Где собирают лада х рей: Где собирают Lada XRay ?

Поставщики модели Lada XRAY — журнал За рулем

Вчера на АВТОВАЗе начали выпускать высокий хэтчбек в стиле SUV — XRAY. Автомобиль собирается из 1800 деталей, которые производят 250 поставщиков. Заявленный уровень локализации — 50%, со временем его планируют довести до 75%.

Autodesk VRED Professional 2015

Большую часть автокомпонентов для Lada XRAY выпускают иностранные компании, локализовавшие производство в России, сообщает аналитическое агентство «Автостат». Это французские Valeo (радиатор и отопитель) и Faurecia (передние сиденья), немецкие Bosch (гидроагрегат ABS), Eberspacher (выхлопная система), Сontinental (система омывателей, шины) и Brose (электростеклоподъемники), японские Takata (рулевое колесо с ММS и подогревом, подушки безопасности пассажира, модуль подушки безопасности водителя), Mitsuba (омыватели) и AGС (боковые и задние стекла), турецкая Martur (задние сиденья), итальянская Pirelli (шины).

15610

Компания AGAR поставляет обогреваемые ветровые стекла, UET — уплотнители, Leoni и Tubor — жгуты, KOITO/Avtosvet — фары, Itelma — ЭРА-ГЛОНАСС и система EMU, и другие.

Двигатели, коробки передач (в том числе коробки с АМТ), подрамники передней подвески, рычаги передней и задней подвесок, панель приборов, передние и задние бамперы, решетки радиаторов АВТОВАЗ будет выпускать на своих производственных мощностях. Среди импортных узлов и деталей — ручки дверей (U-Shin), зеркала с блоком управления подогревом (Magna), задние фонари (Valeo), замок задней двери (Kiekert), статические уплотнители (Standard Profile).

• В этом году планируется выпустить 500 автомобилей Lada XRAY. Сначала с конвейера будут сходить хэтчбеки в топовой комплектации с двигателем 1,6 л мощностью 110 л.с. Ранее заявлялась мощность мотора в 114 л.с., но перед запуском новой модели его доработали для улучшения виброакустических показателей и обеспечения более пологой характеристики крутящего момента, что чуть снизило его мощностные показатели.
• Ранее руководитель проекта «Семейство автомобилей XRAY» Олег Груненков рассказал, почему серийный XRAY так отличается от представленного на Московском автосалоне концепта.

Наше новое видео

Понравилась заметка? Подпишись и будешь всегда в курсе!

За рулем на Яндекс.Новости

Новая лада Х Рей от Рено Сандеро

Новой Ладе Xray уже дают свои имена Х Рей, Рентген и так далее. Основу проектирования взяли от донора Рено Сандеро, но с вазовским дизайном в новом стиле «X». Автомобиль собирают на конвейере АвтоВаза.

Кстати говоря, очень неплохо собран автомобиль Лада Xray, не видно зазоров между капотом крылом фарой. Качество покраски отличное нареканий не вызывает, хромированные накладки смотрятся как надо и вызывают уважения, все очень ровненькое и гладко.
Видео:

Задний вид необычайно округлый. Передние пластиковые подкрылки с гладкими приливами, которые уменьшают налипание снега грязи. Багажник открывается кнопкой с ключа либо с кнопки, расположенной в пятой двери и здесь же камера заднего вида. Сам багажник средних размеров, но с особенностью полки, который можно устанавливать в двух уровнях. Полка немного дребезжит по кочкам во время движения.

На кроссовер Ладе Xray собираются устанавливать один из трёх двигателей в базе это вазовский с объёмом 1.6 106 лошадиных сил, затем идёт двигатель от Ниссан мощностью 110 л/с 1.6 л 16-кл., и завершает эту гамму перспективный вазовский мотор объёмом 1.8 122 л/с. На этих моторах с 16-ю клапанами можно использовать 92-й бензин, что в наших условиях очень приятно.

Открыв капот новой Лады Х Рей надо самому устанавливать упор вручную не так, как у новых автомобилей Рено Логан, Сандеро где он установлен газовый. Лючок бензобака довольно большой, крышка горловины обычная без замка и ночью открыта всем желающим. Ручка наружная двери имеет естественный хват и хорошо работает. Плохо, что нет специального резинового уплотнителя двери, пороги будут все время грязные.

Придётся комплект уплотнителей порогов самому для установки покупать на авторынке. Кнопка обогрева сидения находится, неудобно сбоку как у Логан. Руль регулируется только по высоте. Сзади высоким пассажирам на сиденье будет неудобно сидеть потолок низковатый.

Огромнейший бардачок находится у ног переднего пассажира. Блок управления климат контролем скопировали у Лады Весты. В движение Лада Xray ведёт себя как Рено комфортно и кюветы просёлочных дорог проходит непринуждённо и спокойно.
Смотри автолюбитель далее видео AutoreviewRu:

Удачи Вам и до скорых встреч на страницах блога RtiIvaz.ru!

Вам также интересно будет почитать:

Установка ГБО

Уплотнители на дверь

Тест-Драйв Лады Весты

Ремонт двигателя ваз 2101, 2107

Как правильно сальник по размерам подобрать

«АвтоВАЗ» раскрыл план модернизации кроссовера

Завод в Тольятти уже начал глубокую модернизацию линии B0.

LADA XRay 2023. Рендер: портал Pokatim.ru

В СМИ только заявили, что «АвтоВАЗ» начал улучшать сборочную линию одного из цехов, а редакция портала Driver-News уже делится своим прогнозом развития событий. Обновление коснётся «ходовой» LADA XRay, которая наконец станет 4WD.

Если не «ХРюша», то кто

Переведут на полный привод будущий «Иксрей», ведь на линии кроме него оборудовать «обновкой» больше некого. Сейчас на B0 собирают LADA XRay, Vesta и Granta. Седанам повышенная проходимость ни к чему, а вот кроссовер с ней станет способен конкурировать с «европейцами» и «корейцами».

А точно не Nissan?

После того, как «АвтоВАЗ» раскрыл новости об обновлении сборочных цехов, многие СМИ написали, что 4WD готовят под Nissan Magnite. Вот только на заводах LADA в 2020 отказались работать с Datsun, который изначально и должен был стать платформой для «Магнита».

Переоснастят в Тольятти сборку тележек нового «Иксрей». Фото: «За рулем»

Версия редакции портала Driver-News следующая — на ВАЗе раскрыли план модернизации кроссовера, а «японцев» будут собирать не в Тольятти.

Предположение ложится на план «АвтоВАЗа»

До 2026 года компания собиралась представить ряд новых авто, но сейчас «клепает» только спецверсии, типа 4×4 Black. Выход полноприводной «Хрюши» перезагрузит кроссовер, который по сути станет абсолютно другим автомобилем, который точно получит мультируль.

Управлять новым «Иксреем» будет комфортно. Изображения: лада.онлайн

До 2023 года XRay получит мультируль, патент которого осенью 2020 зарегистрировал «АвтоВАЗ». Вероятно, что на полноприводном кроссовере от LADA новую «баранку» мы точно увидим.

Почему обновлённый паркетник не выйдет раньше?

Сперва на заводе в Тольятти проведут бумажную работу, после начнут переоснащение «в поле». Вероятно, что «ХРюша» в итоге получит сразу два варианта «ходовки» — с полным и передним приводами.

Такой подход даст покупателям шанс выбирать авто по нужде, что также возвысит «АвтоВАЗ» над конкурентами. О цене и прочей компоновке новой LADA XRay на данный момент ничего не известно.

Технические характеристики новой Lada Xray 2021 года

Новинка АвтоВАЗа пришлась по вкусу на российском авторынке. Она достаточно быстро стала одним из самых популярных автомобилей отечественного рынка в 2021 году засчет своей относительно недорогой цены.

Компактный кроссовер или высокий хэтчбек лада х Рей имеет технические характеристики присущие современным иномаркам. Однако статус полноценного внедорожника мешает получить отсутствие полного привода. По своим характеристикам автомобиль скорее относятся к высокому хэтчбеку, поскольку обладает лишь передним приводом.

Технические характеристики лады Xray

Автоваз представил множество комплектаций, которые отличаются по техническим характеристикам. Основу составляют следующие особенности:

• Все модели оснащены бензиновыми двигателями разной мощности.
• На выходе машина, в среднем, получает 10,8 до сотни.
• Средний расход в городском цикле – 9,0.
• Классический передний привод, осуществленный на базе МакФерсон, что положительно отражается на цене ремонта.
• 195 мм честного клиренса (что, к слову, больше чем дорожный просвет у Сандеро).
• Важная техническая характеристика, которая позволила осуществить полноценный климат контроль и постоянный подогрев сидений – укомплектованность мощной аккумуляторной батареей.
• Коробка передач, в зависимости от комплектации, может быть механикой или роботом. Автомат не установлен ни на одной из комплектаций.
• Максимальная скорость – 170 км в час.

В ремонте технические аспекты не вызывают сложностей, так как все создано максимально просто, по проверенным временем технологиям.

ВАЗ-21129. Высокая экономичность

Главная изюминка данного ДВС – специально разработанная впускная система. Воздух, в отличие от классической схемы, при функционировании мотора на пониженных оборотах, подразумевает подачу в камеры сгорания по более длинным каналам. Когда количество оборотов повышается, система направляет воздух по коротким каналам. Оба варианта, следовательно, различаются разным составом и концентрацией смеси. Первый вариант – обедненная смесь, количество кислорода минимально. Второй вариант – насыщение кислородом, смесь обогащена. Сделано это для того, чтобы можно было поднять КПД двигателя, экономя бензин. Отказ от использования такой доработки позволил бы двигателю выдавать всего 98 л. с. вместо 106.

Данная модификация производится исключительно вместе с КПП от Renault (5 скоростей). Максимальная скорость, развиваемая кроссовером с двигателем 21129, достигает 170 километров в час.

Параметры ВАЗ-21129:

• Рабочий объем ДВС: 1,6 л.
• Кол-во цилиндров: 6 шт.
• Ко-во клапанов: 16
• Тип привода ДВС: ремень
• Диаметр цилиндра: 82 мм.
• Мощность: 106 л. с.

Lada XRay с таким мотором набирает 100 км/час за 11,9 секунд. Двигатель, как уже упоминалось, щадит кошелек водителя при заправке. Ниже расположена таблица расхода топлива для этой модификации ДВС:

Цикл	Расход (л)
Город	8,5
Смешанный режим	7,3
Трасса	5,7

Комплектации и их особенности

Сегодня всего представлено 5 различных комплектаций, которые существенно отличаются друг от друга. К основным комплектациям относятся:

• Оптима;
• Оптима Адванс;
• Люкс;
• Люкс Престиж;
• Юбилейная.

Все комплектации xRay имеют:

• Подушки безопасности водителя и переднего пассажира;
• Трёхточечные ремни безопасности для всех пассажиров и водителя.
• Систему ЭРА-Глонасс и систему автоматического открывания дверей во время ДТП;
• HWF-систему, которая отвечает за включение аварийной сигнализации во время экстренного торможения.

Расположение комплектаций соответствует их ценовой релевантности. С ростом цен, в салоне уменьшается количество ненатуральных составляющих, которые заменяются на более дорогие материалы.

В дополнение, производится оснащение различными дополнительными функциями, которые, в пересчете на самостоятельное оснащение, стоят весьма дорого. Так, в самой бедной комплектации нет практически ничего, однако переплачивать большую сумму за спорного качества дополнительное оборудование – дело личное каждого.

Комплектация	Двигатель	Цена
	бензиновый 1.6, 106 л.с.	599 900
	бензиновый 1.6, 106 л.с.	660 900
1.6 Optima Advanced MT	бензиновый 1.6, 122 л.с.	685 900
	бензиновый 1.8, 122 л.с.	710 900
	бензиновый 1.6, 106 л.с.	735 900
	бензиновый 1.6, 106 л.с.	739 900
1.8 Luxe MT	бензиновый 1.8, 122 л.с.	760 900
1.8 Luxe Prestige MT	бензиновый 1.8, 122 л.с.	773 900
	бензиновый 1.8, 122 л.с.	798 900
1.6 Юбилейная	бензиновый 1.6, 110 л.с.	799 000
1.6 Юбилейная AMT	бензиновый 1.6, 122 л.с.	829 000

Двигатель ВАЗ-21129

Этот мотор, предназначенный для установки на Lada Xray, отличается от аналогов особой системой впуска. Во время его работы на низких оборотах подача воздуха производится иначе – по удлиненным впускным каналам. В случае повышения оборотов воздух начинает поступать по коротким каналам. Вследствие чего изменяется состав и консистенция топливной смеси, в первом случае она является слабо насыщенной кислородом, а во втором наоборот. Такой принцип работы позволяет существенно увеличить мощность агрегата при сравнительно небольшом потреблении топлива. При отсутствии такой системы аналогичный аппарат выдает не более 98 лошадей.

Этот двигатель в Ладе Икс Рей будет выпускаться только в тандеме с коробкой передач от Рено, имеющей 5 скоростных передач. Силовой агрегат ВАЗ-21129 имеет следующие характеристики:

• объем – 1597 кубических сантиметров;
• цилиндры в количестве 4 штук;
• 16 клапанов;
• ременный привод;
• цилиндр имеет диаметр в 82 миллиметра;
• мощность – 106 л.с.

Лада Икс Рей, оснащенная таким движком, способна набирать скорость до ста км/ч за 11,9 сек. При таких параметрах автомобиль крайне экономичен. Циклы езды и потребление топлива:

Цикл	Расход (л)
Город	8,5
Смешанный режим	7,3
Трасса	5,7

При этом, Лада Икс Рей в сочетании с этим движком способна развить скорость до 170 км/ч.

Внутренний вид салона

Уж сколько раз твердили миру, что подлокотнику быть в машине, но Автоваз решил лишить водителей этого удобного атрибута. Так, пространство салона кажется несколько более просторным, но функционал от этого не выигрывает.

Касательно обивки – она не отличается роскошью, но выполнена в лучших традициях бюджетного авто, однако не стоит ждать боковой поддержки и полного комфорта, так как вылет подголовников составляет еще одну проблему машины. К слову, водителя будет оберегать подушка безопасности, которая удачно расположена в передней части авто. На задних сиденьях водители отмечают особый простор, который создается за счет функционального расположения багажника. Переднюю панель обрамляет дисплей, наделенный функциями бортового компьютера и отвечающий за множество других аспектов, способных сделать езду максимально комфортной.

Фото салона xRay

Гарабаритные размеры Лада х Рей

Лада была построена на платформе Рено Сандеро, которая уже проявила себя практичной и надежной. Производитель внес лишь в нее некоторые уникальные изменения. Так колесная база составила 2592 миллиметра.

Габаритная длинна и ширина машины составила 4165 и 1764 мм. Передняя колея 1492 миллиметра, а задняя 1532 миллиметра, что позволяет без особого труда покорять загородные дороги, не боясь увязнуть в грязи. Ширина дорожного просвета равна 195 миллиметрам. Общая масса полного автомобиля равна 1650 килограмм, порожняя – до 1200. Удачное распределение по осям в соотношении 51% к 49%. Спереди у автомобиля дисковые тормоза, сзади – барабанные.

Таблица ТТХ: Технические характеристики Lada XRay

Автомобиль Лада XRAY: Технические характеристики
Объем двигателя	1.6 (106 л.с.)	1.6 (114 л.с.)	1.8 (123 л.с.)
Тип кузова	5-дверный хэтчбек
Число мест	5
Длина, мм	4164
Ширина, мм	1764
Высота, мм	1570
Колесная база, мм	2592
Дорожный просвет (клиренс), мм	190
Снаряженная масса, кг	1140	1156	1135
Тип двигателя	бензиновый, с распределенным впрыском
Расположение	спереди, поперечно
Число и расположение цилиндров	4, в ряд
Рабочий объем, куб. см.	1596	1598	1774
Число клапанов	16	16	16
Максимальная мощность, л. с. (кВт) / об/мин	106 (78)	114 (84)	123 (90)
Максимальный крутящий момент, Нм / об/мин	148	155	178
Коробка передач	механическая, 5-ступенчатая
Привод	передний
Шины	195/65 R16, 205/55 R16
Максимальная скорость, км/ч	170	171	183
Время разгона 0-100 км/ч, с	11,9	10,3	10,9
Расход топлива в смешанном цикле, л/100 км	7,5	6,9	7,1
Емкость топливного бака, л	50
Тип топлива	бензин, АИ-95

Подробнее о Ладе «Икс Рей»

Технические данные Лада Х Рей – характеристики, объем двигателя, клиренс (фото, видео)

Обзор Лады Х Рей – оригинальный дизайн и технические характеристики

Коричневый Лада Х Рей – часть цветовой гаммы новой модельной линии Lada, фото, видео, отзывы

Оцинкован ли кузов новой Lada XRay?

Стоимость новой Лады Х Рей — дорого или доступно?

Размер кузова х Рея

Кузов
Колесная формула / ведущие колеса	4 x 2 / передние
Расположение двигателя	переднее поперечное
Тип кузова / количество дверей	кроссовер / 5
Количество мест	5
Длина / ширина / высота, мм	4165 / 1764 / 1570
База, мм	2592
Колея передних / задних колес, мм	1484…1492 / 1524…1532
Дорожный просвет, мм	195
Объем багажного отделения в пас. / груз. вариантах в л.	361 / 1207

То, что авто является продолжателем нашумевшей «х» серии, видно с первого взгляда. По бокам Xray красуются объемные иксы, которые придают автомобилю футуристический вид. В дополнение к боковым тиснениям кузова, разработчики также дополнили переднюю часть, с заходом на бампер, в которых также отчетливо читается происхождение авто от серии «Х». Говоря об эстетической составляющей – красиво, но практично ли?! В народе эту машину уже успели окрестить «кошмаром жестянщика», и на это есть веские причины. При малейшем повреждении геометрии части кузова, которая участвует в образовании знаменитого икса, владелец должен быть готов к тому, что полное восстановление будет возможно только по средствам приобретения новой части кузова.

Ни один, даже самый профессиональный жестянщик, не сможет, положив руку на сердце, гарантировать идеальный результат починки. Соответственно, кузов весьма нежен и требует аккуратного вождения, во избежание больших вливаний средств.

Статьи по теме: Тюнинг лада Икс Рей

[ads2]

Еще одним приятным моментом стала оптика. Сзади, под определенным углом, можно сказать, что новинка от Lada даже «отдает» Кайеном. К созданию оптики производители подошли с полной ответственностью, наделив машину качественным светом и стеклом.

Говоря о недостатках, которые владельцы успели выявить, следует выделить следующие пункты:

• первые модели выпускались со слишком маленьким радиусом дисков, вследствие чего авто теряло свой внешний вид – колесные арки «пустовали»;
• отсутствуют накладки на низ кузова.

Говоря об этих проблемах, следует упомянуть, что производитель назвал свое детище кроссовером, что обязывает к определенным требованиям. Так, даже при клиренсе, который превосходит прародителя (см. Х рей или Сандеро), отсутствие накладок не спасет машину от настоящего бездорожья. И дело даже не в том, базовая комплектация или иная – абсолютно все версии не приспособлены к трудностям, так как низ кузова будет нещадно обрамлен сколами, на крашеном покрытии.

Lada XRay: технические характеристики

Платформа для машины была взята от Renault Sandero, что уже означает энергоёмкость, отличную управляемость и высокий дорожный просвет Лада Х Рей. Днище и силовая составляющая изменились мало. Кузов получил увеличенную жёсткость благодаря подрамнику, который выполняет ещё и другие важные функции. Доработке подверглись подвеска, кузов и некоторые составляющие. Изменилась линейка двигателей.

Модельный ряд будет представлен только типом кузова «хэтчбек», «универсал» и «седан» не предусмотрены. Кузов спроектирован с помощью Рено и Ниссан при использовании инновационных цифровых технологий. При общей платформе с другими моделями АВТОВАЗа производители попытались добиться максимальных внешних различий и улучшения технических характеристик.

Заявлено, что в конструкции присутствует около 600 оригинальных деталей, которые впервые используются на ВАЗе. Производитель планирует, что более 70% комплектующих будет изготавливаться на российских заводах.

Габаритные размеры Лада Х Рей

Габариты Лада Х Рей:

• Длина/ширина/высота – 4165/1764/1570 мм.
• Величина колёсной базы составляет 2592 мм.
• Размер колеи передних/задних колес – 1484/1524 мм с колёсами R16 и 1492/1532 мм с колёсами R15.
• Клиренс Лада Х Рей составляет 195 мм в незагруженном состоянии и 170 мм при максимальной загрузке.
• Масса распределяется между осями в соотношении: передняя – 51%, задняя – 49%.
• Передний/задний свесы – 830/743 мм.
• Величины углов въезда/съезда – 21/34° (без загрузки).

Как видим, ХРей Лада, размеры которой мы привели выше, можно отнести к переднеприводным компактным кроссоверам.

Подвеска Лада Х Рей

Передняя подвеска Лада Х Рей – независимая, типа МакФерсон. Она имеет существенные отличия от всех выпускаемых сегодня переднеприводных моделей Лада. В доработанной подвеске появись рычаги, которые крепятся к подрамнику посредством сайлентблоков. На конце рычага – шаровый палец. Задняя подвеска – полузависимая скручиваемая балка. Такая подвеска надёжна и улучшает ходовые качества.

Какой двигатель стоит на Лада Х Рей?

Производитель остановился на трёх возможных вариантах двигателей. Все они бензиновые и достаточно мощные:

• Базовый ВАЗ-21129, хорошо зарекомендовавший себя и широко используемый в других моделях АВТОВАЗа.
• Модернизация системы впуска позволила увеличить мощность двигателя с 98 л.с. до 106 л.с. При низких оборотах подача воздуха осуществляется по длинным впускным каналам, а при высоких – по коротким, что обеспечивает изменение состава топливной смеси. Двигатель работает с 5-ступенчатой коробкой передач от Renault, которую собирают на АВТОВАЗе.
• Бензиновый двигатель, разработанный Рено-Ниссан (у Ниссан он называется HR16, у Рено – h5M). Разработка 2006 года массово устанавливается на автомобили Двигатель работает в тандеме с 5-МКПП от Рено.
• Современный и самый мощный двигатель ВАЗ-21128. Характеристики двигателя были улучшены посредством модернизации, направленной на увеличение хода поршня. Используется шатунно-поршневая группа от компании Federal-Mogul, производство осуществляет дочернее предприятие АВТОВАЗа.

Двигатель работает в паре с роботизированной автоматической трансмиссией. АМТ (коробка-робот) является отечественной разработкой. За основу была взята ВАЗовская МКПП, а над управляющей электроникой поработала немецкая компания ZF. Коробку собирают в Тольятти.

Варианты двигателей Lada Xray

В АвтоВАЗе было принято решение выпустить новый автомобиль с тремя вариантами моторов:

• HR4 – 1.6 л. двигатель, мощностью 110 л.с. имеет самый низкий расход топлива, всего 6.9 литра на 100 км. пути в смешанном стиле вождения. Разогнать новую Ладу с места до 100 км/ч он может за 10.3 секунды, а предельная скорость составляет 171 км/ч. Этот двигатель также устанавливается на Ниссан Сентара, но обладает дополнительными 4 л.с. мощности (установка двигателя на Lada xRay прекращена в 2021 году)
• 21129 – 1.6 л. двигатель обладает мощностью 106 л.с. Расход топлива у данного мотора самый высокий среди представленных вариантов, и составляет 7.5 литров. Максимальная скорость 170 км/ч, а разгон с места до ста занимает 11.9 секунд. Отличительной особенностью данного мотора стала французская механическая коробка передач х рей. Решиться на такую замену пришлось из-за высокой шумности ВАЗовского варианта механики.
• 21179 – 1.8 л. двигатель является ТОПовым вариантом для xRay, он выдает мощность в 122 л.с. Разгон до ста 10.9 секунды при максимальной скорости в 183 км/ч. Однако максимальныt показатели не стали причиной максимального расхода топлива, на 100 км/ч расход составил только 7.1 литра.

Lada (ВАЗ) XRay / Лада XRay

XRay: параметры, тесты (тестдрайв, краштест), отзывы, автосалоны, фото, видео, новости.

Лада XRay

— начало выпуска 2021 г. В нем сочетается стиль и новые технологии, благодаря разработкам компании Лада вы получаете отличный коктейль из отличного дизайна и высоких технических показателей. Среди существующих базовых цветов XRay вы легко найдете тот что вас устроит, но скорее всего можно и подобрать под заказ. У нас вероятнее всего представлены не все комплектации этой модели Лада XRay, среди которых представлены различные варианты сборки XRay: коробка переключения передач может быть автоматической или механической, отделка салона кожой или вставки дерева, диски и другие дополнительные элементы кузова XRay, которые непременно отразятся в цене XRay. Техничекая характеристика это хорошо, но не забываем о безопасности XRay или объеме двигателя который потом даст о себе знать по затратам в эксплуатации в будущем, а так же ремонт XRay и техническое обслуживание с гарантийным сроком. Так как преобретение производится не на несколько месяцев, а на несколько лет, поэтому предусмотрите для себя что вы будете делать в летний и зимний период,
какие поездки совершать на XRay
. Ниже в таблице приведены в сравнении несколько комплектаций XRay, среди параметров отражены: какие габаритные размеры у XRay, какой расход топлива по городу, трассе или смешанный, объем двигателя, максимальная скорость и время разгона до 100 км/час, снаряженная или полная масса XRay, колесная база, колея передних и задних колес, тип трансмиссии (кпп/какая коробка передач), какой привод, размер шин, какая мощность или крутящий момент и какая цена. Помимо всех цифр можно прочитать отзывы автовладельцев о XRay, просмотреть видео или новости, тесты (тестдрайв, краштест).

Багажник Лады Икс Рей

Хотя объем – это не один из главных показателей практичности багажного отделения. Общее пространство является не менее важным критерием. В лада х рей скрыты колесные арки, что делает пол идеально ровным и более вместительным, нежели в других марках автомобилей. Получается, что каждый сантиметр багажника будет использован по прямому его назначению.

Верх багажного отделения ограничивается и отделяется специальной пластиковой полкой багажника. Конечно же, при необходимости ее можно демонтировать под самое стекло, но в этом случае нужно быть аккуратным, дабы не разбить его.

Также, в багажнике имеется дополнительная функция – двойной пол лада х Рей. При этом на верхней части есть специальные фиксаторы и ремни, благодаря которым можно надежно прикрепить груз во время транспортировки во избежание его поломки.

Было бы преимущественно хорошо, если бы при сложенном заднем диване образовывался полностью ровный пол багажника. Ведь спинка дивана устанавливается под небольшим углом. Хотя этого все-таки можно избежать, убрав подушки заднего кресла. Багажник Lada xRay практически одинаковый по размеру и своему объему с автомобилем Лада Калина.

При разложенном заднем диване, в багажник вполне можно разместить запасное колесо, ряд инструментов и других личных вещей водителя.

Дизайн Лада Х Рей 2016-2017

Передняя часть автомобиля смело заслуживает пятёрки. Если не обращать внимания на габаритные размеры, то оценив автомобиль с этого ракурса впервые можно подумать, что пред нашим взором предстал тяжелоатлет с мощным телосложением.

Лада Икс Рей 2016-2017, вид спереди

Но осматривая дальше иллюзия становится очевидной. На темном фоне спереди можно увидеть целостный образ буквы «Х» это уже вошло в моду и появилось на новых кроссоверах Lexus RX, Mitsubishi Outlander. Отлично смотрится и световая оптика, представляющая собой по форме неправильный четырёхугольник. Дополнительное освещение выполнено в форме бумеранга. Нижняя часть бампера перекрывается защитой, что позволяет кроссоверу двигаться в совершенно различных условиях.

Новая Икс Рэй 2016-2017, вид сбоку

Линейности на боковых частях ещё более выражено, чем спереди. Завихрения начинаются от фар спереди и сзади и доходят до колёс. Двери новинки резкие, с остренькими углами по краям. На нижней части двери красуется хромированный обод, располагающийся до колёсных арок. Размер боковых стекол второго ряда маловат и не очень впечатляет. Порадовать Лада может крупными колёсными арками, хотя установленные на серийную модель небольшого размера колеса уже не так впечатляют как это было у концепта. Зато клиренс выдался отличный для езды в условиях бездорожья.

Lada XRay, вид сзади

На крыше сзади имеется козырек с функцией дополнительной подсветки. Бампер внушительного размера. Основную часть сзади занимает дверь багажного отделения. Фары бумерангообразной формы, одна из частей заползает на дверь багажника, а вторая на корпус машины. Окно сзади выполнено в темных оттенках, посередине красуется логотип фирмы. Выхлопные трубы по форме напоминают параллелограмм. В качестве окраски кузова доступны следующие варианты: белый, огненно — красный, серо — бежевый, черный металлик и серебристо — бежевый.

Коробка передач в Lada xRay и ее особенности.

В паре со 110-ти и 106-ти сильными моторами АвтоВАЗ решил установить пятиступенчатую механическую коробку передач. Однако только на 110-сильный мотор будет установлена родная механика, 106-сильный мотор будет обладать французским аналогом с доработками автоконцерна. На самый мощный вариант двигателя будет установлен автомат х рей, над которым серьезно поработала компания ZF. Трансмиссия выполнена в лучших традициях качества. На выбор предлагаются вариант с механической КПП и роботизированной коробкой автомат.

В обоих вариантах владельцы отмечают приемистость авто, которое словно подстраивается под водителя. Рулевое управление четкое – машина реагирует на приложенные усилия без задержек. Отмечается чрезвычайная живучесть рулевой рейки, которая несколько туговата для авто данного веса, однако в ходе знакомства, чувствуется что она подстроена под особенности управления.

Подвеска Х Рея

В Lada xRay установлена независимая подвеска МакФерсон. Данная подвеска в х рей значительно повышает управляемость авто, а простота подвески завоевала имя самой надежной на отечественном рынке.

Чувствительность автомобиля в поворотах повышена благодаря креплению ступицы к кузову при помощи рычагов и шарниров. В подвеске нет ничего необычного – она полностью скопирована (за исключением клиренса) с Сандеро.

Типичные передние МакФерсон и задняя полузависимая не привносят особого комфорта, но и не страдают болезнями многорычажек, которые дорого обходятся любителям эксплуатации нежного оборудования на российских дорогах.

Из минусов, необходимо отметить слабоватую поперечную устойчивость. Так, при определенной скорости, машина всем своим поведением будет намекать на то, что она не создана для маневренной езды.

Если вы любитель резко входить в повороты – этот авто не для вас. При сильных перегрузах водитель будет ощущать определенные вибрации, которые будут свидетельствовать о серьезном крене, поэтому можно сделать вывод, что на этой машине комфортнее ездить по прямым дорогам.

Здесь были установлены L-образные рычаги на подобии спортивных моделей автомобилей. Они изготовлены из высокопрочной стали и чугуна, что позволяет прослужить этому элементу долгие годы. Такие же рычаги устанавливаются на Приору, Калину и Гранту.

Задняя подвеска использует торсионно-рычажный вариант крепления. К ее преимуществам можно отнести лучшие кинематические характеристики, простота в обслуживании, а также низкую массу. В перспективе имеется проект полного привода в автомобиле, выпуск которого намечен на 2021 год.

Главной особенностью подвески в х Рей является не возможность полного отключения противобуксовочной TCS системы. Ее недостатки особенно сильно проявляются зимой, поскольку во время пробуксовки на снегу, система блокирует колесо, что только усугубит ситуацию. В паре с этой системой работает АБС и система курсовой устойчивости ESC.

Похожие статьи:

Лада х рей фото цены характеристики комплектации

Похожие записи

Причина, по которой Автоваз исключает двигатель 1.8 у Lada Vesta

Lada Xray Cross Instinct – детальный обзор комплектации

Характеристики ВАЗ Xray

Показ предсерийной версии Lada XRAY состоялся в рамках выставки Moscow Off-Road Show в августе 2014 года. В начале ноября 2015 года производитель представил серийный вариант, а в середине декабря в Тольятти стартовал конвейерный выпуск модели.

«АвтоВАЗ» позиционирует Lada XRAY как хэтчбек B-класса, выполненный в стиле SUV. В основе автомобиля лежит переднеприводная платформа «B0», позаимствованная у партнеров Renault-Nissan. Это же шасси легло в основу автомобилей Renault Sandero Stepway и Logan. Длина хэтчбека составляет 4164 мм, ширина – 1764 мм, высота – 1570 мм, колесная база – 2592 мм. Клиренс равен 195 мм в «походном» состоянии (при полной загрузке – 170 мм).

Дизайн экстерьера Lada XRAY спроектирован российскими разработчиками под руководством Стива Маттина. Основная «фишка» внешности – Х-образная фронтальная часть кузова и аналогичное оформление боковых панелей кузова. Сильно наклоненное ветровое стекло, короткие свесы и покатая крыша добавляют силуэту динамичности. Гармонично смотрится узкая головная оптика, выполненная в форме неправильного четырехугольника. Корма хэтчбека выглядит аккуратно и подтянуто за счет фонарей в форме бумеранга, компактной крышки багажника и бампера с накладкой из некрашеного пластика. Дизайнерам удалось создать образ не лишенный индивидуальности.

Интерьер Lada XRAY получился лаконичным и продуманным. Приборы помещены в три «колодца», с правой стороны располагается дисплей бортового компьютера. Рулевое колесо с четырехспицевым дизайном получило выраженный рельеф, а в «топовых» версиях несет клавиши управления мультимедийными функциями. Отсутствует регулировка руля по вылету, что частично компенсирует регулировка по высоте водительского кресла.

Эргономика водительского места на достойном уровне. На передней панели нет лишних деталей и кнопок. По центру расположился 7-дюймовый экран информационно-развлекательного комплекса. Ниже разместили миниатюрный блок «климата». Но это в «насыщенных» комплектациях, базовая версия предлагает магнитолу и кругляши «печки» или кондиционера.

В отделке хэтчбека использован преимущественно жесткий, но текстурный пластик, сиденья обтянуты приятной на ощупь и качественной тканью. К подгонке элементов торпедо, обивки дверей и других частей салона нареканий нет. Шумоизоляция на порядок выше, чем у машин, ранее выпускавшихся автоконцерном.

Кресла передних пассажиров имеют большой диапазон регулировок, но слабовыраженную боковую поддержку. Задний диван грамотно спрофилирован и предлагает седокам достаточный запас пространства, но втроем на нем тесновато.

Специальные боксы для хранения вещей помогут рационально использовать внутреннее пространство: в дверях – объемные карманы с подстаканниками, под передним пассажирским сиденьем – выдвигающийся бокс, а под центральной консолью – пара ниш и еще несколько подстаканников.

Объем багажника хэтчбека равен 376 литров, а при сложенных спинках заднего дивана размер отсека увеличивается до 1382 л. При этом получается ровная площадка, а под фальшполом скрывается «подполье». На дне лежит полноценная 15-дюймовая «запаска», хотя стандартно автомобиль оснащается колесами R16.

Базовым силовым агрегатом стал 16-клапанный двигатель объемом 1,6 литра мощностью 106 л.с. Он работает в паре с 5-ступенчатой «механикой» производства Renault и разгоняет автомобиль до 100 км/ч за 11,9 с. Расход топлива в смешанном цикле – 7,5 литра на «сотню».

Промежуточный вариант силовой установки представлен 1,6-литровым мотором мощностью 114 л.с. Он также комплектуется МКПП на 5 ступеней. Заявленный средний расход топлива – 6,9 литра на 100 км. Разгон до сотни занимает 10,3 секунды.

Топовым стал 123-сильный мотор рабочим объемом 1,8 литра, который уже опробовали на модели Priora. Этот двигатель сочетается с 5-диапазонной роботизированной трансмиссией, потребляя в среднем 7,1 л на 100 км. Динамика – 10,9 секунды на разгон с места до 100 км/ч.

Передняя ось хэтчбека XRAY укомплектована независимой подвеской со стойками типа McPherson, а задняя ось – полунезависимой архитектурой с балкой кручения. Рулевой механизм имеет реечное строение с интегрированным электрогидравлическим усилителем управления. На колесах спереди монтированы вентилируемые диски тормозной системы, сзади – барабанные устройства.

Для Lada XRAY (на старте продаж) предусмотрено две основные комплектации – «Optima» и «Top». Плюс два дополнительных пакета – «Comfort» и «Prestige».

В список оснащения базовой версии входят: две фронтальные подушки безопасности, иммобилайзер, бортовой компьютер, дневные ходовые огни, ABS с EBD, функция стабилизации (ESV), технология помощи при старте в гору, электрогидравлический усилитель руля, система ЭРА-ГЛОНАСС, электрические стеклоподъемники на передних дверях, «музыка» с четырьмя динамиками и 16-дюймовые диски.

Автомобиль в версии «Optima» + «Comfort» в дополнение к базовому оборудованию получает кондиционер, подогрев передних кресел и охлаждаемый вещевой ящик.

Исполнение «Top» предлагает: противотуманные фары, задние электростеклоподъемники, электропривод и электрообогрев наружных зеркал, датчики парковки сзади, мультимедийный комплекс с сенсорным 7-дюймовым дисплеем, навигацию.

В арсенале комплектации «Top» + «Prestige» есть: обогрев ветрового стекла, климат-контроль, датчики дождя и света, камера заднего вида и усиленная тонировка стекол.

Пока производитель предлагает XRAY только с передним приводом. Но на этом останавливаться не собирается, так как планирует запустить в серию еще одну модели – XRAY Cross, которая как раз получит полный привод.

Итоги

Таким образом, машина уникальна в своей природе. Являясь новым дыханием Лады, она действительно заслужила свое законное место в сердцах автолюбителей.

С одной стороны, отсутствие новейших технологий может расстроить притязательного владельца, с другой – значительно уменьшает итоговый чек за обслуживание и ремонт (конечно, если только речь не идет о кузовном ремонте, который по стоимости будет бить все рекорды).

Разнообразие начинок и стремление к совершенству однозначно заслуживают уважения и похвалы производителя, в действиях которого проявляется стремление угодить своему покупателю.

В целом модель Lada xRay получилась весьма удачной, и быстро завоевывает популярность на российском рынке.

Статьи по теме: х-Рей против конкурентов: тест драйв xRay и Renault Sandero

Лада х рей фото

Резонансный перенос энергии флуоресценции – обзор

2.1 Разработка зонда FRET для мониторинга активации каспаз

Технология FRET может предоставить ценную информацию о динамике и характере ферментативной активности. Ранние зонды FRET для активации каспазы использовали гибридный белок, то есть белок с усиленной голубой флуоресценцией (ECFP) в качестве донора FRET и белок с усиленной желтой флуоресценцией (EYFP) в качестве акцептора FRET, связанные пептидами, содержащими расщепление каспазы-3. последовательность, DEVD (Luo, Yu, Pu, & Chang, 2001; Rehm et al., 2002; Тиас и др., 2000). Наиболее важной характеристикой зонда FRET является специфичность к молекуле-мишени. Молярный коэффициент экстинкции акцепторного белка является важным фактором для определения эффективности FRET; однако молярный коэффициент экстинкции EYFP, обычного флуоресцентного белка в акцепторах FRET, демонстрирует высокую чувствительность к протонам и ионам хлора, особенно в физиологических условиях (Jayaraman, Haggie, Wachter, Remington, & Verkman, 2000; Llopis, McCaffery, Miyawaki, Фаркуар и Цзянь, 1998).В нескольких сообщениях предполагается, что подкисление происходит во время апоптоза (Matsuyama, Llopis, Deveraux, Tsien, & Reed, 2000; Perez-Sala, Collado-Escobar, & Mollinedo, 1995; Vincent, TenBroeke, & Maiese, 1999) и что хлорид/ бикарбонатный обменник участвует в апоптотических событиях (Araki et al., 2002; Maeno, Ishizaki, Kanaseki, Hazama, & Okada, 2000). Поскольку изменение концентрации хлорида также происходит в нейронах, было бы крайне важно использовать нечувствительный к хлориду индикатор для мониторинга активации каспазы в нейронах.Из-за этих особенностей исследователи должны с осторожностью использовать EYFP в качестве акцептора FRET, особенно для визуализации апоптоза in vivo .

Чтобы преодолеть эти ограничения, Венера была использована в качестве акцептора FRET в зонде SCAT3 (рис. 12.1; Takemoto et al., 2003), поскольку она демонстрирует низкую чувствительность к протонам и ионам хлора (Nagai et al., 2002). Действительно, SCAT3 показал высокую стабильность in vitro и в живых клетках по сравнению с ранее описанным зондом ECFP-EYFP (Takemoto et al., 2003). Разработка индикаторов SCAT3 позволила исследователям отслеживать активацию каспазы в живых клетках и in vivo в режиме реального времени (Campbell & Okamoto, 2013; Koto, Kuranaga, & Miura, 2009; Kuranaga et al., 2011; Nakajima, Kuranaga, Sugimura, Miyawaki, & Miura, 2011; Ohgushi et al., 2010; Takemoto et al., 2007; Yamaguchi et al., 2011).

Резонансный анализ переноса энергии флуоресценции (FRET)

Анализ переноса энергии флуоресцентного резонанса (FRET)

Мембранные белки составляют 1/4-1/3 от общего числа 30000 белков, кодируемых геномом человека.Мембранные белки играют важную роль в различных сложных и уникальных клеточных процессах, включая транспортировку материалов, распознавание клеток, иммунный ответ, передачу и регуляцию сигналов, а также перенос энергии, и др. . Почти 70% известных или исследуемых мишеней лекарственных средств представляют собой мембранные белки. По-прежнему остается сложной задачей определение структур и выполнение функциональных анализов мембранных белков.

Компания Creative Biostructure создала превосходную сервисную платформу для преобразования генов в структуру мембранных белков группой опытных профессионалов.Наш полный набор услуг по мембранному белку, включая экспрессию и очистку, кристаллизацию и определение, а также различные функциональные анализы как in vivo , так и in vitro , ускоряет и ускоряет ваши научные исследования. Creative Biostructure может разработать и предоставить индивидуальный анализ Mempro™ флуоресцентно-резонансного переноса энергии (FRET) или анализ FRET для функционального исследования взаимодействия мембранных белков.

Межбелковые взаимодействия имеют решающее значение для сигнальных сетей мембранных белков.Однако резонансная передача энергии флуоресценции

может происходить только в том случае, если расстояние между донором и акцептором не превышает 10 нм, что делает его очень мощным инструментом для обнаружения и определения взаимодействий мембранных белков.

Резонансный анализ переноса энергии флуоресценции ( FRET ), один из наших наиболее передовых и желательных методов с широким диапазоном применения, выполняет анализы для прямого определения состояния олигомеризации и степени олигомеризации мембранных белков в их природной среде.FRET представляет собой зависящее от расстояния взаимодействие между флуоресцентными парами донор-акцептор в непосредственной близости, при котором энергия флуоресценции передается от возбужденного донора к подходящей молекуле-акцептору без излучения. Эффективность FRET чрезвычайно зависит от расстояния между донором и акцептором и от перекрывающихся спектров излучения донора и возбуждения акцептора.

Рисунок 1. Схема фотофизического процесса-FRET (Molecules, 2012)

FRET может иметь место только в том случае, если расстояние между донором и акцептором не превышает 10 нм, что делает его очень мощным инструментом для обнаружения и определения взаимодействий мембранных белков.Creative Biostructure может предоставить платформу Mempro™ FRET для выполнения структурного и функционального анализа мембранных белков.

•      Mempro™ FRET с индивидуальной парой донор-акцептор

Примите во внимание большое влияние расстояния Форстера на FRET. Требование исследования мембранного белка.

Таблица 1.Популярные пары донор-акцептор FRET и их соответствующие фотофизические свойства.

Оптимальные условия для FRET:
1. Пара донор-акцептор должна находиться на близком расстоянии (обычно 1–10 нм).
2. Перекрытие спектра поглощения акцептора и спектра излучения донора.
3. Ориентации между донором и акцептором должны быть приблизительно параллельны.

•      Mempro™ FRET для специальных целей

FRET может обеспечивать не только качественные измерения, но и количественные данные в исследованиях функции мембран. Creative Biostructure разработала полный набор методов FRET , таких как 1) Upconversion FRET , 2) Photochromic FRET , 3) Single-Molecule-FRET и 4) 90 FRET Frustration. . Creative Biostructure является вашим компетентным и профессиональным научным партнером для выполнения всех видов приложений FRET мембранных белков, в том числе:
1. Структура и конформация мембранных белков,
2.Пространственное распределение мембранных белков,
3. Олигомеризация комплексов мембранных белков,
4. Мембранный белок участвует во взаимодействиях рецептор/лиганд,
5. Взаимодействие между мембранными липидами и мембранными белками.

Рисунок 2. Внутримолекулярный и межмолекулярный FRET (Current Opinion in Structural Biology, 2001)

Рисунок 3. Применение одномолекулярного FRET (J. Am. Chem. Soc., 2013)

Рисунок 4. Измерение взаимодействия между мембранами белков, липидов и лигандов с помощью FRET (PNAS, 2013)

•      Mempro™ FRET с индивидуальными подходами к визуализации

Компания Creative Biostructure разработала ряд методик для определения FRET.Как правило, мы предлагаем три пользовательских подхода, которые оказались особенно полезными на основе практических соображений:

1. Фотообесцвечивание донора и акцептора
FRET можно получить путем доступа к скорости обесцвечивания донора с присутствием акцептора и без него. Основные два преимущества этого подхода: относительно прямолинейный, легко реализуемый. Требуются соответствующие комплекты фильтров и мощный источник света, позволяющие обесцвечивать акцептор.
2. Сенсибилизированное излучение
Сенсибилизированное излучение является простейшим методом обнаружения FRET, и наиболее идеальным условием для этого метода является полное разделение каналов донора и акцептора и отсутствие перекрестных помех между ними.
3. Микроскопия флуоресцентной визуализации в течение всего срока службы
Микроскопия флуоресцентной визуализации в течение всего срока службы, также называемая FLIM, может использоваться для картирования пространственного распределения времени жизни флуорохромов как на микроскопических изображениях, так и в живых клетках. Creative Biostructure может определять точное пространственное расположение или распределение мембранных белков с высоким разрешением и специфичностью в живых клетках.

Creative Biostructure также предоставляет ряд услуг по проведению функциональных анализов Mempro™. Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам для получения подробной цитаты.

Ссылки:
H.C. Ishikawa-Ankerhold, et al . (2012). Усовершенствованные методы флуоресцентной микроскопии — FRAP, FLIP, FLAP, FRET и FLIM. Молекулы , 1 7 (3): 4047-4132.
К. Труонг и М. Икура. (2001). Использование микроскопии визуализации FRET для обнаружения межбелковых взаимодействий и конформационных изменений белков in vivo. Текущее мнение по структурной биологии , 11 : 573-578.
В. Бэ, и др. . (2013). Наблюдение в режиме реального времени за образованием множественных белковых комплексов с помощью одномолекулярного FRET. Дж. Ам. хим. Soc ., 135 (28): 10254-10257.
К. Мацусита, и др. . (2013). Ориентация трансмембранной спирали влияет на связывание с мембраной внутриклеточного околомембранного домена в пептидах рецептора Neu. Проц. Натл. акад. науч. США, 110 (5): 1646–1651.

Только для исследовательских целей. Не для использования в диагностических или терапевтических процедурах.

Широкопольный микроскоп FRET и TIRF

Сборы/тарифы за использование оборудования в наборе для микроскопии, определенные на основе анализа, проведенного компанией Government Costing, Университет штата Иллинойс.Действует с 1 августа 2021 г.; подлежит изменению.

Широкопольный микроскоп FRET и TIRF

Zeiss Axiovert 200M сконфигурирован для работы с широкопольной флуоресцентной микроскопией с резонансным переносом энергии (FRET) и флуоресцентной микроскопией с полным внутренним отражением (TIRF). Микроскоп оснащен охлаждаемой камерой Photometrics 512 Evolve EMCCD с высокой чувствительностью для количественной флуоресцентной визуализации при слабом освещении.

FRET-микроскопия позволяет определить расстояние между двумя молекулами в пределах нескольких нанометров, расстояние, достаточно близкое для возникновения молекулярных взаимодействий. Для FRET-микроскопии управление визуализацией и системой осуществляется с помощью программного обеспечения MetaFluor. Наборы фильтров, установленные в микроскопе, позволяют визуализировать ряд пар FRET, таких как ECFP-YPet.

TIRF-микроскопию можно использовать для наблюдения за флуоресценцией отдельной молекулы или тонкой области образца, обычно толщиной менее 200 нанометров.В настоящее время для визуализации TIRF доступны три лазера (длины волн 405 нм, 473 нм и 561 нм).

Пользовательские ресурсы

 

Дополнительную информацию об этом оборудовании см. на страницах «Календари», «Контакты» и «Сборы».

Примечания:

* Плата за использование добавляется к нашей стоимости покупки определенного драгоценного металла (золото, золото-палладий или платина), израсходованного во время нанесения покрытия.Плата за золото и золото-палладий составляет 0,30 долл. США/нм, а за платину взимается плата 0,45 долл. США/нм. Дополнительную плату легко определить для испарителя из двойного металла, общая толщина которого указана в нм. Для устройств напыления при 65 мТорр и 40 мА, золотые покрытия при 3 нм/10 секунд, золото-палладиевые покрытия при 1 нм/10 секунд и платиновые покрытия при 1 нм/10 секунд. Таким образом, стандартный 70-секундный слой золота будет стоить дополнительно (21 x 0,30) 6,30 доллара, 70-секундный слой золото-палладия будет стоить (7 x 0,30) 2,10 доллара, а 70-секундный слой платины будет стоить (7 х 0.45) 3,15 доллара.

**Система Xradia NanoCT требует настройки образца персоналом перед получением рентгеновских снимков.

 

Оценка степени молекулярного контакта между поверхностями целлюлозных волокон с помощью FRET-микроскопии

Резонансный перенос энергии Фёрстера (FRET)

Следующее краткое введение в теорию Фёрстера взято из книги Б.В. Ван дер Меер (Meer 2013) и частично основан на оригинальных статьях Фёрстера. Эффективность передачи энергии между донорным и акцепторным красителем зависит от расстояния между двумя молекулами и в принципе определяется радиусом Фёрстера (\(\text {R}_0\)).6} \end{выровнено}$$

(1)

, где r обозначает расстояние между донором и акцептором, а \(\text {R}_0\) обозначает радиус Фёрстера пары донор-акцептор. Практически эффективность FRET можно измерить различными методами, которые могут быть реализованы либо в установках микроскопии, либо измерены спектрофотометрически, оба из которых использовались в этой статье.

Независимо от метода измерения процесс FRET можно обнаружить по различным аспектам эффекта.FRET изменяет интенсивность излучения донора (гашение донора), интенсивность излучения акцептора (сенсибилизация акцептора), время жизни флуоресценции донора (измерения времени жизни) и поляризацию света (измерения анизотропии). Здесь мы использовали два наиболее распространенных метода измерения FRET, а именно тушение донора (DQ) и сенсибилизацию акцептора (AS). Тушение донора измеряет уменьшение флуоресценции донора из-за FRET. Сенсибилизация акцептора измеряет увеличение флуоресценции акцептора из-за FRET.Хотя DQ является показанием для FRET, в этом нельзя быть уверенным, поскольку существуют другие механизмы, такие как гашение концентрации, которые могут деактивировать возбужденный донор. AS, с другой стороны, предоставляет убедительные доказательства FRET, поскольку флуоресценция акцептора может быть увеличена только за счет некоторого переноса энергии (Meer 2013). Отличный обзор о реализации и подводных камнях метода предоставлен Broussard et al. (2013). Одна важная часть использования FRET, которую следует упомянуть здесь, заключается в тщательной проверке того, действительно ли сигнал действителен, особенно когда спектроскопические данные недоступны.Это можно сделать с помощью отрицательных контролей, динамического FRET или применения более одного метода FRET.

Материалы

Красители 7-(диэтиламино)кумарин-3-карбогидразид (DCCH, Purity \(95{\%}\), CAS: 100343-98-4) и флуоресцеин-5-тиосемикарбазид (FTSC, Purity \ (99{\%}\), CAS: 76863-28-0) были куплены у Santacruz Biotechnology. Растворители N,N-диметилформамид (ДМФ), тетрагидрофуран (ТГФ) и ацетонитрил были приобретены у VWR. Все химические вещества использовали без дополнительной очистки.Поли(2-гидроксиэтилметакрилат) (pHEMA) для производства тонких пленок был приобретен у Sigma Aldrich. Модельные пленки наносились на ПЭТ-фольги. Используемая целлюлоза представляла собой небеленую крафт-целлюлозу из хвойной древесины промышленного производства.

Подготовка образцов

Для исследования волокон целлюлозы [беленая крафт-древесина, соотношение ель/сосна (90/10)] образцы готовили, как описано Thomson et al. (2007). Волокна окрашивали в 15 мл раствора того или иного красителя в ДМФА (1 ммоль/л и 0.2 ммоль/л) в течение ночи при pH 5, доведенном добавлением HCl. Красители образуют метастабильную связь с восстанавливающим концом молекулы целлюлозы, и при добавлении HCl это равновесие смещается в сторону метастабильных видов связи. После окрашивания к раствору немедленно добавляли боргидрат натрия \(\hbox {NaBH}_4\) (0,02 ммоль \(\text {NaBH}_4\) на 0,5 г волокон) и оставляли для реакции на 1 час. Боргидрат натрия приводит к восстановительному аминированию красителей с целлюлозой, что приводит к ковалентной связи между реагентами.После этого восстановительного аминирования образцы сначала промывали в ДМФА и снова промывали экстракцией по Сокслету ацетонитрилом в течение по крайней мере 4 ч для удаления любого нековалентно связанного красителя. Затем окрашенные волокна хранили в водном буферном растворе с рН 9, используя 0,4 г/л буры. Волокнистые связки были приготовлены путем скрещивания одного волокна, окрашенного DCCH, и одного волокна, окрашенного FTSC, в капле воды (рН 9) и последующей их сушки в листовом формирователе Rapid Köthen. Затем для микроскопии соединения волокон переносили на предметные стекла для микроскопии.Пересечения волокон (отрицательный контроль для FRET) готовили путем простого пересечения двух волокон и покрытия их покровным стеклом для микроскопии.

Модельные пленки готовили методом докторблейдинга \(500\, {\upmu}\hbox {L}\) \(10{\%}\) pHema в растворе 95/5 EtOH/h3O, смешанном с растворенными красителями. в ТГФ на ПЭТ-пленку. Это привело к ок. \(1,5\,{\upmu}\hbox {м}\) толстая пленка. Для обеспечения щелочных условий к раствору добавляли объем \(12\,{\upmu}\hbox {L}\) триэтиламина. Фольгу ПЭТ перед ракельной обработкой очищали ацетоном.\circ \hbox {C}\) для \(3\,\hbox {h}\) для формирования контакта. Концентрации и применяемые методы измерения для образцов можно увидеть в таблице 1.

Таблица 1 Концентрации и параметры для измерений FRET

FRET из спектрофотометрии

Спектры флуоресценции регистрировали на спектрофлуорофотометре RF-5301PC от Shimadzu. Эксперименты FRET проводились с концентрациями молекул, показанными в таблице 1. Также были приняты меры, чтобы свести к минимуму экспозицию любого из образцов окружающему свету, чтобы избежать фотообесцвечивания.Модельные пленки были, с одной стороны, исследованы с использованием этой флуорометрической установки, а с другой стороны, они были исследованы с помощью широкопольного микроскопа с наборами фильтров, показанными в таблице 2. Спектры пленок pHema были записаны с использованием установки, показанной на рис. 3. Образцы исследовались под углом, который позволяет избежать обнаружения прямого отраженного света и измеряет только флуоресценцию, исходящую от образца.

Рис. 3

Установка для измерения пленок pHema во флуорометрии.В и настройка описана более подробно. Он был выбран таким образом, чтобы отраженный (REFL) пучок, следующий за возбуждением (EX) образца, не попадал на детектор и детектировался только сигнал флуоресценции, испускаемый (EM) непосредственно от образца. a – c Образцы доноров, акцепторов и доноров-акцепторов по мере их исследования

Эффективность переноса энергии FRET рассчитывается на основе измеренных спектров и поясняется на рис.4. За счет переноса энергии излучение донора гасится (\(\text {I}_{DA}\)) по отношению к нормальному излучению донора (\(\text {I}_{D}\) ). Энергия, не излучаемая донором, затем передается акцептору и увеличивает (или делает чувствительным) излучение (\(\text {I}_{AD}\)) по сравнению с нормальной чувствительностью акцептора (\(\text {I} _{А}\)). Спектральное перекрытие, показанное на рис. 4, является необходимым требованием для FRET и в значительной степени определяет диапазон расстояний эффекта, как видно из уравнения.{1/6}$$

(2)

\(\text {R}_0\) — радиус Ферстера, k — фактор ориентации, n — показатель преломления, (\(\text {Q}_{D}\)) квантовый выход донора и J интеграл перекрытия. Радиус Фёрстера определяет расстояние передачи энергии, поскольку известно, что количественная оценка FRET возможна только в пределах расстояний в диапазоне от \((\frac{1}{2} — 2) \text {R}_0\), как также показано на рис. 2. Подробное описание того, как определить радиус Фёрстера, можно найти в книге FRET — Резонансная передача энергии Фёрстера Мединца и Хильдебрандта (Меер, 2013).

Рис. 4

Спектры возбуждения и испускания типичной пары донор-акцептор. FRET влияет на интенсивность эмиссии донора (тушение донора) и интенсивность эмиссии акцептора (сенсибилизация акцептора). Также показано спектральное перекрытие спектра излучения донора и спектра возбуждения акцептора.

Спектры флуоресцентного излучения DCCH и FTSC в определенной степени перекрываются, как показано на рис. 7. Поэтому для точного измерения эффективности FRET спектры должны быть спектрально несмешанными.Для этого в спектрометре мы аппроксимировали пики излучения и использовали площадь под пиками в качестве интенсивности аппроксимированного сигнала. Практически это было сделано путем подгонки гауссовых пиков к зарегистрированным спектрам излучения чистого образца донора (получил \(\text {I}_{D}\)), чистого образца акцептора (получил \(\text {I} _{A}\)) и представляющий интерес образец (полученный в результате \(\text {I}_{DA}\) и \(\text {I}_{AD}\)) как на рис. 11. Полные параметры установки можно найти в дополнительной информации (рисунок S3 и таблица S2).Полученная информация об интенсивности использовалась с уравнениями. 3 и 4, чтобы получить эффективность FRET. Для тушения донора (уравнение 3) и акцепторной сенсибилизации (уравнение 4) использовались следующие уравнения.

$$\begin{aligned} \eta _{FRET}= 1 — \frac{I_{DA}}{I_D} \end{aligned}$$

(3)

$$\begin{aligned} \eta _{FRET}= \left( \frac{I_{AD}}{I_A} — 1\right) \frac{\epsilon _A}{\epsilon _D} \end{ выровнено}$$

(4)

\(\epsilon _{A}\) и \(\epsilon _{D}\) — коэффициенты экстинкции акцептора и донора на длине волны возбуждения (Meer 2013; Clegg 1992, 1995).Соотношение \(\frac{\epsilon _{A}}{\epsilon _{D}}\) было определено равным 0,02, и его можно найти в дополнительной информации (таблица S1). Сенсибилизация акцептора и эмиссия донора показаны на рис. 4.

FRET по данным оптической микроскопии

Бумажные волокна исследовали с помощью установки широкопольной микроскопии (WM), оснащенной наборами фильтров, показанными в таблице 2. WM работал с Галогенная лампа мощностью 50 Вт и КМОП-детектор компании QI Imaging (Optimos).

Таблица 2 Наборы фильтров, используемые для флуоресцентной микроскопии

Интенсивность лампы и чувствительность детектора зависят от длины волны и были скорректированы путем расчета поправочных коэффициентов из спектра излучения лампы, сложенного с фильтрами возбуждения, и коэффициента экстинкции и чувствительность детектора, сложенная с эмиссионными фильтрами и эмиссионными спектрами.Эти поправочные коэффициенты применялись к записанным изображениям, чтобы получить истинное представление об измеренной интенсивности.

Схематическое изображение окрашенных волокон и пленок pHema можно увидеть на рис. 5. Изображения окрашены в искусственные цвета, чтобы подчеркнуть различия между волокнами и пленками. Образцы исследовались при увеличении в \(400\крат) для волокон и при увеличении в \(50\крат) для пленок. Для минимизации фонового шума микроскоп помещали в коробку, обтянутую черной тканью.

Рис. 5

Изображения в искусственных цветах a a волокнистой связи и b a пересечения pHema, измеренные в широкопольном флуоресцентном микроскопе. В b также показаны типичные области интереса для алгоритмов Xia. Области выбираются так, чтобы свести к минимуму рассеянный свет от другого волокна/пленки

При использовании микроскопа спектр заменяется пространственной информацией, и теряется преимущество применения этого простого метода подгонки, описанного выше.Здесь сложный алгоритм, который приводит к полностью скорректированному показателю эффективности FRET, был разработан Gordon et al. (1998). В методе используются изображения, записанные с тремя разными наборами фильтров из Таблицы 2 для трех разных образцов. Обычно это приводит к девяти изображениям, но с расположением, показанным на рис. 5, можно получить ту же информацию только из трех изображений, поскольку в каждом изображении автоматически есть чистый донор, чистый акцептор и область FRET. включены.Подробное описание алгоритма см. в оригинальной статье (Гордон и др., 1998). Вкратце, этот метод вычисляет интенсивность FRET, скорректированную для всех возможных сценариев спектрального просачивания, в соответствии со следующими уравнениями.

$$\begin{align} {\overline{Afa}}= \frac{Af — \left(\frac{Ad}{Fd}\right) Ff}{1 — \left( \frac{Fa}{ Aa}\right) \left( \frac{Ad}{Fd}\right) } \end{aligned}$$

(5)

$$\begin{aligned} FRET1= \frac{\left( Ff — \left( \frac{Fd}{Dd}\right) Df — {\overline{Afa}}\left[ \left( \frac {Fa}{Aa}\right) — \left( \frac{Fd}{Dd}\right) \left( \frac{Da}{Aa}\right) \right] \right) }{G \left[ 1 — \left( \frac{Da}{Fa}\right) \left( \frac{Fd}{Dd}\right) \right] } \end{aligned}$$

(6)

$$\begin{align} {\overline{Dfd}}= Df + FRET1 \left[ 1 — G\left(\frac{Da}{Aa}\right) \right] — {\overline{Afa} }\left( \frac{Da}{Aa}\right) \end{aligned}$$

(7)

$$\begin{align} FRETN= \frac{FRET1}{{\overline{Afa}} * {\overline{Dfd}}} \end{align}$$

(8)

Уравнения состоят из переменных с двумя буквами.Первая буква обозначает использованный набор фильтров, как показано в Таблице 2, вторая буква обозначает исследуемый образец (d = только донор, a = только акцептор, f = FRET-площадь). Например. Таким образом, Af обозначает область FRET (связанную область), исследованную с помощью набора акцепторных фильтров. Переменные представляют собой измеренные интенсивности света из вышеупомянутых изображений микроскопа, записанных как 16-битные значения серого. \({\overline{Afa}}\) относится к акцепторному сигналу, который был бы, если бы не было донора и, следовательно, не произошло FRET.Точно так же \ ({\ overline {Dfd}} \) относится к сигналу донора, который был бы, если бы не присутствовал акцептор и, следовательно, не произошло FRET. Интересующие области были выбраны на изображениях, как показано на рис. 5b. Оценка производилась попиксельно. G — это коэффициент, связывающий потерю сигнала донора с увеличением сигнала акцептора (см. Таблицу дополнительной информации S3). В этой работе мы использовали несколько иной алгоритм Xia et al. который отличается только нормализацией значения \(\text {N}_{\text {FRET}}\), но в остальном эквивалентен алгоритму Гордона (Xia and Liu 2001).

$$\begin{align} N_{FRET} = \frac{FRET1}{\sqrt{{\overline{Afa}}*{\overline{Dfd}}}} [-] \end{align}$$

(9)

Рис. 6

Демонстрация FRET-анализа соединения волокон и и пересечения волокон b . В и можно увидеть две типичные проблемы с анализом. Сначала часто обнаруживался высокий сигнал FRET на краях как склеиваемой области, так и волокон. Во-вторых, сильный ложноположительный сигнал FRET можно увидеть в области, в которой явно невозможно проявить FRET.На микроскопическом изображении можно увидеть метод эрозии, использованный для анализа.

Для возможности воспроизвести область молекулярного контакта был разработан метод, позволяющий всегда выбирать подходящую область. Метод заключался в ручном рисовании ROI (области интереса), захватывая «оптически связанную» область на рис. 6. Затем мы применили эрозию изображения, чтобы избежать краев, и, таким образом, получили размытую ROI (рис. 6, нижние изображения), которая затем использовали для оценки интенсивности FRET. Было необходимо избегать краев, потому что области чрезвычайной интенсивности, по-видимому, дают ложноположительный сигнал FRET.Кроме того, ложные срабатывания также были обнаружены в областях, в которых невозможно показать FRET, например в области, показанной на рис. 6a, которая не находится в связанной области.

Другие эксперименты FRET

Здесь следует упомянуть, что использовались и другие эксперименты FRET. Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп (CLSM, Leica TCS SPE) с фотоумножителем от Hamamatsu был использован для исследования фотообесцвечивания акцептора и сенсибилизированного излучения акцептора в связях волокно-волокно. Идея заключалась в том, что благодаря превосходной настройке будет достигнуто лучшее соотношение сигнал/шум.

TCSPC, FRET, TRES, SSTD и др.

Каковы применения TRES (спектров излучения с временным разрешением)?

Рис. 45: TRES 2-нафтола и 2-нафтолата A: Спектры стационарного состояния 2-нафтола в буфере PBS, pH 7,4. B: флуоресценция затухает на разных длинах волн по всему спектру излучения. C. Биэкспоненциальные скорости затухания на разных длинах волн по всему спектру, наложенные на установившийся спектр излучения. D. Временные срезы: спектр излучения в разные моменты времени во время затухания флуоресценции 2-нафтола

Измерение спектра излучения с временным разрешением представляет собой метод, который измеряет затухание флуоресценции на возрастающих длинах волн по всему спектру излучения образца.Получается трехмерный график зависимости интенсивности от времени от длины волны. Глядя на этот набор трехмерных данных в направлении спектров в разное время, а не затухания на разных длинах волн, можно измерить спектр излучения с временным разрешением. Если образец содержит несколько излучателей с перекрывающимися спектрами, но с разным временем жизни, отдельные спектры этих компонентов можно разделить с помощью TRES.

Например, 2-нафтол ионизируется с образованием 2-нафтолата в возбужденном состоянии. (Коти, 2001).Спектр излучения в стационарном состоянии показывает два пика, что указывает на присутствие обоих видов. Измерение времени жизни на инкрементальных длинах волн по всему спектру излучения показывает очень разные скорости затухания на каждом пике излучения. Подбирая затухания, можно увидеть, как изменяются времена жизни и/или амплитуды компонентов на разных длинах волн излучения.

Для 2-нафтола пик эмиссии 2-нафтола при 354 нм имеет другое время жизни, чем у 2-нафтолата, пик эмиссии которого составляет около 414 нм.Модель с двумя состояниями ионизированного и неионизированного 2-нафтола четко показана в TRES. Две постоянные времени представляют различные времена затухания для 2-нафтола (3,4 нс доминирует при 357 нм) и 2-нафтолата (9,4 нс доминирует при 414 нм). Показанные ниже данные были измерены на FluoroMax-4 с электроникой FluoroHub TCSPC и источником возбуждения NanoLED-280, работающим на частоте 1 МГц.

Другим применением TRES является измерение констант времени переориентации растворителя. (Хорнг, 1995). Глядя на один флуорофор и на то, как спектр излучения смещается во времени, можно построить график пиковой энергии в зависимости от времени и подобрать постоянную времени.Сдвиг спектра в этом случае может быть связан с переориентацией молекул растворителя своих дипольных моментов в ответ на дипольный момент возбужденного состояния флуорофора. Подбирая пиковую энергию спектра излучения с течением времени, можно получить постоянную (ы) времени переориентации молекул растворителя. (Хорнг, 1995).

Механика магнитотактического остова in vivo, выявленная с помощью корреляционной микроскопии FLIM-FRET и STED

Ngounou Wetie, A. G. et al .Исследование стабильных и преходящих белок-белковых взаимодействий: прошлое, настоящее и будущее. Протеомика 13 , 538–57 (2013).

КАС Статья Google ученый

Глотцер, М. и Хайман, А. А. Полярность клеток: важность полярности. Курс. биол. 5 , 1102–1105 (1995).

КАС Статья Google ученый

Купер Г.М. In The Cell: A Molecular Approach 253–255 (Sinauer Associates, 2000).

Грауманн, П. Л. Динамика элементов бактериального цитоскелета. В Cell Motility and the Cytoskeleton 909–914 (Wiley-Blackwell, 2009).

Лихтман, Дж. В. и Кончелло, Дж.-А. Флуоресцентная микроскопия. Нац. Методы 2 , 910–919 (2005).

КАС Статья Google ученый

Турковид Б., Виран Д. и Эндесфельдер У. От отдельных молекул к жизни: микроскопия в наномасштабе. Анал. Биоанал. хим. 408 , 6885–6911 (2016).

КАС Статья Google ученый

Сахл, С.Дж., Хелл, С.В. и Якобс, С. Флуоресцентная наноскопия в клеточной биологии. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 18 , 685–701 (2017).

КАС Статья Google ученый

Тортароло, Г., Кастелло, М., Диаспро, А., Кохо, С. и Висидомини, Г. Оценка разрешения изображения в микроскопии истощения с вынужденным излучением. Оптика 5 , 32 (2018).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Vicidomini, G., Bianchini, P. & Diaspro, A. Микроскопия со сверхвысоким разрешением STED. Нац. Методы 15 , 173–182 (2018).

КАС Статья Google ученый

Годин А.Г., Лоунис, Б. и Когнет, Л. Подходы микроскопии сверхвысокого разрешения для визуализации живых клеток. Биофиз. J. 107 , 1777–1784 (2014).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Хуанг, Б., Бэбкок, Х. и Чжуан, X. Преодоление дифракционного барьера: визуализация клеток со сверхвысоким разрешением. Cell 143 , 1047–1058 (2010).

КАС Статья Google ученый

Селвин, П.Р. Ренессанс резонансной передачи энергии флуоресценции. Нац. Структура биол. 7 , 730–734 (2000).

КАС Статья Google ученый

Сан, Ю., Дэй, Р. Н. и Периасами, А. Исследование белок-белковых взаимодействий в живых клетках с использованием микроскопии флуоресцентной визуализации. Нац. протокол 6 , 1324–1340 (2011).

КАС Статья Google ученый

Тардиф, К. и др. . Наноскопия с изображением времени жизни флуоресценции для измерения переноса энергии резонанса Фёрстера в клеточных нанодоменах. Нейрофотоника 6 , 1 (2019).

Артикул Google ученый

Дэн, С. и др. . Влияние времени жизни флуоресценции донора и акцептора на метод применения резонансного переноса энергии Фёрстера в STED-микроскопии. J. Microsc. 269 , 59–65 (2018).

КАС Статья Google ученый

Лойдолт-Крюгер, М. и Мария STED Микроскопия пар FRET (2018).

Дженнингс, П. К., Кокс, Г. К., Монахан, Л. Г. и Гарри, Э. Дж. Визуализация бактериального цитокинетического белка FtsZ со сверхвысоким разрешением. Микрон 42 , 336–341 (2011).

КАС Статья Google ученый

Виллемсе, Дж., Borst, JW, de Waal, E., Bisseling, T. & van Wezel, G.P. Положительный контроль клеточного деления: FtsZ рекрутируется SsgB во время спорообразования Streptomyces. Гены Дев. 25 , 89–99 (2011).

КАС Статья Google ученый

Ван, Н., Батлер, Дж. и Ингбер, Д. Механотрансдукция через клеточную поверхность и через цитоскелет. Наука 260 (1993).

Керниг, А. и др. . Исследование механических свойств цепочек магнитосом у живых магнитотактических бактерий. Нано Летт. 14 , 4653–4659 (2014).

ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google ученый

Уэбе Р. и Шулер Д. Биогенез магнитосом у магнитотактических бактерий. Нац. Преподобный Микробиолог. 14 , 621–637 (2016).

КАС Статья Google ученый

Фавр, Д.и Годек, Т. У. От бактерий к моллюскам: принципы, лежащие в основе биоминерализации материалов из оксида железа. Анжю. хим. Междунар. Эд англ. 54 , 4728–4747 (2015).

КАС Статья Google ученый

Faivre, D. Формирование цепочек магнитных наночастиц в бактериальных системах. МИССИС Бык. 40 , 509–515 (2015).

КАС Статья Google ученый

Комейли А., Li, Z., Newman, D.K. & Jensen, GJ. Магнитосомы представляют собой образы клеточной мембраны, организованные актиноподобным белком MamK. Наука 311 , 242–245 (2006).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Шеффель, А. и др. . Кислый белок выравнивает магнитосомы вдоль нитевидной структуры у магнитотактических бактерий. Природа 440 , 110–114 (2006).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Феррер, Дж.М. и др. . Измерение силы молекулярного разрыва между одиночными актиновыми филаментами и актин-связывающими белками. Проц. Натл. акад. науч. 105 , 9221–9226 (2008 г.).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Scheffel, A. & Schüler, D. Кислотный повторяющийся домен белка MamJ magnospirillum gryphiswaldense проявляет гипервариабельность, но не требуется для сборки цепи магнитосомы. J. Бактериол. 189 , 6437–6446 (2007).

КАС Статья Google ученый

Карилло, М. А., Беннет, М. и Фавр, Д. Взаимодействие белков, связанных со сборкой магнитосом в магнитотактических бактериях, выявленное с помощью двухгибридного двухфотонного возбуждения. J. Phys. хим. B 117 , 14642–14648 (2013).

КАС Статья Google ученый

Беннет М. и др. . Биологически контролируемый синтез и сборка наночастиц магнетита. Фарадей Обсудить. 181 , 71–83 (2015).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Katzmann, E., Scheffel, A., Gruska, M., Plitzko, J.M. & Schüler, D. Потеря актиноподобного белка MamK оказывает плейотропное воздействие на формирование магнитосом и сборку цепи у Magnetospirillum gryphiswaldense. Мол. микробиол. 77 , 208–224 (2010).

КАС Статья Google ученый

Торо-Науэльпан, М. и др. . Сегрегация органелл прокариотических магнитосом управляется бегущей дорожкой динамического актиноподобного филамента MamK. БМС Биол. 14 , 88 (2016).

Артикул Google ученый

Морозова К.С. и др. . Дальнекрасный флуоресцентный белок, возбуждаемый красными лазерами, для проточной цитометрии и STED-наноскопии сверхразрешения. Биофиз. J. 99 , L13–5 (2010).

КАС Статья Google ученый

An, SJ & Almers, W. Отслеживание образования комплекса SNARE в живых эндокринных клетках. Наука 306 , 1042–1046 (2004).

ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

Блом, Х.и Виденгрен, Дж. Микроскопия истощения со стимулированной эмиссией. Chemical Reviews 117 , 7377–7427 (2017).

КАС Статья Google ученый

Фогт, Н. Биофизика: раскрытие магнитогенетики. Нац. Методы 13 , 900–901 (2016).

КАС Статья Google ученый

Мейстер М. Физические пределы магнитогенетики. Элиф 5 , e17210 (2016).

Артикул Google ученый

Нэгерл, У. В., Виллиг, К. И., Хейн, Б., Хелл, С. В. и Бонхёффер, Т. Визуализация дендритных шипов живыми клетками с помощью STED-микроскопии. Проц. Натл. акад. науч. США 105 , 18982–7 (2008 г.).

ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google ученый

Хейен, У. и Шулер, Д.Рост и образование магнитосом микроаэрофильными штаммами Magnetospirillum в ферментере с контролируемым кислородом. Заяв. микробиол. Биотехнолог. 61 , 536–44 (2003).

КАС Статья Google ученый

Schüler, D., Uhl, R. & Bäuerlein, E. Простой метод светорассеяния для анализа магнетизма Magnetospirillum gryphiswaldense. FEMS микробиол. лат. 132 , 139–145 (1995).

Артикул Google ученый

Hildebrandt, N. In FRET — Förster Resonance Energy Transfer 105–163 (Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2013).

Беннет, М., Гур, Д., Юн, Дж., Парк, Ю. и Фавр, Д. Дистанционно настраиваемое фотонное устройство на основе бактерий. Доп. Опц. Матер. 5 , 1600617 (2016).

Артикул Google ученый

Шагин Д.А. и др. . GFP-подобные белки как вездесущее надсемейство Metazoan: эволюция функциональных особенностей и структурной сложности. Мол. биол. Эвол. 21 , 841–850 (2004).

КАС Статья Google ученый

Klauss, A., Conrad, F. & Hille, C. Бинарные фазовые маски для простого выравнивания системы и определения базовой аберрации с помощью пространственных модуляторов света в STED-микроскопии. Науч. Респ. 7 , 15699 (2017).

ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google ученый

Висидомини, Г. и др. . Более четкая маломощная наноскопия STED с временным стробированием. Нац. Методы 8 , 571–575 (2011).

КАС Статья Google ученый

Сейдж, Д. и др. . DeconvolutionLab2: программное обеспечение с открытым исходным кодом для деконволюционной микроскопии. Методы 115 , 28–41 (2016).

Артикул Google ученый

Дополнительные приложения для микроскопии – обзор FRET-Oxford Instruments

FRET (иногда называемый Förster Resonance Energy Transfer ) позволяет определить близость двух флуорофоров. FRET является одним из ряда методов одиночных молекул, таких как TIRF, SIM и локализация сверхвысокого разрешения, которые приобрели популярность в последние годы.Резонансная передача энергии происходит только на очень короткие расстояния, обычно в пределах 10 нм, и включает прямую передачу энергии возбужденного состояния от донорного флуорофора к акцепторному флуорофору в качестве альтернативы затуханию флуоресценции от донора. При переносе энергии молекула акцептора переходит в возбужденное состояние, из которого происходит эмиссионный распад (всегда с большей длиной волны, чем у акцепторного излучения). Возбуждая донора, а затем контролируя относительное излучение донора и акцептора последовательно или одновременно, можно определить, когда произошел FRET и с какой эффективностью.

Флуорофоры

можно использовать для специфической маркировки представляющих интерес биомолекул, а условие расстояния для FRET имеет порядок диаметра большинства биомолекул (1–10 нм). Это означает, что FRET можно использовать для определения того, когда и где две или более из этих меченых биомолекул (обычно белков) взаимодействуют в своем физиологическом окружении. Сигнал FRET, соответствующий определенному месту на изображении под микроскопом, обеспечивает дополнительную точность определения расстояния, превышающую оптическое разрешение (~0,25 мм) светового микроскопа. Помимо пространственной близости, для эффективного FRET пара красителей FRET также должна демонстрировать значительное перекрытие спектра возбуждения донора со спектром поглощения акцептора. Именно эта характеристика составляет один из экспериментальных парадоксов FRET:

.

• Спектральные профили пары FRET не могут быть разделены настолько, чтобы иметь плохое перекрытие,
• , однако желательно избежать «перекрестных помех» между двумя каналами формирования изображения, т.е.е. в идеале комплект эмиссионных фильтров донора должен собирать только свет от донора и не улавливать свет от акцептора, и наоборот.

На практике этого можно достичь с помощью фильтров с короткой полосой пропускания, которые собирают свет только с более коротковолновой стороны донорного излучения и более длинноволновой стороны акцепторного излучения. Это может несколько ограничить поток фотонов как от донора, так и от акцептора во время типичного облучения, особенно если учесть, что эти измерения лучше всего проводить в условиях пониженной мощности возбуждения, чтобы мы не ускоряли скорость обесцвечивания.Это означает, что для FRET-экспериментов требуются сверхчувствительные детекторы .
Примеры пар красителей FRET включают:

• БФП-ГФП
• CFP-dsRED
• БФП-ГФП
• Cy3-Cy5
• CFP-YFP
• Alexa488-Alexa555
• Alexa488-Cy3
• Alexa594-Alexa647
• ФИТЦ-ТРИТЦ
• Тербий (III)-флуоресцеин
• DiSBAC4(3)-CC2-DMPE (пара FRET, чувствительная к напряжению)

Профиль для пары красителей CFP-YFP FRET показан ниже:

Спектральные профили поглощения и излучения пары CFP-YFP FRET.

Камеры iXon EMCCD компании Andor, являющиеся ключевым компонентом платформы конфокальной визуализации живых клеток Dragonfly или в составе другой конфокальной системы, являются хорошо зарекомендовавшими себя детекторными решениями для визуализации FRET. EMCCD обеспечивает определение с высоким разрешением и высоким отношением сигнал-шум (S/N) FRET-взаимодействий по всей отображаемой области или объему клетки и помогает учитывать низкие уровни фотонов, присутствующие при использовании узкополосных фильтров. В сочетании с тщательным выбором наборов фильтров это обеспечивает высокую целостность данных FRET.Поскольку EMCCD преодолевают предел обнаружения минимального уровня шума при любой скорости считывания, молекулярные взаимодействия можно динамически отслеживать с высокой точностью. Кроме того, мощность возбуждения часто может быть снижена, а это означает, что фототоксические эффекты и эффекты фотообесцвечивания сведены к минимуму, так что молекулярные взаимодействия можно отслеживать в течение гораздо более длительных периодов времени. Для получения дополнительной информации о выборе детектора для исследований одиночных молекул, пожалуйста, ознакомьтесь со статьей Какой детектор лучше всего подходит для исследований одиночных молекул?

1.О Х-К и др. (2019) Быстрое и простое обнаружение охратоксина А с использованием переноса энергии флуоресцентного резонанса в иммуноанализе с латеральным потоком (FRET-LFI)Toxins 11(5), 292; https://doi.org/10.3390/toxins11050292
2. Hu J. et al (2018) Объединение антенн из золотых наночастиц с резонансной передачей энергии флуоресценции одной молекулы (smFRET) для изучения динамики шпилек ДНК Nanoscale, 10, 6611-6619 10,1039 /C7NR08397A
3. Чаурасия К.Р., Даме Р.Т. (2018) Одномолекулярный FRET-анализ ДНК-связывающих белков.В: Peterman E. (eds) Single Molecule Analysis. Methods in Molecular Biology, vol 1665. Humana Press, New York, NY
4. Юнг С. и др. (2018), Мониторинг состояния связывания/диссоциации и окислительно-восстановительного состояния отдельных ионов переходных металлов в режиме реального времени.