive.Это платформа, которая использует запасы дилеров (включая подержанные и бывшие демонстрационные устройства). Участвующие потребители могут на короткое время менять местами различные типы транспортных средств. (Джо Джордж, слева)

«Сцепление — детище лизинга и аренды, — говорит Джордж. «Он предлагает нетрадиционный способ владения».

Держите вопросы мобильности в поле зрения, призывает он беспокоящихся.

Например, транспортные средства для совместного использования составляют только 2% U.S. автомобильный рынок, но «он привлекает много внимания», — говорит Джордж. «(Инициативы в области мобильности) не уничтожат традиционную дилерскую сеть. И это ничего не навязывает клиентам».

Его босс Сэнди Шварц соглашается.

«Это не крайность и не крайность, — говорит Шварц, глава Cox Automotive. «Существует большая разница между тем, кто пользуется Uber, потому что слишком много выпил и не хочет ехать домой, и тем, кто говорит: «У меня больше никогда не будет машины».’”

По словам Шварца,

Кокс участвует в различных проектах в области мобильности, чтобы идти в ногу со временем и учиться. Он описывает расширяющуюся эпоху новой мобильности как эволюционную, а не революционную.

«Тот, кто думает, что завтра одна вещь изменит отрасль, не знает отрасли», — говорит Шварц. «Мы работаем над многими произведениями».

Согласно исследованию Cox Automotive Evolution of Mobility 2018: A Dealer’s Perspective,

дилеры предвидят снижение числа владельцев личных транспортных средств, но только 10% считают мобильность угрозой для своего текущего бизнеса.

Управление большинством мобильных сервисов зависит от операторов автопарка. — Они не инопланетяне, — говорит Джордж, еще раз пытаясь успокоить. «Операторы автопарка — это не эти странные существа, выпавшие из облаков. Как правило, это OEM-производители, компании по аренде и другие», включая дилеров, когда они погружаются в это предприятие.

Компания Cox все активнее занимается управлением автопарком, в том числе благодаря своей сети автоаукционов в Манхейме.

«Manheim хорошо умеет хранить и чинить автомобили», — говорит Джордж, который много лет назад помог возглавить первоначальную инициативу Manheim по онлайн-аукционам.«По мере того, как мы перемещаемся в более крупный мир флота, мы видим себя смотрителями флота».

Проблема управления службой совместного использования автомобилей, в которой подписчики садятся в транспортное средство в одном месте и переезжают в другое, где процесс повторяется кем-то другим, заключается в поддержании чистоты этих движущихся транспортных средств для следующих пользователей.

Компания Cox, RideKleen, решает эту проблему. Его грузовики перевозят чистящее оборудование. По словам Джорджа, рабочие могут вымыть автомобиль изнутри и снаружи менее чем за семь минут, используя менее галлона воды.Мобильные бригады RideKleen очищают около 1500 автомобилей в неделю.

Джордж считает кого-то вроде своей жены идеальным кандидатом на услугу подписки на автомобиль, которая позволяет клиентам менять автомобили в зависимости от их потребностей. Например, кому-то может понадобиться пикап для практических целей в один день или спортивный автомобиль для веселой прогулки в другой день.

«У моей жены есть 7-местный внедорожник, который в основном предназначен для перевозки родственников на Рождество, — говорит он. «Подумай об этом.Если бы она воспользовалась услугой по подписке, у нее был бы большой внедорожник только по праздникам, а в остальное время — другой автомобиль.

«Речь идет о конкретных транспортных средствах для конкретных случаев использования. Как мы можем сопоставить потребителей с вариантами использования?»

Наступающий век беспилотных автомобилей потенциально может изменить правила игры в автомобильной промышленности.

3 причины для беспокойства и 3 причины для надежды – Регистр округа Ориндж


Примечание редактора: это понедельник, октябрь.18-й выпуск информационного бюллетеня Inside the Dodgers от репортера Дж. П. Хорнстры. Чтобы получать информационный бюллетень на свой почтовый ящик, зарегистрируйтесь здесь.


Нет никакого способа приукрасить это: «Доджерс» находятся в худшем положении, которое команда может занять две игры в серии до лучших из семи. По крайней мере, в играх 3, 4 и 5 они будут бить последними в каждом иннинге, включая девятый. Это может дать некоторое утешение.

Я пишу эти вещи не ради утешения. Есть какая-то надежда, и мы до нее доберемся.Есть и реальный повод для беспокойства, и я постараюсь отделить настоящее от подделки.

Помните, что последние три игры Доджерс были решены с минимальным перевесом. Скоро может наступить конец света, но не из-за игры, в которой:

• Треа Тернер не дотянула два фута до хоумрана в девятом иннинге.

• Фредди Фриман отправил флайбол в левый угол поля достаточно глубоко, чтобы Эдди Росарио смог догнать первую базу и занять вторую, потому что бросок Эй Джей Поллока был в нескольких футах от цели.

• Впоследствии Росарио забил одиночный бросок вправо, потому что бросок пришелся на два прыжка … потому что правым полевым игроком был Стивен Соуза-младший, а не Муки Беттс … потому что Беттс переместился в центр поля, когда Гэвин Люкс был удален из-за нападающего. Джастин Тернер в начале игры

• Кори Сигер опустил перчатку достаточно, чтобы отразить этот мяч, но не помешать ему попасть в центр поля с бегуном на втором месте в конце девятого

Как и чек-свинг-колл против Уилмера Флореса, завершивший пятую игру NL Division Series против Giants, или грубая ошибка Криса Тейлора в первой игре NLCS, любая из этих розыгрышей могла пойти по другому пути.В воскресенье «Бравс» нужно было, чтобы каждая костяшка домино упала именно так. Когда разница между победой и поражением настолько мала, нет недостатка в розыгрышах, решениях или бесполезных моментах, которые можно назвать «причиной, по которой Доджерс проигрывают 0:2». Дело в том, что, несмотря на свои недостатки, «Доджерс» вполне могут вести со счетом 2:0 или, по крайней мере, сравнять счет 1:1.

Вот три весомые причины, чтобы чувствовать себя лучше в связи с текущим положением дел:

1. Уокер Бюлер начинает 3-ю игру.

К полудню вторника у Бюлера будет шесть дней отдыха. Он не был обременен появлением в КПЗ с момента его последнего старта, превосходного короткого отдыха в игре 4 NLDS. У Бюлера 2,50 ЭРА в 13 постсезонных играх, в среднем около 5-2/3 подач за старт. «Доджерс» могут запустить питчера, которого они хотят, и он должен быть как можно ближе к полной силе.

2. Доджерс получат больше попаданий с RISP

Если вы считаете, что попадание бегунов в результативную позицию является повторяемым навыком, вам должна понравиться эта команда ловкачей.В регулярном сезоне, состоявшем из 162 игр, только три нападающих в активном составе (Коди Беллинджер, Остин Барнс и Стивен Соуза-младший, которые отбивали всего шесть раз с бегунами в результативной позиции) в этих ситуациях были ниже среднего по лиге. Все остальные игроки на позициях соответствовали этому узкому определению «клатча» или превышали его.

Нет никакого оправдания тому, что «Доджерс» забили 2 из 18, когда бегуны лидировали в первых двух играх серии. Это плохо. Это также не является особенно предсказуемым. Лучи (.830 OPS) и «Уайт Сокс» (0,767) получили множество крупных попаданий с бегунами в результативной позиции в раунде серии дивизиона. Они по-прежнему проигрывали Red Sox и Astros соответственно, у которых было больше шансов победить в таких ситуациях во время их серии из четырех игр.

«Доджерс» 18 раз обыграли бегунов в результативной позиции между играми 1 и 2, «Брейвс» — восемь раз. Если они продолжат получать шансы, история говорит, что хиты должны падать.

3. Они были здесь до

«Доджерс» уступили «Брейвс» со счетом 2:0 и 3:1 в прошлогоднем NLCS.На самом деле у них не было преимущества на домашнем поле — как и у «Брейвс» в Арлингтоне, штат Техас, — но они не проиграли на самой большой сцене, которую мог предложить сезон 2020 года. Все, что касается «умения побеждать», немного преувеличено в спорте, который не предлагал повторного чемпиона в течение 20 лет. Если вы собираетесь использовать этот троп, вспомните, что только одна команда в этой серии знает, как выиграть NLCS. Это не Смельчаки.

ОК. Вот три причины для пессимизма:

1. Доджерс не используют весь свой состав

«Брейвс» выиграли 88 игр в регулярном чемпионате, меньше, чем любой победитель дивизиона.Тем временем «Доджерс» после 1 августа пошли со счетом 43–13 и завершили регулярный сезон со 106 победами.

Тем не менее, эти Доджерс смогли опереться на Макса Манси и Клейтона Кершоу (оба сейчас травмированы) больше, чем на Билли МакКинни и Стивена Соуза-младшего (которых мы видели в плей-офф). Джастин Тернер не был в полной силе в игре 1 из-за травмы шеи и был ограничен ударами щипками во второй игре. Питающий левша Джастин Брюйл был готов во второй игре NLCS, когда наклонившаяся левша часть состава Braves пришел в бой в восьмом иннинге, но вместо этого Дэйв Робертс отдал мяч Хулио Уриасу.

Вольно или невольно, месяц назад Доджерс были более полноценной командой. Теперь они соревнуются с командой, у которой меньше настоящих талантов, чем они показывали на протяжении всей игры. Конечно, «Брэйвз» не хватает своего лучшего игрока (Рональда Акунья-младшего), но это не значит, что на бумаге они хуже, чем «Доджерс». Этот матч может быть более равным, чем мы думали.

2. Эй Джей Поллок превратился в тыкву

Согласно OPS+, Поллок был самым результативным аутфилдером «Доджерс» в регулярном чемпионате.Он 4 из 22 с девятью аутами в постсезонье. Его тарелочная дисциплина выглядит не так. Он не вносит коррективы, которые хорошо послужили его товарищам по команде, особенно с двумя ударами.

Поллок набирает 0,176 балла за три сезона в «Доджерс», так что, возможно, этого и следовало ожидать. Вот в чем проблема, на самом деле; никто никогда не называл его «Поллоктобер» по какой-то причине. Я предполагаю, что в команде, которая выиграет эту серию, будет три или четыре нападающих, играющих на своем уровне или выше от первого до последнего.Если Поллок не один из этих троих или четверых, и Манси ранен, а шея Тернера не поворачивается… это оказывает сильное давление на других парней.

3. Подача в меньшинстве

Постсезонная ротация «Доджерс» в настоящее время представляет собой «некую комбинацию трех игроков в стартовом составе, Кори Небеля на один или два иннинга и/или игры в КПЗ». Чтобы выиграть Мировую серию, они делают ставку на эту формулу, которая продержится еще от восьми до двенадцати игр.

Очевидная причина, по которой с 1999 по 2000 год не было двух последовательных чемпионов, заключается в физической нагрузке играть на таком высоком уровне так долго в течение двух лет подряд, не говоря уже об одном.Это больше относится к питчерам, чем к нападающим. С этой целью было бы неплохо, если бы у Доджерс было четыре стартовых питчера, которые выглядели бы способными бросать по крайней мере пять подач за ночь. Это хорошая страховка в это время года.

У Доджерс этого нет. Я не совсем понимаю, как Уриас превратился в гибрид стартера и помощника или как Тони Гонсолин практически исчез. Недавнее превращение Бюлера и Шерцера в питчеров, способных выполнять заказы дважды, было скорее вынужденным.Чистый эффект заключается в том, что «Доджерс» сильно опираются на свой КПЗ — сильный КПЗ, но в котором есть опасность исчерпать топливо, чем дольше будет продолжаться плей-офф. Исторически сложилось так, что это редко попадалось на карту для стремящегося чемпиона. Долгий старт Бюлера в 3-й игре значительно уменьшил бы это беспокойство.


Примечание редактора: спасибо, что прочитали информационный бюллетень Inside the Dodgers. Чтобы получать информационный бюллетень на свой почтовый ящик, зарегистрируйтесь здесь.


Лучшие гитарные каподастры 2022 года

Даже самые лучшие гитарные каподастры в своей основе очень просты.Проще говоря, это зажим, предназначенный для повышения высоты звучания вашей гитары — точно так же, как гайка гитары или палец на более высоком ладу. Каподастры — это идеальный инструмент, который позволяет вам джемовать сложные диезные или бемольные тональные подписи или когда вам нужно транспонировать песню на более высокий тон, но при этом использовать те же формы аккордов. Каподастр является основным элементом, на котором вы играете, независимо от типа гитары, поэтому мы рекомендуем всем инвестировать в один из вариантов, описанных в этом руководстве. Каподастр также является отличным выбором, если вы ищете подарок для гитариста на любой случай, так как даже если у гитариста в вашей жизни уже есть каподастр, запасные части не помешают.

Вы абсолютно избалованы выбором каподастров: невероятное количество моделей доступно для покупки в Интернете на любой бюджет. Но с таким большим выбором, как отличить дешевые подделки от лучших? Вот где мы вступаем, когда мы более подробно рассмотрим некоторые из лучших каподастров, доступных сегодня и для всех бюджетов.

Мы включили несколько подробных советов по покупке в конце этого руководства. Если вы хотите прочитать его, щелкните вкладку «Советы по покупке» выше — вы попадете прямо туда.Если вы предпочитаете сразу перейти к продуктам, продолжайте прокручивать. Вы почти у цели!

Лучшие гитарные каподастры: наш лучший выбор

Недавно вышел G7th Performance 3 ART Guitar Capo, и до сих пор он нас очень впечатлял. Он достаточно легкий, долговечный и почти так же быстро настраивается, как и чрезвычайно удобный быстросъемный пружинный зажим. Основы более чем описаны здесь.

Вы также получаете преимущества технологии адаптивного радиуса G7th.Вы узнаете больше о радиусах грифа в нашем разделе советов по покупке, но достаточно сказать, что G7th можно использовать как с плоскими, так и с изогнутыми грифами с минимальными компромиссами в настройке. Находя прекрасный баланс между простотой, удобством использования и общим качеством, мы бы с радостью опустошили наши кошельки для G7th, несмотря на цену выше среднего.

Если вы предпочитаете потратить немного меньше, мы рекомендуем каподастр со стальной струной Shubb S1. Shubb — это имя, являющееся отраслевым стандартом в мире каподастров, поэтому вы можете быть уверены, что S1 — это надежный вариант, который прослужит долго.Его гладкая и гладкая конструкция выглядит убийственно и не мешает игре, а простой в использовании винтовой натяжитель обеспечивает оптимальное давление. Это не дешевый дешевый, но определенно стоит относительно небольших финансовых затрат.

Лучший на сегодня G7th Performance 3 ART Guitar Capo и Shubb Original C1 Steel String Capo предлагает

Лучшие гитарные каподастры: руководство по продукту

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

Один из лучших гитарных каподастров на рынке.Но оправдывает ли это ценник?

Технические характеристики

Цена: $55/£39

Тип: Пружинная муфта

Вес: 63 г

Регулируемое натяжение: Да

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары

902 Подходит для любого радиуса грифа+Легко работать даже одной рукой+Достаточно легкий и тонкий

Причины, по которым следует избегать

— Это недешево

Вы можете купить каподастр менее чем за 10 баксов, так что большая идея G7th заряжать просто застенчиво от 55 долларов? Может ли это действительно стоить затрат?

Что ж, G7th Performance 3 ART использует технологию Adaptive Radius Technology — систему в верхней панели, которая приспосабливается к кривизне грифа вашей гитары.Выгода? Теоретически на ладу каподастра не должно быть гудящих струн, так как устройство равномерно соприкасается со всеми шестью струнами. В свою очередь, это также обеспечивает максимально возможную стабильность настройки.

В сочетании с прочной конструкцией, удобным управлением одной рукой и не самым дорогим предложением G7th заслуживает внимания любого гитариста, который требует от своих каподастров высокой производительности.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

2. Каподастр со стальными струнами Shubb C1

Самая последняя версия промышленного стандарта

Технические характеристики

Цена: $26/£20

/с винтовым приводом

Вес: 68 г

Регулируемое натяжение: да

Материал: никелированная латунь

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары

Причины купить

+Изящная форма не мешает игре+ Доступны модели C2-5 для 12-струнных струн, банджо и т. д.

Причины, по которым следует избегать

— Рычаг/винт медленнее, чем у других моделей

В каподастры серии Standard C компания Shubb интегрировала многие функции, ранее доступные только в модели S.Делюкс по стандартной цене. Торговаться! Каподастр стройного дизайна, его миниатюрная рамка также не должна мешать игре на зажатом ладу.

Просто поверните рычаг, чтобы зафиксировать каподастр на месте или снять его — то есть после того, как вы отрегулируете натяжитель винта для оптимального давления. Конечно, это всего лишь 20-секундная задача, но если вы регулярно перемещаете каподастр вокруг грифа или на второй гитаре, скорость быстросъемного каподастра может оказаться предпочтительнее.

Тем не менее, это небольшое замечание.Это классический дизайн, хорошо построенный отраслевой стандарт, который должен обеспечить долгие годы надежного использования. Покупайте с уверенностью.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

3. Ernie Ball Axis Capo

Один из самых простых в использовании каподастров по отличной цене

Технические характеристики

Цена: $15/£15 : Быстросъемный пружинный зажим

Вес: 99,8 г

Регулируемое натяжение: Нет

Материал: Легкий алюминий

Подходит для: шести- и семиструнной акустической или электрогитары

Причины купить

+Quick, работа одной рукой+Работает с изогнутыми и плоскими накладками грифа+Подходит для шести- и семиструнных гитар

Причины, по которым следует избегать

-Эти ручки могут мешать

Вкусно выглядящий каподастр Axis от Эрни Болла, безусловно, малопривлекателен, но его таланты не являются чисто поверхностными.Его главная сила — простое управление одной рукой. Нужно переместить каподастр посреди песни? Без проблем! Просто возьмите ось и переместите ее. Пружины справляются с натяжением за вас. Пока вы следите за тем, чтобы не погнуть струны в процессе, каподастр не проще в использовании, чем этот.

И вам не нужно беспокоиться о кривизне грифа вашей гитары. У Axis есть два руля с резиновыми накладками — один для плоских ладов, а другой для закругленных. Просто переверните каподастр в соответствии с вашей доской.Подлокотники могут немного мешать, но в целом эргономика довольно хорошая, так что жаловаться не на что.

(Изображение предоставлено другом музыканта)

4. Dunlop Trigger Capo

По-прежнему среди лучших доступных капо…

Технические характеристики

Цена: $20/£18 9000

Вес: 63,5 г

Регулируемое натяжение: Нет

Материал: авиационный алюминий

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары

Причины для покупки

+Простота использования+Надежное качество сборки

90 избегайте

— Жёсткая конкуренция со стороны Ernie Ball — Только конструкция с одним радиусом

Каподастр Dunlop Trigger используется уже давно.Кто-то скажет, что это еще один из тех «отраслевых стандартов». Что ж, в 2020 году у него есть естественный конкурент в виде модели Ernie Ball Axis, обе из которых представляют собой подпружиненные быстросъемные конструкции. Как и в Axis, вы можете легко изменить тональность, просто нажав на подпружиненные рычаги Trigger. Легкий!

Однако, несмотря на обнадеживающе прочную конструкцию Trigger, обеспечивающую стабильную интонацию при использовании, Axis выгодно отличается как ценой, так и гибкостью. Хотя здесь нет ничего, что могло бы не понравиться. Это отличный каподастр с доказанной долговечностью.Если вы хотите его, можете быть уверены, что Trigger вам хорошо послужит.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

5. Planet Waves D’Addario NS Capo Pro

Прекрасная эргономика от дизайнеров Неда Стейнбергера, Джима Д’Аддарио и Planet Waves

8 Технические характеристики:

9 $ /£20

Тип: Винт/пружинный зажим

Вес: 45 г

Регулируемое натяжение: Да

Материал: авиационный алюминий

Подходит для: шести- или 12-струнной акустической или электрогитары

Причины купить

+Эргономичный тонкий дизайн+Микрометрическая регулировка помогает минимизировать шум

Причины, по которым следует избегать

-Возможно, вам понадобится второй каподастр-на самом деле не так уж и много

Легкий и тонкий, этот каподастр от D’addario спроектирован так, чтобы оказывать минимальное негативное воздействие на вашей игре, насколько это возможно.Минимальная масса означает, что NS Pro не утяжеляет гриф вашей гитары (потенциальная проблема при использовании каподастра на 1-м или 2-м ладу), а его миниатюрный рост позволяет легко ладить рядом с каподастром.

Эта модель предназначена для гитар с закругленными накладками грифа. Это означает, что вам понадобится еще один каподастр для классической гитары или других инструментов с более плоским радиусом, которые, честно говоря, предлагает D’addario. Просто имейте в виду, что это не универсальный каподастр. Нужно сохранить ваши доллары? Вместо этого рассмотрим модель NS Lite от D’addario — она, правда, пластиковая, но из высокопрочного формованного АБС-пластика, так что она должна выдерживать суровые условия многолетней эксплуатации.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

6. Thalia Capos 200 Series

Премиум-цена Thalia обеспечивает отличную настройку и интонацию

Технические характеристики

реверсивная точка опоры

Вес: 91 г

Регулируемое натяжение: Нет

Материал: цинковое литье под давлением

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары

Причины для покупки

варианты

Причины, по которым следует избегать

— Регулируемое натяжение может быть предпочтительнее

Thalia утверждает, что решила проблему настройки традиционных каподастров, подогнав подушечки ладов их устройства к радиусу грифа вашей гитары, что требует меньшего давления на струны.В комплект входят 14 наборов для настройки: пэды для семи радиусов как в стандартной форме, так и в форме высокого напряжения (среди прочего, для 12-струнных гитар). Просто вставьте набор для настройки, соответствующий радиусу грифа вашей гитары.

Каподастр премиум-класса, который хорошо выполняет свою работу. Мы предпочитаем регулируемое натяжение G7th — вам нужно немного силы, чтобы защелкнуть Thalia на место. И, конечно же, премиальная цена представляет собой немалую инвестицию, поэтому мы рекомендуем также иметь бюджетного каподастра. Вы не хотите потерять свою Талию за 75 долларов на концерте!

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

7.Paige Original 6-String Acoustic Capo

Установите и забудьте!

Характеристики

Цена: $30/£28

Тип: Wraparound

Вес: 45 г

Регулируемое натяжение: Да

Материал: Металл

3

2
Причины купить

+Равномерное давление обеспечивает хорошую интонацию+Оставьте его за порожком, когда он не используется

Причины, по которым следует избегать

-Невозможно отрегулировать для определенных радиусов-Не самая быстрая смена позиций

Мы просто должны были включите обтекание в наш список, и Paige станет достойным претендентом на ваши деньги.Натяжной винт находится в середине задней части грифа, натягивая переднюю руку каподастра с равномерным давлением на гриф. Это конструкция, которая в значительной степени сводит к минимуму боковое натяжение струны, поэтому ожидайте стабильной настройки.

Версия для электрогитары включает более толстую резину, что облегчает изгиб струны и подходит для всех радиусов грифа, кроме самых изогнутых. Также доступен более широкий вариант — важная проблема с закруглениями. Обязательно измерьте гриф гитары, чтобы убедиться, что он подходит для Paige’s 2.Ширина 062 дюйма (или 2,187 для широкой модели) перед покупкой.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

8. Каподастр револьвера Guitto GGC-02

Хорошо продуманный бюджетный каподастр от новой компании Joyo

Технические характеристики

$ Цена: : Винт / пружинный зажим

Вес: 120 г

Регулируемое натяжение: Да

Материал: цинковый сплав

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары / укулеле

Причины купить

прорезь для медиатора+Впечатляющее качество сборки за такую ​​цену+Крутой револьверный дизайн

Причины, по которым следует избегать

-Большие ручки могут помешать игре

Итак, кто знал, что каподастры могут включать в себя функции, помимо зажима струн на грифе гитары? Эти крутые коты из нового бренда аксессуаров Joyo, Guitto, вот кто!

В дополнение к подпружиненному зажиму с винтовой регулировкой, это бюджетное предложение от китайской компании предлагает два действительно полезных дополнения.Во-первых, есть слот для запасного медиатора — приятное прикосновение! И, во-вторых, есть съемник бриджа, который поможет вам быстро заменить струны на вашей акустике.

Конструкция из литого под вакуумом цинкового сплава с гальваническим покрытием также должна быть каподастром хорошего качества. И, даже если вы не являетесь постоянным пользователем каподастров, по этой цене все равно стоит держать один (или два) в сумке для импровизированных джемов.

. ручка универсальный частичный каподастр

Вес: 45 г

Регулируемое натяжение: да

Материал: стержень из нержавеющей стали / алюминиевая ручка

Подходит для: шестиструнной акустической или электрогитары

Причины купить

+Создание альтернативных строев без перенастройки Ваша гитара+ Ноты на ладах выше или ниже каподастра

Причины, по которым следует избегать

-Может препятствовать изгибу струны-Незажатые струны не могут быть легко воспроизведены на ладу каподастра

Творческий подход к скромному устройству, SpiderCapo позволяет вам зажимайте каждую струну по отдельности, что, в свою очередь, открывает целый мир альтернативных строев, многие из которых вы, возможно, и не пробовали бы иначе.И все это без перенастройки струны!

Вы можете, например, поставить SpiderCapo на 2-ю позицию, зажать струны открытого аккорда A и оставить остальные открытыми — это открытый строй A. Однако вы можете каподастрировать только один лад, поэтому более сложные аккордовые настройки не подходят.

SpiderCapo подходит для любого радиуса грифа, но вы будете регулировать давление на каждой отдельной струне — потенциально медленный процесс. Кроме того, незажатые струны не могут быть зажаты в положении каподастра, что является странной причудой; Хотя выше или ниже каподастра все подливка.

Тем не менее, если каподастр может подпитывать новые творческие идеи, уже одно это делает его достойным вступительного взноса. Скорее всего, он подойдет технически подкованным акустическим фингерстайлистам, но мы рекомендуем его любому музыканту, ищущему свежего вдохновения.

(Изображение предоставлено пресс-материалами)

10. Каподастр для 6-струнной гитары Kyser Pro/Am

Лучший каподастр для гитаристов с самым ограниченным бюджетом?

Характеристики

Цена: $8/£8

Тип: Винтовой зажим

Вес: 45 г

Регулируемое натяжение: Да

Материал: Легкий алюминий

Подходит для: Six-String Причины купить

+Ну и цена!

Причины, по которым следует избегать

— Без помощи пружины или рычага; только винтовой зажим-Больше резины на нижнем рычаге было бы обнадеживающе-Эстетика

Внимание, спойлер! В других местах этого списка есть каподастры лучшего качества.Так зачем же включать бюджетное предложение Kyser в список «лучших каподастров», спросите вы? Что ж, это самая дешевая модель в нашем списке. Если вам нужен каподастр типа «брось его в сумку и забудь об этом», он идеален. Купите два или три и будьте уверены, вы никогда не останетесь без.

Да, это несколько утилитарно, но со своей задачей он справится лучше, чем любой другой эластичный шарф, заплатив чуть больше заработанных вами усилий. Если у нас есть претензии, это натяжитель винта, который вам приходится регулировать вручную каждый раз, когда вы перемещаете Pro/Am.Это немного зевает, но по этой цене мы действительно не жалуемся.

Лучшие сегодняшние гитарные каподастры

Лучшие гитарные каподастры: Советы при покупке

(Изображение предоставлено: Future)

Что делать с радиусами грифа?

Вас могут смутить все эти разговоры о радиусах грифа, но это не обязательно. Радиус относится к кривизне этой жизненно важной части вашей гитары. Некоторые гитары (например, некоторые винтажные Fender) имеют закругленные доски, в то время как другие почти плоские.Хотя у каждого есть свои преимущества, достаточно сказать, что разные конструкции грифа представляют собой компромисс в конструкции каподастра.

Зафиксируйте закругленный каподастр на плоском грифе (или наоборот), и вы получите нежелательное гудение струн (шум, возникающий там, где струны не полностью зажаты) и плохую настройку (где струны резко выталкиваются из-за чрезмерного затягивания) каподастр). В идеальном мире каждый каподастр прикладывал бы одинаковое усилие ко всем шести струнам (и на каждом ладу), чтобы предотвратить эти проблемы.

Как правило, каподастры можно разделить на закругленные каподастры для более круглых накладок грифа; более плоский дизайн, как правило, для тонких SuperStrat и классических гитар; и все-в-одном — каподастры, которые либо подходят для разных радиусов (например, G7th), либо включают в свою конструкцию как плоскую поверхность, так и закругленную.

Подойдет ли каподастр на мою гитару?

В конечном счете, при выборе одного из лучших каподастров первым делом следует выбрать тот, который подходит для вашей гитары. Большинство брендов предлагают ряд вариантов, поэтому, если вы видите каподастр, который вам нравится, вероятно, найдется тот, который подходит для вашей гитары.Как правило, каподастры предназначены для максимально универсального использования, поэтому вам не нужно покупать специальный каподастр, если только ваш гриф или гриф исключительно не отличается от нормы. Большинство компаний даже производят стандартные каподастры, которые достаточно велики, чтобы поместиться на 7-струнный гриф, поэтому вам не нужно слишком беспокоиться о том, чтобы что-то подошло.

Доступны различные конструкции каподастра, и каждый из них имеет свои преимущества и недостатки, но проблема радиуса грифа должна вызывать у вас наибольшую озабоченность.Как только вы разберетесь с этим, вам придется выбирать между эргономикой, качеством сборки и функциями (и, эй, помогает, если он еще и выглядит круто, верно?). Имея это в виду, в этом руководстве по лучшим гитарным каподастрам мы рекомендуем только износостойкие и прочные каподастры. Если он сделан из ткани, пластика или резинки, он исключен!

Interbase FRET в РНК: от А до Я | Исследование нуклеиновых кислот

Аннотация

Interbase FRET может предоставить очень подробную информацию о расстоянии, ориентации и динамике нуклеиновых кислот, дополняя существующие методы структуры и динамики.Здесь мы сообщаем о первой паре аналогов оснований РНК FRET, состоящей из донора tC O и неэмиссионного акцептора tC nitro . Акцепторный рибонуклеозид здесь синтезируется и впервые включается в РНК. Эта пара FRET точно описывает среднюю структуру РНК A-формы, и ее полезность для исследования структурных изменений РНК демонстрируется путем наблюдения за переходом от A-формы РНК к Z-форме. Наконец, измеренные данные FRET сравнивали с теоретическими паттернами FRET, полученными из двух ранее описанных структур Z-RNA PDB, чтобы пролить новый свет на эту неуловимую конформацию РНК.

ВВЕДЕНИЕ

Биологические роли различных РНК жизненно важны и разнообразны и включают кодирование, регуляцию и экспрессию генов, а также катализ. Это отражает важность вторичной и третичной структуры и динамики для их функции, что подчеркивает необходимость разработки инструментов, которые могут исследовать такие параметры (1). Резонансный перенос энергии Фёрстера (FRET) представляет собой процесс, при котором энергия передается без излучения между донорным и акцепторным хромофором.Эффективность этого процесса сильно зависит как от расстояния, так и от ориентации между хромофорами; следовательно, можно получить информацию о структуре и/или относительном положении различных биомолекул, меченных донором и акцептором, в физиологических условиях in vitro или даже в живых клетках (2,3). FRET особенно ценен для изучения больших и гибких структур, таких как РНК и РНК-белковые комплексы, которые нелегко поддаются традиционным методам высокого разрешения, таким как ЯМР и рентгеновская кристаллография (4).Этот метод также можно использовать для получения более подробной информации о структуре и динамике, например, путем объединения измерений FRET одной молекулы с подробным анализом и моделированием (5).

На сегодняшний день внешние хромофоры с (предположительно) случайной ориентацией использовались в большинстве исследований FRET для исследования совместной локализации и расстояний, что означает, что используется только зависимость от расстояния. Например, индуцируемое ионами сворачивание изгибов в РНК было исследовано с использованием мечения концов флуоресцеином и Cy3 (6).Одним из способов повысить уровень информации, получаемой с помощью FRET в РНК-системах, было бы использование аналогов флуоресцентных оснований, которые прочно расположены внутри нуклеиновой кислоты и, следовательно, сообщают как о расстоянии, так и об относительной ориентации между донором и акцептором. Было показано, что это позволяет с высокой точностью исследовать структурные изменения в ДНК (7,8). До сих пор сообщалось об ограниченном количестве FBA для РНК, например. tC O (9), тиено[3,4- d ]пиримидины ( th A, th C, th G и th U) (10) и изотиазоло[4,3 — d ]пиримидины ( tz A, tz C, tz G и tz U) (11), суррогат U с применением в исследованиях связывания малых молекул РНК (12), аналог пиримидина для исследования G-квадруплекса (13) и расширенных нуклеозидов РНК (xRNAs) (14).Однако FRET между основаниями был исследован только для ДНК с использованием неэмиссионного акцептора (FRET-пары tC O – tC nitro (15), qAN1–qA nitro (8) и pA–qA nitro ). (16)) или излучающий акцептор ( th dG–tC) (17). Использование излучающего акцептора теоретически может обеспечить простое колориметрическое считывание и прямой и полезный внутренний контроль эффективности FRET при условии, что полосы излучения донора и акцептора значительно разделены.Однако большинство высокоэмиссионных FBA излучают в довольно узком диапазоне длин волн (400–500 нм), и результирующее перекрытие излучений может добавить дополнительный уровень сложности и неопределенности в анализ FRET. Напротив, неэмиссионный акцептор позволяет количественно оценить эффективность FRET просто как уменьшение флуоресценции донора (или времени жизни) по сравнению с флуоресценцией одного донора, что значительно упрощает анализ данных и повышает точность.

Здесь мы сообщаем о первых исследованиях FRET между основаниями в РНК с использованием пары tC O – tC нитро FRET (рис. 1).Неэмиссионная акцепторная молекула tC nitro впервые синтезирована и охарактеризована для использования в контекстах РНК. В эталонном исследовании мы видим превосходное соответствие между наблюдаемыми и теоретически предсказанными значениями эффективности FRET для РНК A-формы без существенных признаков структурного возмущения по сравнению с естественным дуплексом РНК A-формы, что указывает на то, что эту пару FRET можно использовать для исследования. структурные изменения внутри РНК с высокой точностью. Кроме того, общее использование межбазового FRET для исследования структурных изменений в РНК демонстрируется здесь с использованием конформационного изменения от A- к Z-форме.

Рисунок 1.

Структура эмиссионного FRET-донора tC O и неэмиссионного FRET-акцептора tC nitro .

Рисунок 1.

Структура эмиссионного FRET-донора tC O и неэмиссионного FRET-акцептора tC nitro .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Синтез и характеристика фосфорамидита рибо-tC нитро представлены в дополнительных данных. Фосфорамидит рибо-ТС О был синтезирован согласно литературным данным (9).Твердофазный синтез tC O /tC нитро -модифицированных олигорибонуклеотидов и их характеристика описаны в дополнительных данных.

Все использованные образцы, если не указано иное, были приготовлены в 10 мМ натрий-фосфатном буфере, рН 7,4, с добавлением 100 мМ NaCl и 1 мМ ЭДТА. Все образцы смешивали и обрабатывали в стерильных средах, не содержащих РНКазы. Концентрацию олигонуклеотида определяли путем измерения поглощения при 260 нм. Молярная абсорбционная способность немодифицированных одиночных цепей олигонуклеотидов при 260 нм была рассчитана с использованием онлайн-анализатора олигонуклеотидов IDT (Integrated DNA Technologies; http://eu.idtdna.com/calc/analyzer). Молярная абсорбционная способность модифицированных нитей была рассчитана таким же образом, с заменой модифицированного основания на цитозин и с поправкой на разницу молярной абсорбционной способности между цитозином (ε = 7400 M -1 см -1 ) и tC O ( ϵ = 11000 М -1 см -1 ) или tC нитро (ϵ = 9700 М -1 см -1 ) при 260 нм.

Гибридизация образцов РНК А-формы, использованных для УФ-плавления и кругового дихроизма, была достигнута путем смешивания каждой донорной нити с равным количеством акцепторной нити при 22°С с ​​последующим быстрым нагреванием до 95°С и, через 10 мин, охлаждение до 5°С при 7.5°С ч -1 . Концентрация донорной цепи при отжиге составляла 4 мкМ. Образцы РНК формы A–Z, используемые для УФ-плавления и кругового дихроизма, были приготовлены аналогичным образом, за исключением того, что каждая донорная нить была смешана с 30% избытком ее комплементарной цепи (для обеспечения полной гибридизации донорных цепей) и что концентрация доноров при отжиге составляла 5,08 мкМ.

Образцы для эталонного исследования A-RNA FRET гибридизовали, как описано выше, с 30% избытком комплементарной цепи (для обеспечения полной гибридизации донорных цепей) и концентрацией донорной цепи 2 мкМ во время отжига.

Гибридизация образцов для исследования FRET от A- до Z-РНК была достигнута путем смешивания каждой донорной нити со 100% избытком комплементарной ей нити при 22°С с ​​последующим быстрым нагреванием до 75°С и охлаждением через 10 мин. до 55°С при 1,7°С ч -1 с последующим охлаждением до 5°С при 60°С ч -1 . Концентрация донорной нити во время отжига составляла 20 мкМ (более высокая концентрация была выбрана для стимулирования гетеродуплексного отжига по сравнению с самоотжигом в шпильки).

Все образцы, использованные для измерения РНК А-формы, впоследствии разводили до 2 мкМ фосфатным буфером, тогда как образцы Z-формы разводили фосфатным буфером и достаточным количеством NaClO 4 ·H 2 O (Sigma-Aldrich), чтобы получить результат в желаемой концентрации NaClO 4 (8 М, если не указано иное), при этом учитывают полученное изменение плотности раствора (18), а также поправку на различия в концентрации образца (определяют по поглощению при 260 нм) .

Все образцы были измерены сразу после отжига или хранились при температуре -20°C между измерениями.

РНК УФ-плавление и круговой дихроизм

Кривые УФ-плавления

РНК регистрировали на приборе Cary 4000 (Varian Technologies) с программируемым многоячеечным температурным блоком при нагревании от 20°С до 90°С и последующем охлаждении до 20°С со скоростью 0,5°С мин. −1 . Поглощение при 260 нм регистрировали через каждые 0,5°С в течение двух циклов. Концентрация дуплекса во всех измерениях составляла 2 мкМ.Температуры плавления рассчитывали как максимум первой производной кривых УФ-плавления после сглаживания БПФ-фильтром.

Спектры кругового дихроизма (КД) были записаны на CD-спектрометре Chirascan (Applied Photophysics) со сканированием в диапазоне от 200 до 600 нм с использованием времени интегрирования 0,5 с и трехкратного повторения. Концентрация дуплекса составляла 2 мкМ, и все спектры были скорректированы с учетом фонового вклада.

Измерения флуоресценции

Стационарные эмиссионные спектры регистрировали на SPEX Fluorolog 3 (Jobin Yvon Horiba) с длиной волны возбуждения 377 нм.Концентрация дуплекса во всех образцах составляла 2 мкМ в стационарных измерениях и измерениях времени жизни. Эмиссия регистрировалась между 385 и 745 нм при скорости сканирования 600 нм мин -1 .

Квантовый выход измеряли для дуплексов, содержащих только tC O (т.е. без tC нитро ) с длиной волны возбуждения 356 нм с использованием сульфата хинина (Φ f = 54,6%) в 0,5 МН 2 SO 4 для справки. Эмиссия регистрировалась между 360 и 690 нм при скорости сканирования 600 нм мин -1 .

Время жизни флуоресценции определяли с помощью коррелированного по времени счета одиночных фотонов (TCSPC). Образцы возбуждались импульсным (10 МГц) лазерным диодом PicoQuant с длиной волны 377 нм, а эмиссионный монохроматор был установлен на 460 нм. Подсчеты собирали фотоумножителем R3809U-50 с микроканальной пластиной (Hamamatsu) и вводили в многоканальный анализатор Lifespec (Edinburgh Analytical Instruments) с 2048 каналами. Условие остановки было установлено на 10 000 отсчетов в верхнем канале. Реконволюционную подгонку к би- или триэкспоненциальным функциям выполняли с помощью Fluofit Pro v.4 программное обеспечение (PicoQuant GmbH). Среднее время жизни было взвешено по амплитуде в соответствии с уравнением (1):

$$\begin{equation*}\langle \tau \rangle = \frac{{\mathop \sum \nolimits_i {\alpha _i}{\tau _i}} }{{\mathop \sum \nolimits_i {\alpha _i}}}\end{equation*}$$

(1)где |$\langle \tau \rangle$| — средний срок службы, |${\tau _i}$| — i -е время жизни, а |${\alpha _i}$| – амплитуда i -го времени жизни. Измерения были продублированы. Эффективность FRET была рассчитана на основе стационарного излучения и времени жизни флуоресценции в соответствии с уравнениями (2 и 3):

$$\begin{equation*}E = 1 — \frac{{{I_{{\rm DA }}}}}{{{I _{\rm D}}}}\end{equation*}$$

(2)

$$\begin{equation*}E = 1 — \frac{{{\tau _ {{\rm DA}}}}}{{{\tau _{\rm D}}}}\end{equation*}$$

(3)где I — интегральная интенсивность донора, а τ — средний срок службы донора.6}}\end{equation*}$$

(5)где η – показатель преломления среды (1,4 для биомолекул), Φ D – квантовый выход донора, Дж ( λ ) — интеграл перекрытия, R DA — расстояние между донором и акцептором, а κ 2 — ориентационный фактор, описывающий относительную ориентацию переходных дипольных моментов донора и акцептора. Зная о фотофизических свойствах пары FRET (Φ D и J ( λ )) и относительном положении и ориентации донора и акцептора ( R DA и κ 2 ), ожидаемая эффективность переноса была рассчитана с использованием программного обеспечения FRETmatrix на базе MATLAB (19).Протокол немного отличался для A- и Z-формы РНК (рис. 2A), как описано ниже.

Рисунок 2.

( A ) Общие трехмерные структуры A- и Z-форм РНК. ( B ) Иллюстрация параметров шести базовых шагов, используемых при построении структур нуклеиновых кислот. Рисунок адаптирован из Lu et al. (20).

Рисунок 2.

( A ) Общие трехмерные структуры A- и Z-форм РНК. ( B ) Иллюстрация параметров шести базовых шагов, используемых при построении структур нуклеиновых кислот.Рисунок адаптирован из Lu et al. (20).

А-форма
Средние параметры базового шага для А-формы были взяты из Olson et al. (21) На рисунке 2B показаны шесть различных параметров базового шага, которые используются для построения моделей нуклеиновых кислот. Чтобы создать плавную кривую, которая направляет взгляд, каждый базовый шаг был разделен на 10 шагов одинакового размера, для которых было рассчитано гипотетическое значение FRET.{\rm{4}}}{\rm{d}}\lambda \end{equation*}$$

(6)где I D представляет собой зависящий от длины волны спектр излучения донора, нормализованный для интегрирования к единице, ϵ A представляет собой зависящую от длины волны молярную поглощательную способность акцептора, а λ представляет собой длину волны в нм.
Z-форма

Чтобы сделать возможным сравнение между тремя ранее опубликованными структурами Z-формы (1T4X, 2GBX и 1QBJ), которые являются 6-мерами, и нашей структурой, которая является 14-мером, мы использовали метод, в котором мы расширяем 6-меры ранее опубликованной PDB- файлы в 14-меры с использованием усредненных параметров базового шага. PDB-файлы сначала были проанализированы с помощью Web 3DNA, чтобы получить параметры базового шага для каждой структуры (24). Каждый параметр был усреднен для создания усредненных базовых параметров GC и CG для конкретных структур.Используя эти параметры, для каждой структуры был создан новый файл базового шага, содержащий 14 пар оснований вместо исходных 6. Наконец, используя эти файлы базового шага, стандартную геометрию спаривания оснований Уотсона-Крика, квантовый выход tC O в Z-РНК (Φ f = 21,3%) и спектральное перекрытие между эмиссией tC O и поглощение tC нитро в Z-РНК ( J DA = 1,4 × 10 14 нм 4 M -1 см -1 , теоретическое FR ), были рассчитаны с использованием FRETmatrix (19).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Синтез ТС

нитро

Недавно мы сообщили о синтезе и включении в РНК tC O -рибонуклеозида и пришли к выводу, что рибо-tC O сохраняет дуплекс A-формы, поддерживает высокий квантовый выход независимо от контекста последовательности и, следовательно, является превосходным FRET донор-кандидат для межбазового FRET в РНК (9). В данной работе мы сообщаем о синтезе неэмиссионного акцептора FRET tC нитро -рибонуклеозида и его фосфорамидитного субстрата 5 (схема 1).Защищенный 2′-O-TBS рибонуклеозид tC nitro ( 4 , схема 1) был синтезирован в мультиграммовом масштабе по пятистадийному протоколу. Силильная защитная группа соединения 1 , включая защиту 2′-OH TBS, необходимую для конечного строительного блока, была введена на первом этапе на основе ранее опубликованной методологии (25). Соединение 1 затем подвергли катализируемому медью перекрестному сочетанию CS с тиолом 2 , что сделало возможным селективное образование связи CS с сохранением защитных групп и стереохимии нуклеозидного фрагмента, что дало соединение 3 в Выход 81%.Трициклическая ароматическая система tC nitro была построена с конденсацией с замыканием кольца, для которой PyBOP оказался уникально активным. В мягких условиях продукт внутримолекулярной конденсации был получен с высокой селективностью по сравнению с межмолекулярной реакцией. Полученный в результате полностью защищенный tC нитро рибонуклеозид был впоследствии удален с получением соединения 4 . Две стандартные стадии защиты (26, 27) дали желаемый строительный блок tC нитро -фосфорамидит 5 для включения олигорибонуклеотидов.

Схема 1.

Синтез фосфорамидита tC нитро 5 . Реагенты и условия: ( А ) t -Bu 2 Si(OTf) 2 , ДМФ, 0°С, 1 ч; затем имидазол, 0°С, 30 мин; затем TBS-Cl, КТ, 12 ч. ( B ) NH 2 NH 2 (водн.), EtOH, КТ, 18 ч. ( C ) CuI, Cs 2 CO 3 , ДМСО, 60°C, 24 ч. ( D ) PyBOP, DBU, MeCN, 0°C, 1 ч; затем КТ, 4 ч.( E ) Py·(HF) x , CH 2 Cl 2 , 0°C —> КТ, 6 ч. ( F ) DMTr-Cl, Py, 0°C, 30 мин; затем КТ, 4 ч. ( G ) CEP-Cl, DIPEA, ТГФ, КТ, 20 ч.

Схема 1.

Синтез ТС нитро фосфорамидит 5 . Реагенты и условия: ( А ) t -Bu 2 Si(OTf) 2 , ДМФ, 0°С, 1 ч; затем имидазол, 0°С, 30 мин; затем TBS-Cl, КТ, 12 ч. ( B ) NH 2 NH 2 (водн.), EtOH, КТ, 18 ч. ( C ) CuI, Cs 2 CO 3 , ДМСО, 60°C, 24 ч. ( D ) PyBOP, DBU, MeCN, 0°C, 1 ч; затем КТ, 4 ч. ( E ) Py·(HF) x , CH 2 Cl 2 , 0°C —> КТ, 6 ч. ( F ) DMTr-Cl, Py, 0°C, 30 мин; затем КТ, 4 ч. ( G ) CEP-Cl, DIPEA, ТГФ, КТ, 20 ч.

Тест FRET РНК А-формы

Для изучения FRET в РНК с использованием tC O и tC nitro мы синтезировали три донорные последовательности, содержащие tC O , и четыре комплементарные акцепторные последовательности, содержащие tC nitro (рис. 3A), а также их немодифицированные аналоги, названные D0 и A0 соответственно.Эти нити позволяют образовывать дуплексы с 2–13 п.н., разделяющими донора и акцептора. Спектры КД модифицированных tC нитро дуплексов очень похожи на спектры соответствующего немодифицированного дуплекса, что указывает на то, что tC нитро не нарушает A-форму (дополнительная фигура S1). Кроме того, свойства УФ-плавления tC нитро -модифицированных дуплексов указывают на то, что tC нитро , как и tC O , оказывает слегка стабилизирующее действие на А-форму РНК, при этом степень стабилизации зависит от ближайших соседей (1 .4–1,7°C для 5′-C tC нитро U-3′; 3,9–4,2°С для 5′-U tC нитро C-3′; Дополнительная таблица S1) (9).

Рисунок 3.

( A ) Последовательности РНК, использованные для исследования характеристик FRET между основаниями в А-форме РНК. ( B ) Последовательности РНК, используемые для исследования перехода от A- к Z-форме РНК. Обозначения последовательностей DX и AY отражают положение донора, tC O (синий), и неэмиссионного акцептора, tC nitro (оранжевый), в последовательности, считая от ( A ) 5′- конец или ( B ) 5′-конец GC-повтора донор-содержащей последовательности.Каждая комбинация последовательностей содержала только один донор и максимум один акцептор. Абазические сайты обозначаются подчеркиванием. Полный список всех дуплексов, использованных в этом исследовании, см. в дополнительных таблицах S1 и S7.

Рисунок 3.

( A ) Последовательности РНК, использованные для исследования характеристик FRET между основаниями в А-форме РНК. ( B ) Последовательности РНК, используемые для исследования перехода от A- к Z-форме РНК. Обозначения последовательностей DX и AY отражают положение донора, tC O (синий), и неэмиссионного акцептора, tC nitro (оранжевый), в последовательности, считая от ( A ) 5′- конец или ( B ) 5′-конец GC-повтора донор-содержащей последовательности.Каждая комбинация последовательностей содержала только один донор и максимум один акцептор. Абазические сайты обозначаются подчеркиванием. Полный список всех дуплексов, использованных в этом исследовании, см. в дополнительных таблицах S1 и S7.

Флуоресцентные свойства tC O и tC nitro в A-форме РНК приведены в таблице 1. Важно отметить, что tC O сохраняет высокий и стабильный квантовый выход флуоресценции независимо от контекста последовательности (9), и является превосходным перекрытием длинноволновой полосы излучения tC O с полосой поглощения tC nitro (рис. 4).В предположении свободного вращения переходных дипольных моментов (κ 2 = 2/3) теоретическое расстояние Фёрстера для tC O – tC нитро FRET-пары в РНК составляет 28 Å, что соответствует почти одному полному обороту спираль А-формы РНК.

Таблица 1.

Абсорбционные и флуоресцентные свойства tC O и tC nitro внутри двухцепочечной А-формы РНК

. λ абс, макс [нм] . ϵ макс. [M −1 см −1 ] . λ em,max [нм] . Φ f [%] . 〈τ〉 [нс] .
TC OA 368-373 (370) 7400-9700 (8300) 452-460 (456) 20-25 (22) 3.8-4.7 (4.3)
TC Nitror B 449-458 (454) 6400-7100 (6800)
9 . λ абс, макс [нм] . ϵ макс. [M −1 см −1 ] . λ em,max [нм] . Φ f [%] . 〈τ〉 [нс] . TC OA 368-373 (370) 7400-9700 (8300) 452-460 (456) 20-25 (22) 3.8-4.7 (4.3) TC Nitro B 449-458 (454) 6400-7100 (6800) — — Таблица 1.

Абсорбция и флуоресцентные свойства tC O и tC nitro внутри двухцепочечной А-формы РНК

. λ абс, макс [нм] . ϵ макс. [M −1 см −1 ] . λ em,max [нм] . Φ f [%] . 〈τ〉 [нс] .
TC OA 368-373 (370) 7400-9700 (8300) 452-460 (456) 20-25 (22) 3.8-4.7 (4.3)
TC Nitror B 449-458 (454) 6400-7100 (6800)
9 . λ абс, макс [нм] . ϵ макс. [M −1 см −1 ] . λ em,max [нм] . Φ f [%] . 〈τ〉 [нс] . TC OA 368-373 (370) 7400-9700 (8300) 452-460 (456) 20-25 (22) 3.8-4.7 (4.3) TC Nitro B 449-458 (454) 6400-7100 (6800) — —

Рисунок 4.

Спектральное перекрытие между излучением tC O и поглощением tC нитро в A-форме РНК. Спектры нормированы на их длинноволновые максимумы. Измерения проводили при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7,4, 123 мМ Na + .

Рис. 4.

Спектральное перекрытие между излучением tC O и поглощением tC нитро в А-форме РНК. Спектры нормированы на их длинноволновые максимумы. Измерения проводили при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7,4, 123 мМ Na + .

Для исследования применимости FRET между основаниями с использованием tC O и tC nitro в системах РНК измеренную эффективность FRET сравнивали с теоретическим значением для A-формы РНК, которое было рассчитано на основании установленной структуры РНК и свойств зонда.Для сравнения также были рассчитаны теоретические значения, основанные на В-форме РНК. В этом исследовании эффективность FRET в зависимости от расстояния между донором и акцептором измерялась с использованием как стационарного излучения, так и измерений времени жизни флуоресценции tC O в дуплексах с tC нитро и без него (дополнительные таблицы S2 и S3; дополнительный рисунок). С2). На рисунке 5 показана средняя эффективность переноса этих двух методов вместе с теоретической эффективностью FRET для tC O – tC nitro внутри статических нуклеиновых кислот A-формы и B-формы.Пунктирные кривые, показывающие эффективность переноса также при неестественных нецелочисленных расстояниях, добавлены к рисунку для ориентации глаз. Локальные минимумы этих кривых возникают из-за разделения, при котором переходные диполи донора и акцептора были бы перпендикулярны друг другу и, следовательно, представляют собой геометрии, при которых в этом статическом теоретическом представлении структуры нуклеиновой кислоты не может происходить перенос энергии.

Рисунок 5.

Эффективность FRET между tC O и tC нитро в A-форме РНК в зависимости от разделения пар оснований.Голубые ромбы отмечают усредненные данные стационарных измерений и измерений за весь срок службы. Черные ромбы отмечают прогнозируемую эффективность FRET для tC O –tC нитро внутри A-формы РНК, а пунктирная кривая показывает прогнозируемую эффективность FRET при нецелочисленных разделениях. Серые ромбы отмечают прогнозируемую эффективность FRET для tC O – tC нитро внутри нуклеиновой кислоты B-формы, а пунктирная кривая показывает прогнозируемую эффективность FRET при нецелочисленных разделениях. Измерения проводили при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7.4, 123 мМ Na + .

Рисунок 5.

Эффективность FRET между tC O и tC нитро в А-форме РНК в зависимости от разделения пар оснований. Голубые ромбы отмечают усредненные данные стационарных измерений и измерений за весь срок службы. Черные ромбы отмечают прогнозируемую эффективность FRET для tC O –tC нитро внутри A-формы РНК, а пунктирная кривая показывает прогнозируемую эффективность FRET при нецелочисленных разделениях. Серые ромбы отмечают прогнозируемую эффективность FRET для tC O – tC нитро внутри нуклеиновой кислоты B-формы, а пунктирная кривая показывает прогнозируемую эффективность FRET при нецелочисленных разделениях.Измерения проводили при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7,4, 123 мМ Na + .

Измеренные данные точно следуют предсказанной схеме FRET A-формы, показывая, что аналоги оснований прочно уложены внутри РНК, и убедительно предполагают, что они существенно не нарушают структуру РНК. Следовательно, это сравнительное исследование показывает, что пара tC O – tC nitro FRET отлично подходит для измерений FRET между основаниями в РНК, особенно при разделении 4–12 п.н. Ранее мы показали, как связывание нетропсина с ДНК и переход от B к Z в ДНК можно изучать с помощью межбазового FRET (7,8).Поскольку фотофизические свойства tC O и tC nitro хорошо известны (см. Таблицу 1 выше), теперь должны быть возможны аналогичные исследования внутри РНК, что делает межосновную FRET с использованием tC O – tC nitro мощным дополнением к существующие методы изучения структуры РНК, конформационных изменений и динамики.

Форма от A до Z FRET

Чтобы проиллюстрировать потенциал этого метода, мы разработали исследование, в котором tC O – tC нитро interbase FRET применяли для исследования конформационных изменений в РНК, в данном случае перехода от A- к Z-РНК.Структура правосторонней В-формы ДНК и А-формы РНК хорошо охарактеризована. Однако и ДНК, и РНК также могут иметь левостороннюю структуру, называемую Z-формой. Z-форма ДНК впервые была кристаллизована и охарактеризована с помощью рентгеновской кристаллографии в 1979 г. (28), тогда как первая левосторонняя структура РНК была описана в 1984 г. (29). Как и в случае с Z-формой ДНК, переход от A- к Z-форме РНК происходит преимущественно в чередующихся GC-повторах, но для индукции трансформации необходимы более экстремальные солевые условия.Биологическая роль Z-формы РНК до сих пор неясна, но окрашивание антителами к Z-РНК указывает на ее присутствие в цитоплазме и ядрышке (30), а некоторые интерферон-ответные белки имеют домены, которые могут стабилизировать Z-форму РНК (31). Однако не хватает инструментов, которые могут отслеживать структурные изменения Z-РНК в живых клеточных системах, а структурные исследования Z-РНК немногочисленны; только две 6-мерные структуры были представлены в базу данных PDB: исследование ЯМР, где Z-форма индуцируется высокой концентрацией соли (6 М NaClO 4 , PDB ID: 1T4X), и кристаллографическое исследование РНК Z-формы вместе с фермент ADAR1 (идентификатор PDB: 2GXB) (31,32).

Чтобы сделать возможным сравнение между структурами, депонированными в PDB, и структурами, использованными в этом исследовании, мы применили теорию FRET для предсказания паттернов FRET, ожидаемых от tC O – tC нитро при вставке в разные положения двух олигорибонуклеотидов, каждый из которых содержит структура, соответствующая одной из записей PDB, упомянутых выше (рис. 6А). Поскольку некоторые исследования указывают на сильное сходство между Z-формой ДНК и РНК, теоретическая картина FRET, полученная с использованием структуры ДНК Z-формы, связанной с ADAR1 (идентификатор PDB: 1QBJ), была включена в качестве дополнительного сравнения (31,33).Как видно на рисунке 6A, теоретическая картина FRET для трех описанных структур демонстрирует общее сходство, но также и значительные различия из-за структурных различий между ними. Поскольку Z-форма в основном встречается в GC-повторах, наши аналоги цитозина предоставляют прекрасную возможность для изучения конформационных изменений от A- к Z-форме РНК. Наша цель в этом исследовании РНК от A до Z была двоякой: во-первых, установить, можно ли использовать FRET между основаниями для исследования перехода РНК от A к Z.Это конформационное изменение обычно отслеживается с помощью CD, что требует инструментов, менее распространенных в научно-исследовательских лабораториях, значительно большего количества образцов, чем измерения флуоресценции, и несовместимо с измерениями в целлюло . Во-вторых, получить новую структурную информацию о Z-РНК и поместить ее в контекст ранее определенных структур Z-РНК.

Рисунок 6.

( A ) Измеренная эффективность FRET между tC O и tC нитро для GC-повтора в Z-форме (зеленые кружки) вместе с прогнозируемыми значениями FRET ранее зарегистрированных структур Z-формы : Записи PDB 1T4X (синие треугольники, ЯМР-структура Z-формы РНК в 6 М NaClO 4 ), 2GXB (оранжевые ромбы, кристаллическая структура Z-формы РНК, связанной с ADAR1) и 1QBJ (красные квадраты, кристаллическая структура Z -форма ДНК, связанная с ADAR1) (31–33).( B ) Измеренная эффективность FRET между tC O и tC нитро для повторения GC в форме A (черные квадраты) и форме Z (зеленые кружки). Стрелки указывают направление изменения при переходе от А- к Z-форме. Измерения проводились при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7,4, 123 мМ Na + (А-форма) или с добавлением 8 М NaClO 4 (Z-форма), и представляют собой усредненные данные измерений стационарного состояния и времени жизни.

Рисунок 6.

( A ) Измеренная эффективность FRET между tC O и tC нитро для GC-повтора в Z-форме (зеленые кружки), вместе с прогнозируемыми значениями FRET для ранее опубликованной Z-формы структуры: записи PDB 1T4X (синие треугольники, ЯМР-структура Z-формы РНК в 6 М NaClO 4 ), 2GXB (оранжевые ромбы, кристаллическая структура Z-формы РНК, связанной с ADAR1) и 1QBJ (красные квадраты, кристаллическая структура Z-форма ДНК, связанная с ADAR1) (31–33).( B ) Измеренная эффективность FRET между tC O и tC нитро для повторения GC в форме A (черные квадраты) и форме Z (зеленые кружки). Стрелки указывают направление изменения при переходе от А- к Z-форме. Измерения проводились при комнатной температуре в фосфатном буфере, рН 7,4, 123 мМ Na + (А-форма) или с добавлением 8 М NaClO 4 (Z-форма), и представляют собой усредненные данные измерений стационарного состояния и времени жизни.

Последовательности с GC-повторами очень склонны к самодимеризации и образованию шпилек, и поэтому требуют другого и более тщательного дизайна последовательности по сравнению с нашим первоначальным эталонным исследованием (рис. 3А).Чтобы уменьшить помехи от образования шпильки, GC-повтор был максимально коротким (14 мер), но при этом позволял исследовать полный оборот спирали, т. Е. Разделение донор-акцептор до 10 п.н. без изнашивания концов. Кроме того, GC-повтор окружен одним абазическим участком и восемью основаниями с каждой стороны. Восемь фланкирующих оснований были введены, чтобы удерживать концы вместе в А-форме на протяжении всего эксперимента и повышать стабильность дуплекса, совпадающего внутри каркаса, тогда как абазовые сайты служат гибким линкером, позволяющим формировать GC-повторы. Z-РНК, при этом концы остаются в А-форме.

В этом исследовании для индуцирования Z-формы использовали 8 М NaClO 4 . Исследования CD показывают, что Z-форма стабильна при комнатной температуре в течение> 18 часов в этих условиях и что донор и акцептор не препятствуют ее образованию (дополнительная фигура S3), что является еще одним признаком того, что модифицированные основания РНК служат хорошими аналогами их природные аналоги цитозина. Чтобы исследовать разницу между FRET в A- и Z-форме РНК, измерения с использованием как стационарного излучения, так и времени жизни флуоресценции были выполнены для обеих конформаций (рисунок 6B, дополнительный рисунок S4 и дополнительные таблицы S5 и S6).Поскольку донор и акцептор в последовательностях GC находятся в одной и той же цепи для нечетных разделений и в противоположных цепях для четных разделений, картина FRET GC-повторов в A-форме отличается от таковой в эталонном исследовании, где донор и акцептор в противоположных цепях для всех разделений (дополнительная фигура S5). В данных Z-формы есть несоответствие между эффективностью FRET в установившемся режиме и на основе срока службы для эшелонирования семь и девять (дополнительная таблица S7). Эти два разделения были измерены с использованием последовательностей, меченных одной и той же цепью, где образование шпильки сблизило бы донора и акцептора в пространстве (0–2 п.н.).На таких коротких расстояниях тушение донора может иметь характер прямого контакта (например, перенос электрона Декстера) и, следовательно, происходить во временной шкале, которую невозможно разрешить с помощью нашей установки времени жизни флуоресценции. При таких обстоятельствах в затухании флуоресценции будет видно только время жизни правильно свернутой части образца, т. е. дуплексов Z-формы РНК, в то время как стационарное излучение будет еще больше тушиться и, следовательно, приведет к, по-видимому, более высокому FRET. ценность. Поскольку наши результаты показывают разницу между стационарным состоянием и временем жизни FRET при разделении семь и девять и, следовательно, указывают на частичное образование «темных видов» (т.г. шпильки) в этих образцах, для этих точек данных в последующей оценке использовалась только эффективность FRET на основе срока службы (рис. 6).

Сначала мы исследовали, можно ли использовать FRET между основаниями РНК для исследования перехода РНК от A к Z. Разница в характере FRET между A- и Z-формами РНК поразительна: эффективность переноса изменяется на 25-87% для семи из восьми исследованных разделений (рис. 6B), что указывает на то, что система достаточно чувствительна для изучения изменений между А- и Z-формы РНК, отслеживая изменение FRET только при одном или паре разделений.Квантовый выход tC O практически одинаков в обеих конформациях (дополнительная таблица S8), что убедительно свидетельствует о том, что наблюдаемые изменения в эффективности переноса связаны со структурными изменениями в РНК, а не с изменениями в микроокружении зонда. В совокупности это показывает, что межосновная FRET РНК между tC O и tC nitro , разделенная 4–10 п. исследование структурных изменений нуклеиновых кислот.Значительные различия во времени жизни флуоресценции между соответствующими дуплексами РНК A- и Z-формы указывают на возможные применения микроскопии визуализации времени жизни флуоресценции (FLIM), в которых РНК, конкретно в Z-форме, можно было бы отслеживать в микроскопии живых клеток.

Во-вторых, мы сравнили наши данные FRET с теоретически полученным шаблоном FRET из нескольких существующих структур PDB. Паттерн FRET, полученный нами для Z-формы РНК, хорошо согласуется с ранее описанными структурами на коротких и длинных расстояниях (рис. 6А).Однако на промежуточных расстояниях (6–8 п.н.) наблюдаемая эффективность FRET значительно ниже, чем значения, рассчитанные на основе опубликованных средних параметров структур 6mer PDB. Одним из объяснений этих несоответствий может быть то, что структура Z-РНК отличается для ранее описанной короткой и по своей природе менее стабильной 6-мерной РНК по сравнению с нашей 14-мерной системой, где концы удерживаются на месте фланкирующими основаниями РНК А-формы. Структуры 6-мерной Z-РНК, определенные с помощью методов ЯМР или рентгеновских лучей, также могут немного отличаться от структуры в растворе при более физиологически релевантных концентрациях РНК.Учитывая большую редкость отчетов, содержащих структурную информацию для Z-формы РНК, слишком рано подробно комментировать структурное единообразие этой формы дуплекса РНК. Это потребует большего набора сравнительных исследований, касающихся таких аспектов, как длина олигорибонуклеотидов и тип ассоциированного белка.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы показали, что пара tC O – tC нитро FRET хорошо подходит для мониторинга межосновного FRET в дуплексах РНК.Зонды прочно расположены внутри РНК, и картина FRET близко соответствует предсказанным значениям для A-РНК. Мы наблюдаем большое изменение эффективности FRET, поскольку Z-РНК образуется из A-формы с использованием высокой концентрации NaClO 4 , что показывает, что, как и в ДНК, FRET между основаниями РНК можно использовать для исследования структурных изменений в физиологических условиях. с высокой чувствительностью, а также универсальностью в отношении интервалов tC O – tC нитро . При сравнении нашего измеренного паттерна FRET с несколькими существующими PDB-структурами Z-формы РНК мы обнаруживаем общее сходство, но также и значительные различия.Различия аналогичной величины также могут быть обнаружены между структурами PDB, что означает, что необходимо исследовать больше структур Z-РНК, чтобы определить, имеет ли Z-форма РНК одну единую структуру с уникальным набором параметров для извлечения. Учитывая более высокое структурное разнообразие и динамику РНК и РНК-белковых комплексов по сравнению с ДНК, это представляет собой значительный шаг вперед не только для межосновной FRET как общей методологии нуклеиновых кислот, но, что важно, для быстро растущей области структуры и динамики РНК. исследования в частности и исследования РНК в целом.В отличие от большинства методов исследования структуры и динамики, межбазовую FRET можно проводить в физиологических условиях. Следовательно, мы предполагаем, что основная польза этого метода заключается в мониторинге структурных изменений РНК в живых клеточных системах, либо отдельно, либо в гибридных подходах вместе с рентгеновским излучением или ЯМР, для получения новой ценной информации об основных молекулах жизни, РНК. .

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ

Дополнительные данные доступны на сайте NAR Online.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Мы благодарим Афафа Х. Эль-Сагира и профессора Тома Брауна (Оксфордский университет, Великобритания) за обучение А.Ф.Ф. и М.Б. в очистке РНК.

ФИНАНСИРОВАНИЕ

Шведский фонд стратегических исследований [SSF, IS14-0041, IRC15-0065 для L.M.W., ID14-0036 для MG]; Шведский исследовательский совет [VR, 2017-03707 to L.M.W.]. Финансирование платы за открытый доступ: Шведский исследовательский совет [VR, 2017-03707].

Заявление о конфликте интересов .Ни один не заявил.

ССЫЛКИ

1.

Детхофф

Е.А.

,

Чу

Дж.

,

Мустое

А.М.

,

Аль-Хашими

Х.М.

Функциональная сложность и регуляция с помощью динамики РНК

.

Природа

.

2012

;

482

:

322

330

.2.

Harpur

A.G.

,

Wouters

F.S.

,

Бастианс

П.И.Х.

Визуализация FRET между спектрально подобными молекулами GFP в одиночных клетках

.

Нац. Биотехнолог.

2001

;

19

:

167

169

.3.

Hillger

F.

,

Hanni

D.

,

D.

,

Nettels

D.

,

Geister

S.

,

S.

,

Grandin

M.

,

Textor

M.

,

Шулер

Б.

Исследование взаимодействия белок-шаперон с помощью флуоресцентной спектроскопии одиночных молекул

.

Анжю. хим. Междунар. Эд.

2008

;

47

:

6184

6188

.4.

Gubaev

A.

,

A.

,

Klostermeier

D.

KlosterMeier

D.

,

Hammann

C.

РНК Структура и складные: биофизические методы и методы прогнозирования

.

2013

;

Берлин

Де Грюйтер

181

214

.5.

Пеулен

Т.О.

,

Опанасюк

О.

,

Зайдель

К.А.М.

Сочетание графических и аналитических методов с молекулярным моделированием для точного анализа измерений FRET с временным разрешением меченых макромолекул

.

J. Phys. хим. Б

.

2017

;

121

:

8211

8241

.6.

McPhee

S.A.

,

Huang

L.

,

Lilley

D.M.

Критическая пара оснований в k-витках, придающая характеристики складчатости и коррелирующая с биологической функцией

.

Нац. коммун.

2014

;

5

:

5127

.7.

Dumat

B.

,

Larsen

AF

,

Wilhelmsson

L.M.

Изучение переходов Z-DNA и B- в Z-DNA

Рез. нуклеиновых кислот.

2016

;

44

:

e101

.8.

Вранне

М.С.

,

füchtbauer

,

füchtbauer

AF

,

DUMAT

B.

,

Bood

,

,

EL-SAGHEER

AH

,

BROWN

T.

,

Gradén

H.

,

Grøtli

M.

,

Wilhelmsson

LM

На пути к полной гибкости последовательности аналога основания нуклеиновой кислоты FRET

.

Дж. Ам. хим. соц.

2017

;

139

:

9271

9280

.9.

füchtbauer

füchtbauer

A.F.F.

,

Pruus

S.

,

Börjesson

K.

,

MCHee

S.A.

,

Lilley

D.m.j.

,

Wilhelmsson

L.M.

Аналог флуоресцентной РНК цитозина – внутренний зонд для детальных структурных и динамических исследований

.

науч. Респ.

2017

;

7

:

2393

.10.

Шин

Д.

,

Синкелдам

Р.В.

Дж. Ам. хим. соц.

2011

;

133

:

14912

14915

.11.

Ровира

А.Р.

,

Fin

A.

,

Tor

Y.

Химический мутагенез эмиссионного РНК — алфавита

.

Дж. Ам. хим. соц.

2015

;

137

:

14602

14605

.12.

Се

Ю.

,

Дикс

А.В.

,

Tor

Y.

FRET позволяет обнаруживать связывание РНК-малой молекулы в режиме реального времени

.

Дж. Ам. хим. соц.

2009

;

131

:

17605

17614

.13.

Tanpure

А.А.

,

Шриватсан

S.G.

Конформационно-чувствительные аналоги нуклеозидов в качестве топологически специфичных зондов включения флуоресценции для ДНК и РНК G-квадруплексов

.

Рез. нуклеиновых кислот.

2015

;

43

:

e149

.14.

Эрнандес

А.Р.

,

Кул

Э.Т.

Компоненты xRNA: Синтез и флуоресценция полного генетического набора рибонуклеозидов увеличенного размера

.

Орг. лат.

2011

;

13

:

676

679

.15.

Börjesson

K.

,

Preus

S.

,

El-Sagheer

A.H.

,

BROWN

T.

,

T.

,

ALBINSSON

B.

,

Wilhelmsson

,

Wilhelmsson

L.M.

Л.М.

База нуклеиновой кислоты Аналоговая Фрета Успешивающая детализированные структурные измерения в нуклеиновой кислоте, содержащих системы

.

Дж. Ам. хим. соц.

2009

;

131

:

4288

4293

.16.

Bood

M.

,

Füchtbauer

A.F.

,

Wranne

M.С.

,

Ро

Дж.Дж.

,

Сарангамат

С.

,

Эль-Сагир

А.Х.

,

Руперт

Д.Л.М.

,

Фишер

Р.С.

,

Magennis

С.В.

,

Jones

AC

и др. .

Пентациклический аденин: универсальный и исключительно яркий флуоресцентный аналог основания ДНК

.

Хим. науч.

2018

;

9

:

3494

3502

.17.

Хан

Дж.Х.

,

Yamamoto

S.

,

Park

S.

,

Sugiyama

H.

Разработка системы Vivid FRET на основе высокоэмиссионной системы.

Хим. Евро. Дж.

2017

;

23

:

7607

7613

.18.

Миллер

М.Л.

,

Доран

М.

Концентрированные солевые растворы.II. Вязкость и плотность тиоцианата натрия, перхлората натрия и йодида натрия

.

J. Phys. хим.

1956

;

60

:

186

189

.19.

Pruus

S.

,

Kilså

K.

,

K.

,

K.

,

Miannay

FA

,

ALBINSSON

B.

,

Wilhelmsson

LM

LM

Fretmatrix: общая методология моделирования и анализа FRET в нуклеиновых кислотах

.

Рез. нуклеиновых кислот.

2013

;

41

:

e18

.20.

Лу

X.J.

,

Олсон

В.К.

3DNA: пакет программного обеспечения для анализа, реконструкции и визуализации трехмерных структур нуклеиновых кислот

.

Рез. нуклеиновых кислот.

2003

;

31

:

5108

5121

.21.

Олсон

В.К.

,

Бансал

М.

,

Берли

С.К.

,

Дикерсон

Р.Э.

,

Gerstein

M.

,

Harvey

S.C.

,

Neidle

S.

,

Shakked

Z.

и др. .

Стандартная система отсчета для описания геометрии пар оснований нуклеиновых кислот

.

Дж. Мол. биол.

2001

;

313

:

229

237

.22.

SANDIN

стр.

,

Börjesson

,

K.

,

LI

K.

,

LI

H.

,

Mårtensson

J.

,

Brown

T.

,

Wilhelmsson

LM

,

Albinsson

B.

Характеристика и использование беспрецедентно яркого и структурно ненарушающего флуоресцентного аналога основания ДНК

.

Рез. нуклеиновых кислот.

2008

;

36

:

157

167

.23.

Preus

S.

,

Börjesson

,

K.

,

K.

,

Kilså

K.

,

K.

,

ALBINSSON

B.

,

Wilhelmsson

LM

Характеристика Nucleobase Analogue Acceptor Tacceor TC нитро

.

J. Phys. хим. Б.

2010

;

114

:

1050

1056

.24.

Чжэн

Г.Х.

,

Лу

Х.Дж.

,

Олсон

В.К.

Web 3DNA — веб-сервер для анализа, реконструкции и визуализации трехмерных структур нуклеиновых кислот

.

Рез. нуклеиновых кислот.

2009

;

37

:

W240

W246

.25.

Серебряный

В.

,

Бейгельман

Л.

Эффективный препарат защищенных рибонуклеозидов для синтеза фосфорамидитной РНК

.

Тетраэдр Летт.

2002

;

43

:

1983

1985

.26.

SINHA

ND

,

Biernat

J.

,

J.

,

MCMANUS

J.

,

KÖSTER

H.

Полимерная поддержка Олигонуклеотидный синтез XVIII: использование β -Цаноэтил- N , N -Диалкиламино-/ N -Морфолинофосфорамидит дезоксинуклеозидов для синтеза фрагментов ДНК, упрощающий снятие защиты и выделение конечного продукта

.

Рез. нуклеиновых кислот.

1984

;

12

:

4539

4557

.27.

XU

Y.

,

ISHIZUKA

T.

,

T.

,

KIMURA

T.

,

KOMIYAMA

M.

A U-TETRAD стабилизирует телемерную rna rna rna g-adveruplex

.

Дж. Ам. хим. соц.

2010

;

132

:

7231

7233

.28.

Ван

А.HJ

,

Куигли

Г.Дж.

,

Колпак

Ф.Дж.

,

Кроуфорд

Дж.Л.

,

Ванбум

Дж.Х.

,

Vandermarel

G.

,

Rich

A.

Молекулярная структура левостороннего фрагмента двойной спирали ДНК с атомным разрешением

.

Природа

.

1979

;

282

:

680

686

.29.

Зал

К.

,

Круз

П.

,

Тиноко

И.

,

Джовин

Т.М.

,

Вандесанде

Дж.Х.

Z-РНК — левосторонняя двойная спираль РНК

.

Природа

.

1984

;

311

:

584

586

.30.

Зарлинг

Д.А.

,

Калхун

CJ

,

Feuerstein

B.G.

,

Сена

Э.P.

Цитоплазматическая микроинъекция иммуноглобулина Gs, распознающего спирали РНК, ингибирует рост клеток человека

.

Дж. Мол. биол.

1990

;

211

:

147

160

.31.

Пласидо

Д.

,

Браун

Б.А.

,

Lowenhaupt

K.

,

Rich

,

,

A.

,

ATHANASIADIS

ALTANASIADIS

A.

A.

А.

А.

Двойная спиральная спираль RNA, связанная Z Alpha Rna, связанная Z Alpha Reding Enzyme ADAR1

.

Структура

.

2007

;

15

:

395

404

.32.

Popenda

M.

,

Milecki

J.

,

Adamiak

R.W.

Рез. нуклеиновых кислот.

2004

;

32

:

4044

4054

.33.

Шварц

Т.

,

Роулд

М.A.

,

Lowenhaupt

K.

,

Herbert

A.

,

Rich

A.

Кристаллическая структура домена Z альфа редактирующего фермента ADAR человека

.

Наука

.

1999

;

284

:

1841

1845

.

Примечания автора

© Автор(ы), 2019 г. Опубликовано Oxford University Press от имени Nucleic Acids Research.

советов по вождению с переключением передач

СОВЕТЫ ВЛАДЕЛЬЦУ АВТОМОБИЛЯ 30 июля 2019 г.

Советы по управлению автомобилем с рычагом переключения передач

Палка для вождения — навык, которым должен владеть каждый водитель. Однако многим автомобилистам просто не хватает уверенности учиться.Хотя вождение с механической коробкой передач может показаться немного пугающим, на самом деле это не так уж и сложно, как только вы к ней привыкнете.

Вот несколько советов, о которых следует помнить, прежде чем попробовать:

Практика там, где не занято

Если вы брали уроки вождения в подростковом возрасте, вас не бросили на съедение волкам. Скорее всего, вы начали с парковки или тихой дороги и продвигались вверх по ходу уроков. Тот же подход следует использовать для вождения палки. Начните медленно и устраивайтесь поудобнее, прежде чем отправиться на оживленные улицы.

Не волнуйтесь, если вы остановитесь

Если вы только учитесь управлять палкой, это почти гарантия того, что вы в конечном итоге заглохнете из-за слишком быстрого выжима сцепления. Не волнуйтесь, если это произойдет, так как это случается со всеми, когда они только начинают. Просто убедитесь, что тренируетесь, когда дороги не загружены, так как это может быть реальной проблемой, если вы находитесь в пробке бампер к бамперу.

Используйте обе ножки

Использование обеих ног за рулем может быть незнакомым чувством, если вы провели годы за рулем только правой.

К счастью, вы по-прежнему будете использовать правую ногу для торможения и ускорения, так что здесь ничего не изменится. Единственная разница будет заключаться в использовании левой ноги для регулировки сцепления. Помните, что сцепление нужно для того, чтобы вы могли плавно переключать передачи.

Проверьте рычаг переключения передач перед запуском

Перед запуском двигателя обязательно выжмите сцепление и убедитесь, что автомобиль находится в нейтральном положении, прежде чем включать зажигание. Ваш переключатель передач будет в центре, если он уже находится в нейтральном положении.Если это не так, переместите его туда перед запуском.

Также следует проверить, используется ли стояночный или аварийный тормоз.

Веселись

Причина, по которой многие водители предпочитают управлять джойстиком, заключается в том, что это обычно делает езду более приятной. Это также может помочь гарантировать, что вы не потеряете сознание за рулем, так как многие автомобилисты, использующие автоматическую коробку передач, грешат этим.

Знайте, когда переключать передачи

Важно знать, когда переключать передачи.

Вообще говоря, вы должны переключаться с первой на вторую при 15 км/ч, со второй на третью при 30 км/ч, с третьей на четвертую при 50 км/ч, с четвертой на пятую при 60-65 км/ч и с пятой на шестую при 75 км/ч. Этот процесс такой же, как и при переключении на пониженную передачу, за исключением того, что он обратный.

Помните, что всякий раз, когда вы переключаете передачу, вы должны при этом выжимать сцепление до упора. Не волнуйтесь, если это кажется пугающим. Может потребоваться несколько раз, чтобы привыкнуть к переключению передач, но в конце концов вы почувствуете это.

 

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *