Лада 21013: Lada 21013 1.2 🚗 – технические характеристики автомобиля, расход топлива, мощность двигателя, трансмиссия – Autodmir.ru (Автомобили и Цены)

Lada Priora 1.6 90 л.с. 8 клапанов, 1.6 98, 106 л.с. 16 клапанов реальные отзывы о расходе топлива: бензина

Lada Priora – российский автомобиль С-класса, выпускается с 2007 года. Модель пришла на замену седану ВАЗ-2110 1994 года. «Приора» является его глубокой модернизацией. Значительно усилены кузов, а в салоне появились кардинальные изменения. Машина более удобной в плане управляемости. Габариты Lada Priora по сравнению с ВАЗ-2110 не изменились, и по ширине в машине по-прежнему тесно. Но не смотря на многие недостатки, от которых избавиться не удалось, «Приора» производит впечатление добротного автомобиля. До выхода Lada Vesta «Приора» считалась флагманской моделью «АвтоВАЗа». На сегодняшний день выпускается в кузове седан.

Навигация

• 1 Lada Priora двигатели. Официальная норма расхода топлива на 100 км.
  • 1.1 Поколение 1 (2007-2014)
  • 1.2 Рестайлинг поколения 1 (2014 – н. в.)
• 2 Lada Priora отзывы владельцев
  • 2. 1 С двигателем 1.6 90 л. с. 8 клапанов
  • 2.2 С двигателем 1.6 98 л. с 16 клапанов
  • 2.3 С двигателем 1.6 106 л. с. 16 клапанов

Lada Priora двигатели. Официальная норма расхода топлива на 100 км.

Поколение 1 (2007-2014)

Бензиновые:

• 1,6 98 л. с., механика, 11,5 сек до 100 км/час, 9,8/5,6 л на 100 км

Рестайлинг поколения 1 (2014 – н. в.)

Бензиновые:

• 1,6, 87 л. с., механика, 12,5 сек до 100 км/час
• 1,6, 106 л. с., механика, 11,5 сек до 100 км/час, 8,9/5,6 л на 100 км

Lada Priora отзывы владельцев

С двигателем 1.6 90 л. с. 8 клапанов

• Юрий, Московская область. Машина на все случаи жизни, покупал в 2009 году. Тачка с мотором 1.6, мощности 90 л. с. хватает на ура. Смысла переплачивать за более мощный мотор – не вижу, т к мне помимо динамике нужна еще экономия. Средний расход 8-10 литров.
• Александр, Николаев. Машина 2008 года выпуска, с 1,6-литровым мотором. Это моя первая тачка. Покупал в кузове седан, с механической коробкой, кондиционером и АБС. По сравнению с моей прошлой десяткой изменения существенные, во-первых это салон и шумоизоляция. В машине реально стало комфортнее. В целом, Приора воспринимается более современной. Хотя пространство в салоне не изменилось. Такой же узкий салон, также отмечу практически неизменный кузов. Огромный респект за корму, которая выглядит просто офигенски по сравнению с толстозадой десяткой. 90-сильный мотор потребляет 8-10 литров, максимальная скорость под 180 км/час.
• Дмитрий, Иркутск. Автомобилем доволен, тачка на каждый день. Использую в семье, на даче и для прочих хозяйственных нужд. Машина нравится, простая и неприхотливая в обслуживании тачка. Меня вполне устраивает. Расход бензина на уровне 9-10 литров с 1.6-литровым 90-сильным мотором.
• Олег, Нижний Новгород. Лада Приора куплена в 2015 году, версия после рестайлинга. Особенно преобразился салон. Есть сенсорный мультимедиа-дисплей, да и в целом передняя панель выглядит на уровне европейских конкурентов, даже круче чем у Рено Логана. У меня 1.6-литровая 90-сильная версия с расходом 9-10 литров.
• Александр, Саратов. У меня 90-сильная Лада Приора, по мощности и динамике устраивает. Комфортный и веселый авто на каждый день, способен экономить топливо, хотя поддерживает бензин не ниже АИ-95. Средний расход 8-10 литров на сотню.
• Михаил, Рязань. У меня Лада Приора с 8-клапанным двигателем, его мощности 90 л. с. хватает с запасом, в городе можно уложиться в 9-10 литров на 100 км. Также отмечу хорошую разгонную динамику. Первая сотня за 12-13 секунд, что весьма неплохо для бюджетного авто. Главное, быстро переключать передачи и держать газ в пол. У Приоры хороший ездовой потенциал, ведь у нее прекрасная родословная – моя бывшая десятка всех обваливала на светофорах. Приора – довольно надежная машина, ну по крайней мере за 80 тысяч пробега посреди дороги никогда не вставала.
• Владислав, Екатеринославль. Машиной доволен, тачка стоит своих денег. Покупал в 2010 году, 90-сильную версию. Мягкая и непробиваемая подвеска, как раз для наших дорог.
  Расход по городу на уровне 10 литров.

С двигателем 1.6 98 л. с 16 клапанов

• Максим, Нижегородская область, 1.6 98 л. с. Машина нравится, покупал Приору в 2007 году на вторичке. Тачкой доволен, это достойный вариант для тех, кому не нужны понты. Машина мощная, с 98-сильным двигателем. Разгон до сотни за 11 секунд, на уровне конкурентов. В целом, отличная динамика за небольшие деньги. Как говорится зачем платить больше. Заливаю 95-й бензин. В городском цикле можно уложиться в 10 литров на 100 км, на трассе получается 7-8 литров на 100 км.
• Дмитрий, Ярославль, 1.6 98 л. с. Приобрел Приору в 2016 году, машиной доволен. Хорошая тяговитая и в меру экономичная тачка, устраивает на каждый день по городу. Расход 8-10 литров на 100 км в зависимости от стиля езды.
• Денис, Смоленск, 1.6 98 л. с. Ладой Приорой пользуюсь четыре года, версия до рестайлинга. Отмечу просторный салон, удобные и понятные органы управления, в плане эргономики придраться не к чему. Я особо не придираюсь, ведь это все таки не иномарка, а самая доступная машина в России. Проверенная конструкция, все узлы и агрегаты изучены до дыр. Средний расход 10 литров на 100 км.
• Сергей, Ставропольский край. Лучший автомобиль за свои деньги. Машиной доволен, у меня кстати 1.6-литровый 98-сильный вариант. Разгонный потенциал у моей Приоры на уровне более топовых иномарок, я приятно удивлен. Надежная и дешевая в обслуживании машина, для города сойдет. Расход 9-10 литров.
• Дмитрий, Екатеринославль. Машиной доволен, тачка оборудована мотором 1.6 и выдает 100 лошадей, прекрасная машина с самым популярным двигателем в России. Оборудован 100-сильным мотором, потребляет максимум 10-11 литров при быстрой езде.
• Юрий, Вологодская область. Lada Priora меня в целом устраивает, надежный и неприхотливый авто. Расход 10 литров 95-го бензина.
• Светлана, Московская обл. Похвалю Ладу Приору за комфортный и просторный салон, всеядную подвеску и неплохую управляемость на городских скоростях 60-80 км/час.
• Олег, Томск. Лада Приора 2009 года, с мощным 1. 6-литровым двигателем на 16 кл. Механическая коробка на полную раскрывает потенциал 98-сильного мотора. В общем, достойный вариант для тех, кто хочет неплохую динамику за небольшие деньги. Десяточное семейство, насколько мне известно, всегда славилось хорошей курсовой устойчивостью и хорошим разгонным потенциалом, не смотря на относительно скромные характеристики. Хотя по мощности Приора не хуже конкурентов. Я езжу довольно быстро, в городе укладываюсь в 10 литров на 100 км.
• Борис, Иркутск. Взял Приору чисто для города, потребляет в среднем 9-10 литров/100 км. Машина для души, оснащена мощным 98-сильным двигателем. Его хватает как в городе, так и на трассе.
• Алексей, Пермь. Лада Приора – достойный представитель отечественного автопрома, и достойный преемник моей прошлой десятке. Все таки изменения существенные. Я рестайлинговую версию 2015 года, пользуюсь уже третий год. Пробег 98 тысяч км, полет нормальный. Можно без особых усилий разогнаться до 200 км/час.
• Борис, Нижегородская область. Лада Приора – простая и неприхотливая тачка, с хорошей динамикой и тормозами. У меня 98-сильная версия 2015 года. Современное оснащение, динамика и комфорт на уровне. Расход 9-10 литров.
• Александр, Смоленск. Автомобилем доволен, тачка устраивает на все случаи жизни – Приора незаменима в семье и на работе. Потребляет 8-10 литров 95-го бензина на 100 км, мощности достаточно для повседневных нужд.
• Дмитрий, Свердловск. Моя Лада Приора с 1.6-литровым 16-клапанным 98-сильным мотором – прекрасный вариант для городских и загородных и загородных условий. Устраивает по всем параметрам – простой и неброский дизайн, удобные и эргономичные органы управления, но все это ничего не стоит по сравнению с потрясающей динамикой. Хотя шума в салоне предостаточно, особенно на высоких оборотах. Средний расход 9-10 литров на сотню.

С двигателем 1.6 106 л. с. 16 клапанов

• Олег, Архангельск. Машина понравилась, за свои деньги отличный вариант. Пробег 2015 года, обслуживаю самостоятельно в гараже. Автомобиль оснащен 106-сильным ДВС объемом 1.6, у меня самая топовая комплектация. Приора легко набирает 200 км/час, разгон до сотни за 10 секунд. Хорошо управляется и тормозит, отличный вариант для города. Обгоны даются легко, а средний расход бензина составляет 10-11 литров.
• Константин, Нижний Новгород. Машиной доволен, достойный вариант для семейных и хозяйственных нужд. Взял Приору в самой топовой комплектации, с 16-клапанным 1.6-литровым мотором. Мощности 106 лошадей с лихвой хватает, чтобы набирать первую сотню за 10 секунд. Средний расход 10-11 литров.
• Виталий, Белгород. Мой автомобиль оснащен 1.6-литровым 106-сильным мотором, потребляет в среднем 10-11 литров/100 км. По-моему, это лучший агрегат в истории АвтоВАЗа. Оптимальное соотношение объем/мощность, и еще плюс отличный разгонный потенциал. Средний расход 10-11 литров.
• Виктор, Владимирская область. У меня 1.6-литровая Лада Приора, выдает 106 лошадей. Ураганная динамика, разгон до сотни за 9-10 секунд. Похвалю Приору за хорошую динамику и тормоза, управляемость тоже на уровне. Средний расход 9-10 литров 95-го бензина.
• Георгий, Иркутск. Lada Priora – наш автомобиль, народный. Люблю отечественный автопром, об недорогой и долговечный, простой в эксплуатации и обслуживании. Словно конструктор – ставишь новые детали после каждой поломки, и так далее, и так можно до бесконечности. Машина со 106-сильным ДВС потребляет 11 литров.
• Александр, Николаев. Lada Priora стоит потраченных денег. Ни капли не пожалел, что не взял Рено Логан. Приора стоит дешевле, и при этом мощнее и быстрее. А комфорт и надежность ничуть не хуже, по крайней мере Приора гораздо дешевле в обслуживании. Простая конструкция, и в крайнем случае можно обслуживать самостоятельно. Расход бензина с 1.6-литровым мотором составляет 10 литров по городу и 7-8 литров по трассе.
• Евгений, Саратов, 1.6 106 л. с. Начитался отзывов про Приору, оптимальный вариант для городских и загородных условий. Дешево и сердито, но с потрясающей динамикой. Средний расход 10-11 литров/100 км.
• Олег, Вологодская область, 1.6 106 л. с. Достойная машина, Лада Приора меня приятно удивила в плане управляемости и особенно динамики. И при этом экономичная и тихая в салоне, правда только на небольших скоростях. Объективно скажу, что для меня главное – это динамика и недорогое обслуживание. С этим у Приоры полный порядок. Как известно, если купить дорогую иномарку, ее будет жалко. С Приорой такого чувства не возникает. Наваливаешь как хочешь – все равно знаешь, что ремонт относительно дешевый будет. Расход на уровне 10 литров/100 км.
• Константин, 1.6 106 л. с. У меня Приора в самой мощной комплектации, выдает больше 100 лошадей. Лучший вариант с точки зрения соотношения динамики и цены. Советую брать, не пожалеете. 16-клапанник рулит, у меня выходит 10-11 литров на 100 км.

Технические характеристики Лада Приора седан ВАЗ-2170

Таблица технических характеристик Лада Приора седан (ВАЗ-2170)

Модификации автомобиля	2170 1. 6	2170 1.6 16V
Двигатель
Расположение двигателя	Спереди поперечно
Объем двигателя	1596 см3
Количество цилиндров / Клапанов на цилиндр	4 / 2	4 / 4
Система питания	Распределенный впрыск
Мощность (л.с / об. мин)	80 / 5200	98 / 5600
Крутящий момент (Нм / об.мин)	120 / 2700	145 / 4000
Тип топлива	АИ-95
Трансмиссия
Колесная формула / ведущие колеса	4Х2 / передние
Коробка передач	механическая
Число передач	5
Рулевое управление
Тип	Реечного типа
Усилитель	Есть
Тормозная система
Передние тормоза	Дисковые
Задние тормоза	Барабанные
Кузов
Тип кузова / количество дверей	Седан / 4
Кол-во посадочных мест	5
Длина	4210 мм
Ширина	1680 мм
Высота	1435 мм
Колесная база	2492
Колея передних колес, мм	1410
Колея задних колес, мм	1380
Клиренс	160 мм
Объем багажника	360 / 705
Снаряженная масса	1088
Допустимая масса	1578
Эксплуатационные характеристики
Время разгона до 100 км / ч	14 с	11. 5 с
Максимальная скорость	172 км / ч	183 км / ч
Размер шин	R14 (175 / 65) (185 / 65)
Расход топлива городской цикл (л / 100 км)	8.3	8.5
Расход топлива загородный цикл (л / 100 км)	6.6	6.7
Объем бака	43

 

лада приора

Звезды: 

1977 Lada 21013 1.2 (64 лс)

1977 Lada 21013 1.2 (64 лс) | Технические характеристики, расход топлива , Габариты

Главная >> Авто каталог >> Lada >> 2101 >> 1977 21013 >> 1. 2 (64 лс)

Авто каталог Логин Регистрация Добавить автомобиль Car Specs API

Lada  Lada 2101    1977 21013      1.2 (64 лс)

Основные характеристики

Lada 2101 Седан 1977, 1978, 1979, 1980, 1981, 1982, 1983, 1984, 1985, 1986, 1987, 1988

Какой тип кузова, Lada 21013?	Седан, 4 дверей, 5 мест
Какой расход топлива, Lada 21013 1.2 (64 Hp)?	9.2 л/100 км 25.57 US mpg 30.7 UK mpg 10.87 км/л
Насколько быстра машина, 1977 21013 1.2 (64 Hp)?	142 км/ч | 88.23 mph 0-100 км/ч: 20 сек 0-60 mph: 19 сек
Какая мощность двигателя, Lada 2101 Седан 1977 1.2 (64 Hp)?	64 лс, 89 Нм 65.64 lb.-ft.
Какой объем двигателя, Lada 2101 Седан 1977 1. 2 (64 Hp)?	1.2 л 1198 см3 73.11 cu. in.
Сколько цилиндров имеет мотор, 1977 Lada 1.2 (64 Hp)?	4, Рядный
Какой привод у автомобиля, Lada 21013 Седан 1977 1.2 (64 Hp)?	Задний привод. Двигатель внутреннего сгорания. ДВС приводит в движение задние колеса автомобиля.
Какая длина автомобиля, 1977 Lada 2101 Седан?	4043 мм 159.17 in.
Насколько широка машина, 1977 Lada 2101 Седан?	1611 мм 63.43 in.
Сколько весит автомобиль, 1977 Lada 21013 1.2 (64 Hp)?	955 кг 2105.41 lbs.
Какая максимально допустимая масса, 1977 Lada 21013 1.2 (64 Hp)?	1355 кг 2987.26 lbs.
Каков объем багажника, 1977 Lada 2101 Седан?	325 л 11.48 cu. ft.
Сколько передач имеет коробка, Какой тип коробки передач, 1977 Lada 21013 1.2 (64 Hp)?	4, Механическая коробка передач

• Lada
  • Lada 2101
    • 1977 21013
      • 1. 2 (64 лс)

AcuraAlfa RomeoAlpinaAston MartinAudiBentleyBMWBugattiCadillacChevroletChryslerCitroenCupraDaciaDaewooDaihatsuDodgeDSFerrariFiatFordGMCGreat WallHavalHondaHummerHyundaiInfinitiJaguarJeepKiaKoenigseggLadaLamborghiniLanciaLand RoverLexusLotusMaseratiMazdaMcLarenMercedes-BenzMGMiniMitsubishiNIONissanOpelPaganiPeugeotPorscheRAMRenaultRolls-RoyceRoverSaabSeatSkodaSmartSubaruSuzukiTeslaToyotaVauxhallVolkswagenVolvo

Все бренды

Сравнение

Технические характеристики Lada 21013 1.2 (64 лс) 1977, 1978, 1979, 1980, 1981, 1982, 1983, 1984, 1985, 1986, 1987, 1988

Базовая информация
Марка	Lada
Модель	2101
Поколения	21013
Модификация (двигатель)	1.2 (64 лс)
Начало выпуска	1977 г
Оконч. выпуска	1988 г
Архитектура силового агрегата	Двигатель внутреннего сгорания
Тип кузова	Седан
Количество мест	5
Количество дверей	4
Эксплуатационные характеристики
Расход топлива в городе	9.4 л/100 км 25.02 US mpg 30.05 UK mpg 10.64 км/л
Расход топлива на шоссе	6.9 л/100 км 34.09 US mpg 40.94 UK mpg 14.49 км/л
Расход топлива Смешанный цикл	9.2 л/100 км 25.57 US mpg 30.7 UK mpg 10.87 км/л
Топливо	Бензин
Время разгона 0 — 100 км/ч	20 сек
Время разгона 0 — 62 mph	20 сек
Время разгона 0 — 60 mph (Рассчитано Auto-Data.net)	19 сек
Максимальная скорость	142 км/ч 88. 23 mph
Соотношение мощность/вес	14.9 кг/лс, 67 лс/тонна
Соотношение Крутящий момент/вес	10.7 кг/Нм, 93.2 Нм/тонна
Двигатель
Мощность	64 лс @ 5600 об./мин.
Мощность на литр рабочего объема	53.4 лс/л
Крутящий момент	89 Нм @ 3400 об./мин. 65.64 lb.-ft. @ 3400 об./мин.
Расположение двигателя	переднее, продольное
Объем двигателя	1198 см3 73.11 cu. in.
Количество цилиндров	4
Расположение цилиндров	Рядный
Диаметр цилиндра	76 мм 2.99 in.
Ход поршня	66 мм 2.6 in.
Степень сжатия	8.5
Количество клапанов на цилиндр	2
Система питания	Карбюратор
Тип наддува	Безнаддувный двигатель
Газораспределительный механизм	OHC
Объем и вес
Снаряженная масса автомобиля	955 кг 2105. 41 lbs.
Допустимая полная масса	1355 кг 2987.26 lbs.
Максимальная грузоподъемность	400 кг 881.85 lbs.
Объем багажника минимальный	325 л 11.48 cu. ft.
Объем топливного бака	39 л 10.3 US gal | 8.58 UK gal
Габариты
Длина	4043 мм 159.17 in.
Ширина	1611 мм 63.43 in.
Высота	1440 мм 56.69 in.
Колесная база	2424 мм 95.43 in.
Колея передняя	1349 мм 53.11 in.
Колея задняя	1305 мм 51.38 in.
Трансмиссия, тормоза и подвеска
Архитектура привода	ДВС приводит в движение задние колеса автомобиля.
Привод	Задний привод
Количество передач (Механическая коробка передач)	4
Тип передней подвески	Двойной поперечный рычаг
Тип задней подвески	Винтовая пружина
Передние тормоза	Дисковые
Задние тормоза	Барабанные
Тип рулевого управления	Червячный редуктор
Размер шин	155/80 SR13

Поколения и годы выпуска ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули» на Zap-Online.ru

• Легковые автомобили
• ⇒
• ВАЗ (LADA)
• ⇒
• 21013 «Жигули»

Поколения ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули»

— Выбрать тип транспорта — Легковые автомобилиМотоциклы и мопедыГрузовые автоАвтобусыМикроавтобусыСпецтехника

— Выбрать марку — AcuraAlfa RomeoAMGAsiaAston MartinAudiBAWBentleyBMWBrillianceBugattiBuickBYDCadillacChanaCheryChevroletChryslerCitroenDaciaDadiDaewooDaihatsuDerwaysDodgeDoninvestDSEagleFAWFerrariFiatFordFord USAFotonFuqiGeelyGenesisGMCGreat WallGrozHafeiHoldenHondaHummerHyundaiInfinitiIran KhodroIsuzuIvecoJACJaguarJeepJMCJonwayKiaLamborghiniLanciaLand RoverLexusLifanLincolnMaseratiMaybachMazdaMercedes-BenzMercuryMINIMitsubishiNissanOldsmobileOpelPeugeotPlymouthPontiacPorscheProtonRenaultRolls-RoyceRoverSaabSamsungSaturnScionSEATSkoda SMASmartSoueastSSangYongSubaruSuzukiTataTatraTeslaTianmaToyotaVolkswagenVolvoWartburgZXБогдан ВАЗ (LADA)ВИС (ВАЗинтерСервис)ГАЗЗАЗИЖЛуАЗММЗМосквичСеАЗТагАЗУАЗ

— Выбрать модель — 1111 ОКА11113 OKA2101 «Жигули»21011 «Жигули»21013 «Жигули»2102 «Жигули»2103 «Жигули»210421041210432104421045210521051210532105721062106121063210721072210732108 «Спутник»21083210921093210992110211032110421112111321114211152112211321142115 Самара2120 Надежда21232170 Priora2171 Priora21713 Priora2172 PrioraGrantaLargusVestaXRAYКалина 1117Калина 1118Калина 1119Калина IIКалина SportНива 2121Нива 21213Нива 2131Нива 2328Нива 2329Шевроле-Нива

— Выбрать поколение —

Годы выпуска

1977 – 1990

1 поколение

1977 – 1988

1977 – 1988

1/1

Найти запчасти для ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули»

Выберите группу запчастей — Выбрать — АвтомузыкаВспомогательные системыГазобаллонное оборудованиеДвигательИнтерьерКарданная передачаКондиционерКоробка передачКузовМаслаМостПодвескаПриборы и датчикиПривод колесаРеменный приводРулевое управлениеСистема выпускаСистема зажиганияСистема охлаждения и отопленияСистема очистки стеколСистема питанияСистемы безопасностиСтекла и зеркалаСцеплениеТормозная системаТюнингФары / ОсвещениеФильтрыШины и дискиЭкстерьерЭлектрика

Введите название запчасти

Выберите поколения

1977 – 1988

1977 – 1988

1/1

Посмотрите какие запчасти на ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули» искали и нашли на Zap-online.

ru

Щит моторного отсека ваз 21013 на ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули» 1983 года выпуска

Автомагазины с запчастями на ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули»

Все автомагазины ВАЗ (LADA) 21013 «Жигули»

ИП Бычихин

89615914420

Россия, Краснодарский край, Новороссийск, Новороссийск, Цемдолина, Ленина 86-1

ТУРБООСТ

+79152424398

Россия, Москва и Московская обл., Москва, Шоссе Интузиастов, Гаражная-4

ООО «Тартуга-драйв»

8(029)626-66-22, 8(029)626-66-22

Беларусь, Минская обл. , Минск, 223021, Минская обл., Минский р-н., Щомыслицкий с/с, д.Озерцо ул. Менковский тракт, д.5, пом.6

NEWParts

0973291550

Украина, Киевская обл., Киев, Освободителей 5

Мастер-Авто

+79032013417

Россия, Москва и Московская обл., Истра, Советская 46

S Auto

89086540540

Россия, Иркутская обл., Иркутск, проспект Жукова, 13/3

ООО «ТН-АЗС-Запад»

89152978293

Россия, Москва и Московская обл. , Москва, Москва, Рябиновая, 12

ЯПОНИЯ-ЕВРОПА

8-961-711-77-55

Россия, Кемеровская обл., Кемерово, КОММУНЫ 18

КОММЕР-АВТО

8(861)9918186, 8(861)9918186

Россия, Краснодарский край, Краснодар, ЕЙСКОЕ ШОССЕ 11/1 , р-он 9 Тихая 9

ООО «Автовиа»

84959896261

Россия, Москва и Московская обл., Москва, Москва, ул.Курганская, дом 3А

ИП белов Дмитрий Игоревич

88009468377

Россия, Калининградская обл. , Калининград, Левобережная д 5в

ИП Мотылев А.К

89502821010

Россия, Приморский край, Владивосток, Острякова 38

CaRmoBi

89183838899

Россия, Краснодарский край, Краснодар, Краснодар

Виана Королев

89688582990

Россия, Москва и Московская обл., Королев, Пионерская 4Г

Кузовные детали автомобилей.

+79200090507

Россия, Нижегородская (Горьковская) обл. , Дзержинск, ул. Октябрьская д. 20

Отзыв 1668 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 21013

Как часто Вы меняете масло? 3000 км — 2% 5000 км — 10.4% 7000 км — 25.7% 10 000 км — 47.4% 15 000 км — 10.9% больше 15 000 км — 3.6% Голосов: 20536 Последние комментарии Какое масло Вы используете? Синтетическое — 55% Полусинтетическое — 41.9% Минеральное — 3.1% Голосов: 15234

Выберите отзыв: Отзыв 1039 масло ZIC в ВАЗ ВАЗ — 21102Отзыв 1043 масло ZIC в Toyota CamryОтзыв 1055 масло ZIC в ВАЗ 2114Отзыв 1065 масло ZIC в Mercedes 190Отзыв 1119 масло ZIC в ВАЗ 2115Отзыв 1126 масло ZIC в Toyota ВистаОтзыв 1157 масло ZIC в Toyota CamryОтзыв 1195 масло ZIC в ВАЗ 2115Отзыв 1273 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2109Отзыв 1283 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) ПриораОтзыв 1288 масло ZIC в Opel OmegaОтзыв 1292 масло ZIC в Toyota vistaОтзыв 1308 масло ZIC в Opel Astra Отзыв 1337 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 21124Отзыв 1359 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2106,2107,21214Отзыв 1370 масло ZIC в Opel ВЕКТРА БОтзыв 1383 масло ZIC в Toyota CorollaОтзыв 1386 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) Лада КалинаОтзыв 1407 масло ZIC в ГАЗ 32212Отзыв 1414 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2102Отзыв 1419 масло ZIC в ГАЗ 32212Отзыв 1448 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2112Отзыв 1464 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2103Отзыв 1483 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 1119 калинаОтзыв 1488 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2106Отзыв 1495 масло ZIC в Opel Opel Vectra CОтзыв 1496 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2109Отзыв 1503 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2109Отзыв 1510 масло ZIC в Daewoo НексусОтзыв 1528 масло ZIC в Toyota ипсумОтзыв 1587 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) шестеркаОтзыв 1603 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 2110Отзыв 1619 масло ZIC в Nissan skyОтзыв 1620 масло ZIC в Nissan AvenirОтзыв 1621 масло ZIC в Lifan БризОтзыв 1622 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) приораОтзыв 1626 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 06Отзыв 1632 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 21104Отзыв 1666 масло ZIC в Lifan БризОтзыв 1668 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 21013Отзыв 1687 масло ZIC в Chevrolet AveoОтзыв 1718 масло ZIC в Great Wall ховер н5Отзыв 1729 масло ZIC в ВАЗ (ЛАДА) 21124Отзыв 1738 масло ZIC в Mazda 3Отзыв 1758 масло ZIC в Chevrolet LacettiОтзыв 1763 масло ZIC в Toyota каринаОтзыв 1796 масло ZIC в Daewoo lanosОтзыв 1801 масло ZIC в ВАЗ 2183Отзыв 1807 масло ZIC в Москвич 2141Отзыв 1826 масло ZIC в Toyota короллаОтзыв 1851 масло ZIC в ВАЗ 21104Отзыв 1889 масло ZIC в Daewoo NEXSIAОтзыв 1899 масло ZIC в KIA CERATOОтзыв 1906 масло ZIC в ВАЗ 21074Отзыв 1924 масло ZIC в Mitsubishi lancer xОтзыв 1959 масло ZIC в ВАЗ КалинаОтзыв 1973 масло ZIC в Renault LoganОтзыв 1978 масло ZIC в ВАЗ КалинаОтзыв 1987 масло ZIC в ВАЗ 2105Отзыв 2015 масло ZIC в ВАЗ 21144Отзыв 2086 масло ZIC в BMW x5Отзыв 2118 масло ZIC в Toyota CorollaОтзыв 2122 масло ZIC в Hyundai AccentОтзыв 2178 масло ZIC в Audi 100 C4 quattroОтзыв 2224 масло ZIC в ВАЗ ГрантаОтзыв 2232 масло ZIC в ВАЗ 2115Отзыв 2248 масло ZIC в ВАЗ 11174Отзыв 2266 масло ZIC в Ford FokusОтзыв 2273 масло ZIC в ВАЗ 2109Отзыв 2280 масло ZIC в Ford ExplorerОтзыв 2305 масло ZIC в Daewoo нексияОтзыв 2324 Масло ZIC в Hyundai GetzОтзыв 2419 Масло ZIC в Skoda YetyОтзыв 2420 Масло ZIC в Lexus LX 470Отзыв 2436 Масло ZIC в Honda CR-V Все отзывы ZIC CaDoFF 14 Марта 2014 Автомобиль ВАЗ (ЛАДА) 21013 — пробег: 10000 км. год выпуска: 1981 масло хорошее, только сейчас очень много подделок!Не один раз брал — всё супер, нагара практически нет, «солидола» на деталях тоже нет!Сделал капремонт двигателя, мастер похвалил чистоту мотора, решил дальше им пользоватся, купил, залил и через 2000км после капиталки нужно менять, начали сливать, а там пена!сняли поддон — «салидол» на всём!!!Короче попал на подделку!Так что если есть знакоміе в магазине то лучше спросить о его подлиности, можно попасть на подделку!!!! Оценки пользователя: Средняя: 4.00 цена: 4 качество: 4 Добавить комментарий Последние отзывы о моторных маслах Отзыв 2688 Масло Motul в Nissan Maxima 23 Сентября 2022 Посоветовали масло Motul 5w30 для моего двигателя 2. 0 литра в автомобиль Nisan. Замену делал с… Отзыв 2687 Масло Motul в Toyota Corolla 18 Сентября 2022 Попробовал залить так же Мotul цена дешевле, чем оригинал для моей Тойота Королла, а качество тоже… Отзыв 2686 Масло Motul в BMW 7 14 Сентября 2022 Покупаю это масло лет пять так точно. Советовал знакомым – все довольны. Реально хорошее масло…. Последние отзывы о свечах зажигания Отзыв 2601 Свечи DENSO в Mazda 3 27 Июля 2021 С DENSO познакомился давно, больше 2 лет назад. Жизнь прошлых свечей подошла к концу, решил брать… Отзыв 2558 Свечи FINWHALE в ВАЗ Веста 05 Января 2021 Свечи нормальные. Я че-то тоже как то был совершенно, как говорится, не при деньгах, а свечи реально… Отзыв 2557 Свечи FINWHALE в Toyota Камри 03 Января 2021 Проехал 20 тысяч километров со свечами Finwhale, решил выкрутить и посмотреть, хотя повода для этого…

Отзывы о моторных маслах Читать все отзывы по порядку Как часто Вы меняете свечи? сразу отказ — 3.3% 1000 км — 1.3% 5000 км — 6.5% 10 000 км — 23% 20 000 км — 18.2% 30 000 км — 21.4% 50 000 км — 9.4% 60 000 км и более — 16. 9% Голосов: 8982 Какие свечи Вы используете? Стандартные (Standard) — 58.2% Платиновые (Platinum) — 13.7% Иридиевые (Iridium) — 28.1% Голосов: 5532

48 заявени участници за Писта София 2022

Малко под 50 пилоти ще приеме класическата надпревара на пътен възел “Бояна”, по неофициалния списък със заявки.

Разпределението на участниците по серии е следното – 13 пилоти в едномарковата серия ЛАДА, 14 пилоти при атмосферните автомобили до 1600 куб.см. – СПОРТ, 12 пилоти в серия ТУРИНГ (автомобили до 2000 куб.см.) и 9 пилоти в кралския клас МАКСИ.

Впечатление в заявките правят двамата планинари Николай Златков (Audi S1) и Юлиян Телийски (Mitsubishi Lancer EVO 9), както и завърналия се в пистовите надпревари Калин Бенчев (Subaru Impreza WRX STi).

---

---

Серия ЛАДА

Владимир Ганев	4x 4 София	Лада 2105	лада	X3
Цветелин Велков	Дунев Рейсинг	Лада 2101	лада	X3
Веселин Николаев	Арт Рейсинг	Лада 2105	лада	X3
Тодор Василев	Проспийд	Лада 2107	лада	X2
Георги Ставров	Дунев Рейсинг	Лада 2107	лада	X3
Косю Йорданов	Дунев Рейсинг	Лада 2107	лада	X2
Владимир Тодоров	Влъчков РТ	Лада 2107	лада	X2
Крум Крумов	GAGA AVALA RACING TEAM	Лада 21074	лада	X3
Калин Костадинов	БОИЛА АВТОМОТОР СПОРТ	Лада 2107	лада	X2
Бранимир Данов	Джордан Рейсинг Тийм	Лада 21013	лада	X3
Дончо Дончев	Джордан Рейсинг Тийм	Лада 2107	лада	X2
Марио Ганчев	Джордан Рейсинг Тийм	Лада 2103	лада	X3
Красимир Шукадаров	Джордан Рейсинг Тийм	Лада 2107	лада	X3

Серия СПОРТ

Илия Вачев	Влъчков РТ	Ситроен Саксо	спорт	RC4
Иван Бакърджиев	Влъчков РТ	Пежо 106	спорт	RC4
Александър Димитров	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	спорт	HC4
Александър Димитров – Пъчката	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	спорт	HC4
Йордан Методиев	Влъчков РТ	Хонда Сивик	спорт	HC4
Станислав Първанов	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	спорт	HC4
Валентин Будинов	Дунев Рейсинг	Опел Астра	спорт	RC4
Иван Динев	Дамасцена Алба	Ситроен Саксо	спорт	RC4
Любен Емануилов	Дамасцена Алба	Пежо 106	спорт	RC
Мартин Петров	Джордан Рейсинг Тийм	Ситроен С2	спорт	RC4
Александър Антов	Джордан Рейсинг Тийм	Хонда Сивик	спорт	HC4
Ивайло Пепелджийски	Джордан Рейсинг Тийм	Лада 2107	спорт	HC4
Кристиян Тодоров	Джордан Рейсинг Тийм	Ситроен Саксо	спорт	HC2
Любомир Николов	Джордан Рейсинг Тийм	Ситроен Саксо	спорт	RC4

Серия ТУРИНГ

Светослав Ковачев	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	туринг	HC3
Димитър Кондев	Николов Мотор Спорт	Хонда Сивик	туринг	HC3
Иван Влъчков	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	туринг	HC3
Стоил Неков	Дамасцена Алба	Хонда Сивик	туринг	HC3
Деян Георгиев	Дунев Рейсинг	Опел Астра	туринг	HC3
Иван Алексиев	Проспийд	Хонда Сивик	туринг	HC3
Динко Монев	Влъчков РТ	Хонда Сивик	туринг	HC3
Николай Тодоров	Проспийд	Фолксваген Голф	туринг	HC3
Иван Иванов	Дунев Рейсинг	Фолксваген Голф	туринг	HC3
Минко Минков	Джордан Рейсинг Тийм	Опел Астра	туринг	HC3
Борислав Петров	Проспийд	Фолксваген Голф	туринг	HC3
Александър Димитров	Дунев Рейсинг	Фолксваген Голф	туринг	HC3

Серия МАКСИ

Филип Бояджиев	ВЛЪЧКОВ РТ	Мазда 323	макси	HC2
Калин Бенчев	Дунев Рейсинг	Субару Импреза	макси	HC2
Филип Игов	Арт Рейсинг	Сеат Леон	макси	HC2
Юлиян Телийски	Дунев Рейсинг	Мицубиши Лансер	макси	HC2
Искрен Попов	Дунев Рейсинг	Мицубиши Лансер	макси	HC2
Васко Въжаров	Дунев Рейсинг	Опел Астра	макси	HC1
Пламенов Ангелов	Джордан Рейсинг Тийм	Фолксваген Голф	макси	HC2
Александър Томов	Джордан Рейсинг Тийм	Субару Импреза	макси	HC2
Николай Златков	Проспийд	Ауди S1	макси	HC1

---

Прочети повече

Ще има ли промени в специалния правилник на писта за 2022 г. ?

Калин Бенчев се завръща в пистовия шампионат

Румен Дунев: Писта „София 2022” ще е празник за пилотите и феновете

ЕтикетиFeaturedзаявкикалин бенчевНиколай ЗлатковПиста Софияписта софия 2022СофияучастнициЮлиян Телийски

Peavey Rage 258 Гитарный усилитель с технологией TransTube

Peavey Rage 258 Гитарный усилитель с технологией TransTube | Друг музыканта Перейти к основному содержанию

правда

2 балла для участников

Пиви

4,5 из 5 звезд с (33) Всего отзывов вопросы и ответы Артикул № 481336000000000

149,99 149,99 долл. США правда

Или же

12-месячное специальное финансирование

Ограниченное время Узнать больше

Без процентов при полной оплате в течение 12 месяцев*

При соответствующих покупках, сделанных с помощью Платиновой карты Musician’s Friend до 28. 09.22. Проценты будут начисляться на ваш счет с даты покупки, если рекламная покупка не будет оплачена полностью в течение 12 месяцев. Требуются минимальные ежемесячные платежи.

*Квалифицирующая сумма покупки должна быть указана в одном чеке, за исключением следующего: оборудование в открытой коробке и подарочные сертификаты. Не суммируется с промо-купонами. Проценты на покупку по акции не начисляются, если вы полностью погасите ее в период действия акции. Если вы этого не сделаете, проценты будут начисляться на промо-покупку с даты покупки. Требуемые минимальные ежемесячные платежи могут окупить или не окупить акционную покупку к концу периода акции. Обычные условия учетной записи применяются к неакционным покупкам и, после окончания промо-периода, к оставшемуся акционному балансу. Для новых учетных записей: годовая цена покупки составляет 29 годовых.0,99%. Минимальная процентная ставка составляет 2 доллара. Существующие держатели карт: см. условия соглашения о кредитной карте. При условии одобрения кредита.

• Подать заявку легко и быстро!
• Статус и сумма кредита при проверке!
• Мгновенные решения, так что вы можете сделать покупку прямо сейчас!

*Квалифицирующая покупка (за исключением подарочных сертификатов) должна быть оформлена одним чеком. Специальное финансирование на 12 месяцев не распространяется на оборудование с открытой коробкой и не может сочетаться с рекламными купонами или скидками, предоставляемыми вручную. Проценты на покупку по акции не начисляются, если вы полностью оплачиваете сумму покупки по акции в течение периода действия акции. Если вы этого не сделаете, проценты будут начисляться на промо-покупку с даты покупки. В зависимости от суммы покупки, продолжительности акции и распределения платежей требуемые минимальные ежемесячные платежи могут окупить или не окупить покупку к концу периода акции. Обычные условия учетной записи применяются к покупкам, не связанным с рекламой, а после окончания акции — к балансу по акции. Для новых учетных записей: годовая цена покупки составляет 29 годовых.0,99%; Минимальная процентная ставка составляет 2 доллара. Существующие держатели карт должны ознакомиться с применимыми условиями соглашения о кредитной карте. При условии одобрения кредита.

Дополнительные способы оплаты:

true

Аренда с последующим выкупом с Progressive Leasing. Узнать больше

Воспользуйтесь программой Lease-to-Own, которая поможет вам приобрести необходимое снаряжение уже сегодня.

Оцените свой платеж Применить сейчас

Рекламируемая услуга представляет собой договор аренды с выкупом или аренды или аренды с покупкой, предоставляемый Prog Leasing, LLC или ее аффилированными лицами. Приобретение права собственности путем лизинга стоит больше, чем цена наличными розничному продавцу. Подробнее об аренде см. Лизинг доступен только для некоторых товаров в участвующих точках. Недоступно в MN, NJ, VT, WI, WY. * Кредит не требуется — Progressive Leasing получает информацию от бюро кредитных историй. Не все кандидаты одобрены. *Первоначальный платеж (плюс налог) взимается при подписании договора аренды. Оставшиеся арендные платежи будут определены при выборе объекта. *9Вариант покупки с нулевым днем ​​— стандартное соглашение предлагает 12 месяцев владения. Варианты покупки на 90 дней стоят больше, чем цена наличными у продавца (за исключением варианта на 3 месяца в Калифорнии). Чтобы купить ранний звонок 877-898-1970

Иконка «Очки лояльности»

Зарегистрируйтесь бесплатно и начните получать 8% с каждой покупки. Участники Rewards также получают предложения с двойными и тройными баллами, доступ к предложениям только для участников, а также выделенную телефонную линию для советников Gear и купон на 25 долларов в день вашего рождения — все от нас.

Присоединение бесплатно

Site1sku481336000000000 True MFI = 0 True

Кто-то должен быть дома, чтобы получить посылку

Убедитесь, что вы измерили свой вход и у вас есть помощь, чтобы нести предмет в

Заказать сейчас!

Этот товар недозаказан, но уже доступен для резервирования. Вы не будете платить, пока товар не будет отправлен.

Новый

12345678121314151617181920

Посмотреть корзину

• Бесплатная доставка
• Самые популярные
• Гибкое финансирование
• Самая низкая цена

Защита золотого покрытия

36 МЕСЯЦЕВ

+ $35,99

24 МЕСЯЦА

+ 23,99 $

План не выбран

Защитите свое снаряжение

Gold Coverage выходит за рамки гарантии производителя и защищает ваше снаряжение от непредвиденных обстоятельств. поломки, случайные повреждения при обращении и неудачи. Этот план покрывает ваш продукт в течение одного, двух, трех или до пяти лет с вашей даты. из покупка, стоит всего копейки в день и дает вам комплексное решение, не требующее беспокойства, для защиты ваших инвестиций.

Золотое покрытие Включает:

• Неожиданные и непреднамеренные разливы, падения и трещины
• Нормальный износ
• Скачки напряжения
• Пыль, внутреннее тепло и влажность

Другие функции плана включают в себя:

• Для продуктов стоимостью более 200 долларов США действует политика запрета лимонов. Если это не удается по одному и тому же дефекту 3 раза, это заменены на 4-й поломке. (Не относится к отказам из-за падений, разливов и трещин)
• Для продуктов стоимостью менее 200 долларов США, в которых возникают описанные выше сбои, будет выдана подарочная карта Musician’s Friend. изданный за полную стоимость товара + налог.
• Плата за доставку покрывается, если требуется ремонт или замена
• Планы можно передавать в случае продажи товаров
• Планы обновляются на новом снаряжении

*Применяются ограничения и исключения. См. условия и условия (Открывается в новом окне) для деталей программы

Срок действия New Gear начинается с даты покупки, но не заменяет политику возврата магазина или производитель покрытие.

Воспроизвести видео

Обзор

Гитарный усилитель Peavey Rage 258 — невероятно мощный сверхлегкий усилитель, вес которого составляет всего 16 фунтов. Уникальный среди тренировочных усилителей, он дает вам 2 канала, 3 совершенно разных голоса — Stack, Modern и Vintage — для огромной палитры тональных ароматов. Регуляторы усиления до и после усиления, а также 3-полосный эквалайзер делают его готовым к джем-сейшну, а разъем для наушников и вход для магнитофона/CD идеально подходят для сольных занятий.

• 25 Вт RMS
• 8-дюймовый сверхмощный динамик Blue Marvel
• 3-полосный эквалайзер
• 2 канала
• Дополнительный вход/прямой выход ленты/CD
• Ручки усиления до и после
• Основная громкость
• Переключатель стека/модерна/винтажа
• Разъем для наушников
• 16 фунтов.
• 19-1/4″ Ш x 15-1/2″ В x 9-1/2″ Г

{ «api_key»: «fee5c893-11c4-4cc8-b419-02f8d404de16», «локаль»: «en_US», «merchant_group_id»: «15229», «merchant_id»: «815274», «id_страницы»: «481336», «review_wrapper_url»: «https://www.musiciansfriend.com/write-review/pdp?pr_page_id=___PAGE_ID___», «ENABLE_CONTENT_COLLECTION_MODAL»: ложь, «REVIEW_DISPLAY_LIST_TYPE»: «СОКРАЩЕННЫЙ», «REVIEW_DISPLAY_PAGINATION_TYPE»:»ВЕРТИКАЛЬНЫЙ», «style_sheet»: «https://static.musiciansfriend.com/cmn/brand/mf/productionCss/powerReviewsOverride.r.css?vId=hf-laborday-0831.0a&cb=3», «составные части»: { «ReviewDisplay»: «pr_review-display», «QuestionDisplay»: «pr_question-display» } }

отзывов

Покупай с другом

Бесплатная доставка

• Бесплатная стандартная наземная доставка (48 смежных штатов, за исключением некоторых товаров с избыточным весом и бывших в употреблении/винтажных товарах).
• Заказы, размещенные до 15:00. ET обычно отправляется в тот же рабочий день.

Узнать больше

2 года бесплатной гарантии на гитары

Каждая гитара или бас-гитара, приобретенная вами в магазине Musician’s Friend (электрическая или акустическая, новая или открытая упаковка), имеет двухлетнюю защиту от дефектов производителя.

Свяжитесь с нами для получения подробной информации

Мы здесь для вас

Наши консультанты по Gear помогут вам на протяжении всего процесса совершения покупок. Позвоните или напишите в чат, чтобы получить экспертную консультацию и узнать о последних предложениях.

Свяжитесь с нами

Чат поддержки Proactive Advisor

Наши советники по Gear готовы помочь.

Позвоните нам Давайте поговорим (откроется в новом окне) Запросить обратный звонок

ПН-ПТ 6:00-20:00 (тихоокеанское время)

СБ-ВС 7:00-19:00 (тихоокеанское время)

Ищете что-то другое? Найдите ответы в нашем Справочном центре

{«product»:{«rep_id»:»site1prod481336″,»sku_rep_id»:»site1sku481336000000000″,»download»:false,»price»:»149,99″,»контрольная сумма»:»82476759863″,»name»:»Пиви Гитарный усилитель Rage 258 с технологией TransTube»,»sku_id»:»481336000000000″,»id»:»481336″,»stock»:»под заказ»,»бренд»:»Peavey»},»dept»:»Усилители и эффекты «,»category»:»Усилители»,»subcategory»:»Гитарные усилители»,»pageName»:»product_detail»}

: 2021 :: Решения других судов Нью-Йорка :: Прецедентное право Нью-Йорка :: Закон Нью-Йорка :: Закон США :: Justia

[*1] Бонилья против штата Нью-Йорк 2021 NY Slip Op 21013 Решение принято 22 января 2021 г. Претензионный суд Вайнштейн, Дж. Опубликовано Бюро юридической отчетности штата Нью-Йорк в соответствии с § 431 Судебного закона. Это мнение не исправлено и подлежит пересмотру перед публикацией в печатных Официальных отчетах.

Решение от 22 января 2021 г.
Претензионный суд

Луис Бонилья, Истец,

против

Штат Нью-Йорк, Ответчик.

133141

Для Истца:

Ирвинг Коэн, присяжный поверенный

Автор: Ирвинг Коэн, эсквайр.

Ответчику:

Летиция Джеймс, генеральный прокурор штата Нью-Йорк

Автор: Джанет Полштейн, эсквайр, помощник генерального прокурора
Дэвид А. Вайнштейн, Дж.

В данном случае истец Луис Бонилья требует возмещения ущерба в связи с предполагаемым неправомерным осуждением в соответствии со статьей 8-b Закона о претензионном суде. На совещании 14 декабря суд назначил рассмотрение дела об ответственности виртуально на 20 мая 2021 года с учетом возможных возражений сторон.

Письмом от 21 декабря 2020 года помощник генерального прокурора, представляющий ответчика, написал в суд возражение против проведения виртуального судебного разбирательства. Письмо, указанное в соответствующей части:

«По распоряжению суда ответчик приступил к даче показаний истца в виртуальном режиме 3 декабря 2020 года, что дало представление о технических трудностях виртуального судебного разбирательства по этому конкретному делу. г-н Бонилья, который давал показания через испанского переводчика, участвовал в даче показаний из дома его дочери, и связь прерывалась каждый раз, когда ей звонили. Мистер Коэн [адвокат противной стороны] и я участвовали дистанционно. Как вам известно, офис Генеральной прокуратуры в Нью-Йорке остается закрытым, по крайней мере, Февраль, и мы продолжаем работать из дома. Как я повторил на телефонной конференции на прошлой неделе, это дело о несправедливом осуждении, в котором [*2]достоверность истца является ключом к делу. Ответчик получил видеозаписи с камер наблюдения за преступления от окружной прокуратуры. Наш ИТ-отдел смог разделить исходную видеозапись с разделенного экрана на отдельные видеокассеты, и я допросил г-на Бонилью при его показаниях. о его деятельности на ленте в определенные ключевые моменты времени. Однако во время виртуального судебного разбирательства, когда монитор суда демонстрирует экспонат, видео занимает главный экран, тем самым уменьшая лицо истца до небольшой плитки. Ответчик утверждает, что эта установка не идеальна для оценки достоверности истца или его реакции на видеозапись, которая, как я ожидаю, заставит его подтвердить свои показания в суде. По этим причинам ответчик почтительно просит отложить судебное разбирательство по этому делу до тех пор, пока мы с г-ном Коэном не освоимся с рисками для здоровья, связанными с личным участием в судебном заседании, и суды в Нью-Йорке не будут работать в обычном режиме».

Истец не занял позицию по запросу ответчика.

Настоящее Решение направлено на возражение ответчика против проведения виртуального судебного разбирательства по вопросу об ответственности по данному делу. В анализе есть два аспекта: (1) имею ли я право приказать сопротивляющейся стороне явиться на судебное разбирательство, которое будет проводиться дистанционно; и (2) должен ли я по своему усмотрению использовать эти полномочия в данном случае. Поскольку на оба вопроса я отвечаю утвердительно, приказываю провести судебное разбирательство по вопросу об ответственности виртуально.

В соответствии с § 2-b(3) Судебного закона, «[а] судебная инстанция имеет право разрабатывать и устанавливать новый процесс и формы разбирательства, необходимые для осуществления полномочий и юрисдикции, которыми он обладает». Задолго до того, как кто-либо услышал слова «COVID-19» или «социальное дистанцирование», суды первой инстанции использовали это право для ведения разбирательства дистанционно, а апелляционные суды постоянно поддерживали это право (см. People v Cintron (75 NY2d 249 [1990] [ разрешается снятие телевизионных показаний ребенка-свидетеля из отдельной комнаты]; People v Wrotten, 14 NY3d 33, 36 [2009 г. ] [«неотъемлемые полномочия суда и § 2-b Судебного закона наделяют его полномочиями по разработке процедуры», в соответствии с которой свидетелям разрешается давать показания в прямом эфире по двустороннему телевидению в суде]). Такие процедуры обычно применялись в Претензионном суде для проведения судебных разбирательств по искам, поданным заключенными, посредством видеоконференцсвязи из исправительных учреждений — практика, которая была поддержана в качестве надлежащего осуществления полномочий суда по разделу 2-b (см. «Джексон против штата», 165 AD3d 1527 [3-й департамент 2018 г.]).

По крайней мере, в уголовных делах суд должен принять «индивидуальное решение о том, что отказ от физической очной ставки лицом к лицу необходим для продвижения важного общественного порядка, а надежность свидетельских показаний во всем остальном гарантируется» (Wrotten, 14 NY3d 38-39). Этот принцип был изложен в деле Wrotten в контексте обсуждения Судом права обвиняемого на очную ставку со своим обвинителем в соответствии с пунктом о конфронтации, поэтому неясно, применим ли он к гражданским делам (см. Wrotten, 14 NY3d). в 38 [«осуществление этих полномочий после установления необходимости допустимо в соответствии с положениями о конфронтации как федеральной конституции, так и конституции штата»]; но см. State v Robert F., 25 NY3d 448 [2015] [с применением того же критерия в статье 10 гражданской ответственности, на том основании, что показания должны даваться дистанционно только в «исключительных обстоятельствах» или с согласия сторон, поскольку «показания по телевидению, безусловно, не эквивалентны личным показаниям»]). Для настоящих целей я буду предполагать, что в данном случае имеет значение письменный тест (см. Wyona Apartments LLC против Ramirez, 2020 NY Slip Op 20309).[Kings Cty Civ Ct, 22 ноября 2020 г.], в *3 [применяется требование «выводов по конкретному делу» к [*3]вопросу о проведении виртуального слушания по гражданскому делу]).

Конечно, в данном случае есть исключительное обстоятельство: пандемия COVID-19 (см. C.C. v A.R., 69 Misc 3d 983, 992 [Kings Cty Fam Ct 2020] [«глобальная пандемия является «исключительным обстоятельством», позволяющим этот суд для рассмотрения всех аспектов этого разбирательства. .. виртуальными средствами»]). Пандемия поставила суды перед выбором Хобсона: подвергать общественность и запрещать смертельную и очень заразную болезнь, проводя личные судебные процессы, с одной стороны, и значительно задерживая доступ к судам, с другой. Виртуальное судебное разбирательство представило выход из этой дилеммы, позволив судебному процессу двигаться вперед, не подвергая опасности здоровье участников. В значительной степени это подтвердилось в Претензионном суде, который успешно провел десятки виртуальных судебных процессов.

Учитывая полномочия Суда вводить дистанционные процедуры в соответствии с разделом 2-b, а также чрезвычайную справедливость в пользу использования таких процедур для решения нашего нынешнего затруднительного положения, все суды, столкнувшиеся с этим вопросом в течение прошлого года, пришли к выводу, что допустимо и целесообразно принуждать сторону к участию в виртуальном разбирательстве (см. C.C., выше [слушание о неуважении к суду]; Wyona Apartments LLC, выше [судебный процесс между арендодателем и арендатором]; Ciccone v One West 64th Street, Inc. , 2020 WL 6325719[Sup Ct, NY Cty, 8 сентября 2020 г.] [слушание по доказыванию]; В КАЧЕСТВЕ. v NS, 68 Misc 3d 767 [Sup Ct, NY Cty 2020] [суд над опекой]; см. также Rodriguez v Montefiere Medical Center, 2020 WL 7689633 [Sup Ct, Bx Cty, 23 декабря 2020 г.] [ссылка на многочисленные дела, предписывающие, чтобы показания производились виртуально во время пандемии]; Jones v Memorial Sloan Kettering Cancer Ctr., 186 AD3d 1851, 1852 n [3-е отделение 2020 г.] [«Мы не можем не принять к сведению, что если пандемия COVID-19 что-то и доказала, так это полезность (если не предпочтение) ведения дел через видео»]). Как заявил суд в Wynona Apartments LLC, см. выше: «Не может быть никаких сомнений в том, что текущее состояние COVID-19Пандемия, охватившая страну, оправдывает проведение немедленного судебного разбирательства виртуальными средствами» (2020 NY Slip Op 20309, at *4).

Что касается конкретных аргументов ответчика по этому делу, я нахожу их совершенно неубедительными.

Во-первых, ответчик альтернатива дистанционному разбирательству — когда стороны и суд просто пережидают пандемию и проводят судебное разбирательство лично в любой момент, когда это может быть безопасно и разрешено административными распоряжениями, изданными главным административным судьей, — не является альтернативой Учитывая распространение вируса последовательными волнами, наличие новых штаммов и неопределенный ход распространения вакцины, никто не может с уверенностью сказать, когда снова станет возможным судебное разбирательство (см. A.S., выше, 68). Разное 3d в 768 [«Учитывая непредсказуемый характер COVID-19пандемии неизвестно, когда судебные процессы вернутся к обычным процедурам с личным присутствием»]; C.C., 69 Misc 3d at 993 [позиция о том, что «этот суд должен отложить на неопределенный срок любое продолжение текущего судебного разбирательства» является «необоснованной»]). Суд не может просто откладывать судебное разбирательство на неопределенный срок при том понимании, что в какой-то неизвестный момент в будущем истец предстанет перед судом. Такой подход в корне противоречил бы принципу, согласно которому суды должны стремиться вести разбирательство перед собой в эффективном и быстром деле (см. CPLR 104 [«Закон и правила гражданской практики должны толковаться либерально, чтобы обеспечить справедливое, быстрое и недорогое решение каждого гражданского судебного разбирательства»]). И это противоречит старому (но по-прежнему весьма точен) изречение о том, что «отсрочка правосудия означает отказ в правосудии» 9. 0005

Эти опасения особенно верны в деле 8-b, подобном этому, где [*4]предмет касается предполагаемого преступления, имевшего место много лет назад. В данном случае события, послужившие основанием для заявленного иска, произошли 8 января 2012 г., более девяти лет назад (см. Претензию ¶ 11). Отсрочка судебного разбирательства еще более усложнит и без того сложную задачу точного определения того, что произошло в далеком прошлом, не говоря уже о дальнейшей отсрочке определения того, имеет ли истец право на компенсацию, и предоставления ему компенсации в случае, если он выиграет дело.

Различные потенциальные ужасы, которые могут сопровождать виртуальное судебное разбирательство по этому делу, как обрисовано в общих чертах в письме ответчика, не компенсируют затраты на такую ​​задержку. Защитник опасается, что проблемы, которые проявились при даче показаний, могут вновь проявиться в суде, например, прерывания из-за входящих звонков. Таких проблем можно было бы избежать, если бы заблаговременно до судебного разбирательства была проведена подготовка, обеспечивающая истцу надлежащее устройство для доступа к разбирательству. Но если случится худшее и виртуальное испытание будет сорвано, что с того? Технические сбои действительно случаются в видеосудебных процессах, но как только стороны завершили свои показания, этот суд успешно провел многочисленные виртуальные судебные процессы, несмотря на такие проблемы — и это, по-видимому, было опытом судебной системы в целом (см. Мартинес против М. Надлана). , ООО, 69Misc 3d 1208[a] [Civ Ct, City of NY, 21 октября 2020 г.] [осмотр квартиры проведен виртуально; «качество видео и звука имело некоторые проблемы с подключением, но оказалось надежным для суда, чтобы сделать свои замечания»]). По сути, ответчик предполагает, что во избежание возможной задержки на несколько минут или даже часов, которая может возникнуть из-за технических проблем, суд должен установить определенность задержки всего судебного разбирательства на многие месяцы. Я не могу придумать причин, по которым последний вариант предпочтительнее.

Адвокат также утверждает, что оценка достоверности показаний свидетеля будет нарушена, поскольку свидетель будет казаться маленьким при воспроизведении видеоматериала.

Хотя суды признали такие недостатки дистанционного дачи показаний, это не помешало использованию виртуального судебного разбирательства, поскольку они «позволяют судье, присяжным и подсудимому… видеть и слышать свидетеля и оценивать поведение свидетеля, выражение лица, голос и манера речи во время дачи показаний» (см. Cintron, 75 NY2d, 260). По моему собственному опыту — и наблюдениям других судей, придерживающихся различных мнений по этому вопросу, — улучшения в видеотехнологиях теперь облегчают передачу виртуальных изображений, которые являются четкими и крупными, и позволяют в достаточной мере учитывать поведение свидетеля (см. In re RSC and ResCap Иск о ликвидации траста, 444 F Supp 3d 967, 970 [D Minn 2020] [цитаты и внутренние кавычки опущены] [в то время как «[c]некоторые характеристики показаний, полезные для оценки достоверности и убедительности… к процессу установления фактов, может быть уменьшено», достижения в области видеотехнологий «позволяют [] присяжным [или, в судебном заседании, суду] видеть живого свидетеля вместе с его колебаниями, его сомнениями, его вариациями языка , его уверенность или поспешность, [и] его спокойствие или внимательность»]). Тот факт, что изображение свидетеля может быть меньше, пока его допрашивают по одному вещественному доказательству, никоим образом не меняет баланса соображений, изложенных выше.

В свете вышеизложенного и при условии отсутствия противоположного распоряжения о повторном открытии судов для очных слушаний до даты судебного разбирательства судебное разбирательство по этому делу должно состояться виртуально, как и было запланировано, 20 мая, 2021.

Дата: 22 января 2021 г.

Олбани, Нью-Йорк

ДЭВИД А. ВАЙНШТЕЙН

Судья Претензионного суда

Рассмотренные документы

1. Письмо помощника генерального прокурора Джанет Полштейн в суд от 21 декабря 2020 г.

Ремонт и обслуживание гитар | Гитары Тейлора

Алабама

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальная компания братьев Бейли Монтгомери Сайт »	Монтгомери	231 E Jefferson St Montgomery, AL 36104 ТЕЛЕФОН: (334) 262-7827	серебро
Гитарный центр Бирмингема Сайт »	Гувер	1694 Montgomery Hwy Hoover, AL 35216 ТЕЛЕФОН: 205-824-6454	серебро

Арканзас

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальная компания Палмер Сайт »	Конвей	1131 Front St Conway, AR 72032 ТЕЛЕФОН: 501-327-8129	золото

Аризона

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Акустическая музыка Сайт »	Темпе	2070 E Южный пр. Темпе, AZ 85282 ТЕЛЕФОН: 480-656-7749	серебро
Аризона Мьюзик Про Сайт »	Флагстафф	122 E Маршрут 66 Флагстафф, AZ 86001 ТЕЛЕФОН: 928-556-9054	серебро
Музыка в стиле буги Сайт »	Феникс	3562 W Cactus Rd Phoenix, AZ 85029 ТЕЛЕФОН: 602-978-6688	серебро
Радужные гитары Сайт »	Тусон	2550 Н Кэмпбелл Авеню Тусон, Аризона 85719 ТЕЛЕФОН: 520-325-3376	серебро плюс

ТЕЛЕФОН: 9512

8

ТЕЛЕФОН: 909-383-3700

ТЕЛЕФОН: 619-258-1207

Калифорния

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Bananas At Large — Сан-Рафаэль Сайт »	Сан-Рафаэль	1654 2-я улица Сан-Рафаэль, Калифорния ТЕЛЕФОН: 415-457-7600	серебро
Гитары и услуги BJR Сайт »	Аламеда	1800 Ferry Point Аламеда, Калифорния ТЕЛЕФОН: 925-639-6930	золото
Empire Guitar Works Hemet Сайт »	Хемет	43466 Сидар-авеню Хемет, Калифорния	серебро
Струнные инструменты грифона Сайт »	Пало-Альто	211 Ламберт Авеню Пало-Альто, Калифорния ТЕЛЕФОН: (650) 493-2131	золото
Гитарный центр Чико Сайт »	Чико	2027 Доктор Мартин Лютер Кинг-младший Пкви Чико, Калифорния ТЕЛЕФОН: 530-879-1731	серебро
Гитарный центр Сан-Бернадино Сайт »	Сан-Бернардино	925 E Hospitality Ln Сан-Бернардино, Калифорния	серебро
Средства для гитары Сайт »	Санта-Ана	13361 Yorba Street Санта-Ана, Калифорния ТЕЛЕФОН: 714-544-8350 contact@guitarremedy. com	золото
Инструментальная музыка Thousand Oaks Сайт »	Тысяча дубов	1501 E Thousand Oaks Blvd. Таузенд-Оукс, Калифорния	ТЕЛЕФОН: 805-496-3774	серебро
Музыка JAMS	Дублин	7282 Сан-Рамон Роуд. Дублин, Калифорния ТЕЛЕФОН: (925) 828-5267	серебро
Магазин гитар McCabe & Camp Сайт »	Санта-Моника	3101 Бульвар Пико. Санта-Моника, Калифорния	ТЕЛЕФОН: (310) 828-4497	серебро
Музыкальная поставка Напа Сайт »	Напа	2026 Редвуд Роуд. Напа, Калифорния ТЕЛЕФОН: 707-265-8275	серебро
Гитары Neely Custom Сайт »	Лос-Анджелес	7424 1/2 Sunset Blvd Suite 1 Лос-Анджелес, Калифорния ТЕЛЕФОН: 323-850-7043	серебро плюс
Гитары Taylor — ремонтная мастерская США	Эль-Кахон	1900 Gillespie Way Эль-Кахон, Калифорния
премьер
Гитарный магазин Сайт »	Лагуна Бич	1027 North Coast Hwy Laguna Beach, CA ТЕЛЕФОН: 949-497-2110	серебро
Музыка дикого леса Сайт »	Арката	1027 I St Арката, Калифорния ТЕЛЕФОН: 707-822-6264	серебро плюс

Колорадо

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Денвер Сайт »	Денвер	1585 S Colorado Blvd Денвер, Колорадо 80222 ТЕЛЕФОН: 303-759-9100	серебро
Гитары Spampinato Сайт »	Денвер	7700 East Iliff Ave. , Suite A Denver, CO 80231 ТЕЛЕФОН: (720) 638-1944	серебро
Лютерия Вудсонгс Сайт »	Боулдер	3070 28th Street Unit C Boulder, CO 80301 ТЕЛЕФОН: 303-449-0550	золото

Коннектикут

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Коннектикут Гитара и струны Сайт »	Брукфилд	5 Jireh Lane Brookfield, CT 6804 ТЕЛЕФОН: 203-733-9768	золото
Гитарный центр Данбери Сайт »	Дэнбери	15 Бэкус Авеню Данбери, Коннектикут 6810 ТЕЛЕФОН: 203-796-0148	серебро

Делавэр

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Уилмингтон Сайт »	Уилмингтон	5141 Brandywine Parkway Wilmington, DE 19803 ТЕЛЕФОН: 302-478-3831	серебро

Флорида

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Blues Angel Music Пенсакола Сайт »	Пенсакола	657 бульвар Н. Пейс. Пенсакола, Флорида 32505 ТЕЛЕФОН: 850-457-7557	серебро
Музыкальный центр Carlton Winter Haven Сайт »	Зимняя Гавань	308 Avenue D NW Winter Haven, FL 33881 ТЕЛЕФОН: 863-294-4216	серебро плюс
Музыка Корзика Сайт »	Лонгвуд	705 W State Road 434 Suite B Лонгвуд, Флорида 32750 ТЕЛЕФОН: 4077987678	серебро
Гитарный центр Окала Сайт »	Окала	3920 SW 42nd ST #B-2 Окала, Флорида 34474 ТЕЛЕФОН: (352) 861-4442	серебро плюс
Лейтц Мьюзик Сайт »	Панама Сити	508 Harrison Ave Панама-Сити, Флорида 32401 ТЕЛЕФОН: 850-769-0111	серебро
Лейтц Мьюзик Сайт »	Форт-Уолтон-Бич	650 Beal Pkwy NW Fort Walton Beach, FL 32547 ТЕЛЕФОН: 850-863-1099	серебро
Призменные гитары	Пляж Понте-Ведра	130 Corridor Road Unit 1653 Ponte Vedra Beach, FL 32082 ТЕЛЕФОН: 61010	серебро
Музыка Seven C Сайт »	Санкт-Петербург	535 22-я улица С. Санкт-Петербург, Флорида 33712 ТЕЛЕФОН: 727-290-6741	золото
Всего развлечений Сайт »	Дейтона-Бич	501 W International Speedway Blvd Daytona Beach, FL 32114 ТЕЛЕФОН: 386-254-8727	серебро

Грузия

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Berkshire Сайт »	Августа	428 5-я улица Огаста, Джорджия 30901 ТЕЛЕФОН: 706-823-5800	серебро плюс
Гитарный центр Macon Сайт »	Мейкон	4551 Билли Уильямсон Доктор Люкс 160 Мейкон, Джорджия 31206 ТЕЛЕФОН: 478-471-3520	серебро
Музыка Кена Стэнтона Сайт »	Каменная гора	5236 Stone Mountain Highway Stone Mountain, GA 30087 ТЕЛЕФОН: (678) 672-6742	серебро
Музыка Кена Стэнтона Мариетта Сайт »	Мариэтта	119 Кобб Пки N Мариетта, Джорджия 30062 ТЕЛЕФОН: 770-427-2491	серебро
Гитары Righteous Сайт »	Розуэлл	1455 Hembree Road Розуэлл, Джорджия 30076 ТЕЛЕФОН: 678-735-3115	серебро

Гуам

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Американская музыка Сайт »	Тамунинг	128-AN Корпус морской пехоты Dr Тамунинг, Гуам 96913 ТЕЛЕФОН: (671) 647-6895	серебро

Гавайи

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыка Кирнан Сайт »	Кеалакекуа	79-7401 Мамалохоа шоссе. Кеалакекуа, Гавайи 96750 ТЕЛЕФОН: 808-322-4939	серебро

Айова

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыка Рэя Мидбелла Сайт »	Су-Сити	4230 С. Ланселот Лейн Су-Сити, ИА 51106 ТЕЛЕФОН: 712-276-0351	серебро
Лютерейный магазин Сайт »	Де-Мойн	2400 86th Street #14 Де-Мойн, IA 50322 ТЕЛЕФОН: 217-277-2255	золото

Айдахо

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыка Чесбро Сайт »	Айдахо-Фолс	327 W Broadway St Айдахо-Фолс, ID 83402 ТЕЛЕФОН: 208-522-8691	серебро

Иллинойс

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Babin Сайт »	Хэмпшир	508 Prairieview Parkway Только по предварительной записи Hampshire, IL 60140 ТЕЛЕФОН: 847-683-9597	золото
Чикагская мастерская Сайт »	Чикаго	4229 N Lincoln Ave Чикаго, Иллинойс 60618 ТЕЛЕФОН: 773-698-6246	серебро плюс
Чикагская музыкальная биржа Сайт »	Чикаго	3316 N Lincoln Ave Чикаго, Иллинойс 60657 ТЕЛЕФОН: 773-525-7773	серебро
Гитарный центр Вилла Парк Сайт »	Вилла Парк	298 W Roosevelt Rd Вилла Парк, Иллинойс 60181 ТЕЛЕФОН: 630-832-2800	серебро
Музыкальный центр Рэнди Сайт »	Рокфорд	4116 Морсей Д-р Рокфорд, Иллинойс 61107 ТЕЛЕФОН: 815-399-1500	серебро
Гитарная служба Третьего побережья Сайт »	Чикаго	159 North Racine Первый этаж Чикаго, Иллинойс 60607 ТЕЛЕФОН: 312-275-0095	золото
Тобиас Мьюзик Сайт »	Даунерс Гроув	5013 Fairview Ave Downers Grove, IL 60515 ТЕЛЕФОН: 630-960-2455	серебро

Индиана

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Индианаполис Сайт »	Индианаполис	8475 Castleton Corner Dr Indianapolis, IN 46250 ТЕЛЕФОН: 317-578-9570	серебро
Пролив Суитуотер Сайт »	Форт-Уэйн	5501 In-30 Вт Форт-Уэйн, IN 46818 ТЕЛЕФОН: 260-432-8176	серебро плюс

Канзас

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Массовая уличная музыка Сайт »	Лоуренс	1347 Массачусетс-Стрит Лоуренс, Канзас 66044 ТЕЛЕФОН: 785-843-3535	золото

Кентукки

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыка Аббы	Хендерсон	119 N Main St Хендерсон, Кентукки 42420 ТЕЛЕФОН: 270-826-0186	серебро

Луизиана

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Нового Орлеана Сайт »	Новый Орлеан	1000 S Clearview Pky Новый Орлеан, Лос-Анджелес 70123 ТЕЛЕФОН: 504-818-0338	серебро
Lafayette Music Co. , Inc Сайт »	Лафайет	3700 Johnston St Lafayette, LA 70503 ТЕЛЕФОН: 337-984-3700	серебро
Гитарная мастерская Тима Сайт »	Батон-Руж	1935 B Даллас Д-р Батон-Руж, Луизиана 70806 ТЕЛЕФОН: 225-926-8467	золото

Массачусетс

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Армстронг Сайт »	Натик	810 Worcester Rd Natick, MA 1760 ТЕЛЕФОН: 508-726-1700	золото
Ремонт струнной гитары D Сайт »	Старбридж	531 Main Street Sturbridge, MA 1518 ТЕЛЕФОН: 774-334-8006	серебро плюс
Гитарный центр Натик Сайт »	НАТИК	РЫНОК CLOVERLEAF NATICK, MA 01760 ТЕЛЕФОН: 508-655-6525	серебро
Гитары Sauve Сайт »	Северный Адамс	121 Union Street North Adams, MA 1247 ТЕЛЕФОН: 413-663-3060	серебро плюс

Мэриленд

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Магазин аппалачского мятлика Сайт »	Катонсвилл	643 Frederick Road Catonsville, MD 21228 ТЕЛЕФОН: 410-744-1144	золото
Вашингтонский музыкальный центр Чака Левина Сайт »	Уитон	11151 Veirs Mill Road Wheaton, MD 20902 ТЕЛЕФОН: 301-946-8808	серебро
Создай музыку Сайт »	Фредерик	7540 North Market Street, доб. Frederick, MD 21701 ТЕЛЕФОН: 301-662-8822	серебро

Мэн

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Прибор и усилитель Kennebec Сайт »	Брансуик	14 Maine St, офис 0100-1, Box 57 Brunswick, ME 4011 ТЕЛЕФОН: 207-446-4327	серебро плюс

Мичиган

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Инструменты для пожилых людей Сайт »	Лансинг	1100 N Washington Ave Lansing, MI 48906 ТЕЛЕФОН: 517-372-7880	золото
Кал-тон Сайт »	Каламазу	1501 Fulford St` Kalamazoo, MI 49001 ТЕЛЕФОН: 269-389-0632	серебро
Музыкант Сайт »	Брайтон	5757 Whitmore Lake Rd, Ste 1200 Брайтон, MI 48116 ТЕЛЕФОН: 810-227-9440	серебро
Компания Traverse City Guitar Сайт »	Траверс Сити	322 E Front Street Traverse City, MI 49684 ТЕЛЕФОН: 231-943-1211	серебро

Миннесота

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Окдейл Сайт »	Окдейл	6798 3-я улица N Окдейл, Миннесота 55128 ТЕЛЕФОН: 651-578-0577	серебро
Гитарный центр Twin Cities Сайт »	Розвилл	1641 County Road B2 W Розвилл, Миннесота 55113 ТЕЛЕФОН: 651-634-0100	серебро
Ремонт гитары St Paul Сайт »	Сент-Пол	1101 West 7th St Saint Paul, MN 55102 ТЕЛЕФОН: 651-224-4168	золото

Миссури

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный лофт Дэвида Сайт »	Сент-Луис	8136 Биг Бенд бульвар Сент-Луис, Миссури 63119 ТЕЛЕФОН: 314-962-9536	серебро
Музыка Эрни Уильямсона Сайт »	Спрингфилд	3100 С. Фримонт Авеню Спрингфилд, Миссури 65804 ТЕЛЕФОН: 417-881-1373	серебро

Монтана

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальная вилла Сайт »	Бозман	539 E Main St Bozeman, MT 59715 ТЕЛЕФОН: 406-587-4761	серебро
Музыка Пикколо Сайт »	Елена	1401 11-я авеню Елена, MT 59601 ТЕЛЕФОН: 406-443-4709	серебро

Северная Каролина

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары для казино Сайт »	Южные сосны	115 North East Broad St. Southern Pines, NC 28387 ТЕЛЕФОН: 910-725-0807	серебро
Король ладов Сайт »	Кэри	101-D Деревянные духовые инструменты Industrial Ct Cary, Северная Каролина 27511 ТЕЛЕФОН: 919-210-2410	золото
Музыкальная мастерская Сайт »	Эшвилл	319 Мерримон Авеню Эшвилл, Северная Каролина 28801 ТЕЛЕФОН: 828-252-1249	серебро

Северная Дакота

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Флатландская гитара и Лютерия Сайт »	Фарго	1450 25-я улица #151 Фарго, ND 58103 ТЕЛЕФОН: 701-205-3627	серебро плюс

Невада

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Ремонт гитары Topaz Сайт »	Лас-Вегас	800 N Rainbow Blvd Suite 208 Лас-Вегас, Невада 89107	серебро
Причудливая гитара Сайт »	Рено	2677 бульвар Одди. Рино, NV 89512 ТЕЛЕФОН: 775-331-1001	серебро

Нью-Гемпшир

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Diburro Сайт »	Эксетер	81 Уотер Ст Эксетер, NH 3833 ТЕЛЕФОН: 603-778-0746	премьер
Музыка северного сияния Сайт »	Литтлтон	57 Main St Littleton, NH 03561 ТЕЛЕФОН: 603-444-7776	серебро
Струны и вещи Музыка Сайт »	Конкорд	113 South Main St Concord, NH 03301 ТЕЛЕФОН: 603-228-1971	серебро плюс

Нью-Джерси

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитарный центр Спрингфилд Сайт »	Спрингфилд	160 US-22 Спрингфилд, Нью-Джерси 07081 ТЕЛЕФОН: 973-921-0677	серебро
Музыка О. ДиБеллы	Бергенфилд	456 S Washington Ave Бергенфилд, Нью-Джерси 7621 ТЕЛЕФОН: 201-385-5800	серебро
Ремонт гитар Raritan Bay Сайт »	Право собственности	3352 B Route 9 South Freehold, NJ 7728 ТЕЛЕФОН: 732-866-9024	золото
Руссо Мьюзик Асбери Парк Сайт »	Асбери Парк	619 Лейк-авеню Эсбери-Парк, Нью-Джерси 7712 ТЕЛЕФОН: 732-455-8397	серебро
Музыка Сэма Эша Сайт »	Спрингфилд	155 US-22 Спрингфилд, Нью-Джерси 07081 ТЕЛЕФОН: 973-376-5161	серебро

Нью-Мексико

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Мейн Стрит Мьюзик Сайт »	Ацтек	210 S Main Ave Aztec, NM 87410 ТЕЛЕФОН: 505-334-5210	серебро

Нью-Йорк

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Альтовая музыка Сайт »	Водопад Ваппингерс	1676 Route 9 Wappingers Falls, NY 12590 ТЕЛЕФОН: 845-297-0011	серебро
Гитарный центр Buffalo Сайт »	Тонаванда	1092 Niagara Falls Blvd Тонаванда, Нью-Йорк 14150 ТЕЛЕФОН: 716-833-8200	серебро
Гитарный центр Cheektowaga Сайт »	Чиктовага	3385 Union Rd Cheektowaga, NY 14225 ТЕЛЕФОН: 716-681-6282	серебро
Ремонт гитар Лонг-Айленд Сайт »	Несконсет	201 Smithtown Blvd. Несконсет, Нью-Йорк 11767 ТЕЛЕФОН: 631-521-3848	серебро плюс
Специалист по гитаре Сайт »	Золотой мост	307 Route 22 Goldens Bridge, NY 10526 ТЕЛЕФОН: 914-401-9052	серебро плюс
Дом гитар Сайт »	Рочестер	645 Титус Авеню Рочестер, Нью-Йорк 14617 ТЕЛЕФОН: 585-544-3500	серебро
Гитары Иш Сайт »	Сиракузы	1929 Тил Авеню Сиракузы, Нью-Йорк 13206 ТЕЛЕФОН: 315-447-3243	серебро
Музыкальный бульвар Сайт »	Клифтон Парк	1777 Маршрут 9 Клифтон-Парк, Нью-Йорк 12065 ТЕЛЕФОН: 518-383-0300	серебро
Музыка Сэма Эша Сайт »	Белые равнины	178 Mamaroneck Ave White Plains, NY 10601 ТЕЛЕФОН: 914-949-8448	серебро плюс
Музыкальный зоопарк Сайт »	Фармингдейл	123 Smith St Farmingdale, NY 11735 ТЕЛЕФОН: 516-626-9292	серебро

Огайо

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитаристы Сайт »	Хит	651 С 30-я улица Хит, Огайо, 43056 ТЕЛЕФОН: 740-522-0277	серебро
Музыка Сэма Эша — Линдхерст Сайт »	Линдхерст	5700 Mayfield Rd Lyndhurst, OH 44124 ТЕЛЕФОН: 440-446-0850	серебро
Музыка Вудси Сайт »	Кент	135 S Water St Кент, Огайо 44240 ТЕЛЕФОН: 330-673-1525	серебро
J. Kennedy Guitar Repair & Bridge Builder Custom Instruments Сайт »	Цинциннати	6230 B Center Park Dr Цинциннати, Огайо 45069 ТЕЛЕФОН: 513-874-4877	серебро

Оклахома

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальная биржа Barnett Сайт »	Талса	8205 E Королевский ст. Ste 101 Талса, OK 74133 ТЕЛЕФОН: 918-970-4069	серебро
Гитарный центр Талса Сайт »	Талса	9919 E 71st St Талса, Оклахома 74133 ТЕЛЕФОН: 918-307-0943	серебро
Музыка для бегущих собак Сайт »	Сломанная стрела	1169 Аспен Авеню Брокен Эрроу, ОК 74012 ТЕЛЕФОН: 918-630-6264	серебро плюс

Орегон

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Five Star Сайт »	Хиллсборо	17305 NW Corridor Ct. , Suite 100 Hillsboro, OR 97006 ТЕЛЕФОН: 503-439-9500	серебро
Портлендские лепные изделия Сайт »	Портленд	3039 СВ Альберта Портленд, Орегон 97211 ТЕЛЕФОН: 503-249-3737	золото
Музыка в верхней части города Сайт »	Кайзер	3827 River Rd N Keizer, OR 97303 ТЕЛЕФОН: 503-393-4437	серебро

Пенсильвания

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальный магазин Brothers Сайт »	Ветровой зазор	731 Южный Бродвей Винд Гэп, Пенсильвания 18091 ТЕЛЕФОН: 610-881-4600	золото
Первая гитара Сайт »	Ланкастер	202 Butler Avenue, Suite 303 Lancaster, PA 17601 ТЕЛЕФОН: 717-295-4688	серебро
Музыка N Stuff Сайт »	Питтсбург	468 Фрипорт Роуд Питтсбург, Пенсильвания 15238 ТЕЛЕФОН: 412-828-1003	серебро
Северо-восточный музыкальный центр Сайт »	Диксон Сити	713 Scranton Carbondale Hwy Siniawa Plaza II Dickson City, PA 18519 ТЕЛЕФОН: 570-909-9216	серебро
Семейный музыкальный центр Роберта М. Сайдса Сайт »	Уильямспорт	Малберри-стрит, 201 Уильямспорт, Пенсильвания 17701 ТЕЛЕФОН: 570-326-2094	серебро
Музыка Сэма Эша Сайт »	Филадельфия	1887 Franklin Mills Cir Филадельфия, Пенсильвания 19154 ТЕЛЕФОН: 215-612-1339	серебро
Музыка Сэма Эша — Король Пруссии Сайт »	Король Пруссии	139 E Dekalb Pike Король Пруссии, Пенсильвания 19406 ТЕЛЕФОН: 610-265-6444	серебро
Мир музыки Сайт »	Эри	1355 Западная 26-я улица Эри, Пенсильвания 16508 ТЕЛЕФОН: 814-459-2585	серебро

Южная Каролина

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Сэм Икинс Сайт »	Дункан	312 Лэнсдаун-стрит, Дункан, Южная Каролина 29334 ТЕЛЕФОН: 864-640-5995	золото

Северная Дакота

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыка Хаггерти Сайт »	Рапид Сити	2520 W Main St Rapid City, SD 57702 ТЕЛЕФОН: 605-348-6737	серебро

Теннесси

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Инструменты Glaser Сайт »	Нэшвилл	434 Э. Ирис Д-р Нэшвилл, Теннесси 37204 ТЕЛЕФОН: 615-298-1139	золото
Гитарные услуги Левана Сайт »	Станция Томпсон	2781 Critz Lane Станция Thompsons, TN 37179 ТЕЛЕФОН: 615-251-8884	золото
Классический топор Сайт »	Нэшвилл	1024 16th Avenue South Nashville, TN 37212 ТЕЛЕФОН: 615-254-8058	золото

Техас

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальный центр Аламо Сайт »	Сан-Антонио	425 N Main Ave Сан-Антонио, Техас 78205 ТЕЛЕФОН: 210-224-1010	серебро
Музыкальный центр Аламо Сайт »	Сан-Антонио	1530 Babcock Rd Сан-Антонио, Техас 78229 ТЕЛЕФОН: 210-525-1010	серебро
Гитара Дэнни Д. Hacienda Сайт »	Лига Сити	200 Шоссе 3 N Лиг Сити, Техас 77573 ТЕЛЕФОН: 281-338-1830	золото
Гитара Фуллера Сайт »	Хьюстон	116 Северная петля Хьюстон, Техас 77008 ТЕЛЕФОН: 713-880-2188	серебро
Великая южная музыка Сайт »	Кипарис	12312 Barker Cypress Rd # 1700 Cypress, TX 77429 ТЕЛЕФОН: 281-758-3434	серебро
Гитарный центр Plano Сайт »	Плано	2333 N Центральный Expy Плано, Техас 75075 ТЕЛЕФОН: 972-422-7171	серебро
Гитарный центр Сан-Антонио Сайт »	Сан-Антонио	7325 Сан-Педро-авеню Сан-Антонио, Техас 78216 ТЕЛЕФОН: 210-348-7225	серебро
Lutherie & Repair Lambs Сайт »	футов. Стоимость	8127 B White Settlement Rd Ft. Стоит, Техас 76108 ТЕЛЕФОН: 817-244-8600	золото
Гитары Недда Сайт »	Конро	27562 Робинсон Конроу, Техас 77385 ТЕЛЕФОН: 281-681-1132	серебро плюс
Стрейт Музыка Сайт »	Остин	2428 W Ben White Blvd Остин, Техас 78704 ТЕЛЕФОН: 512-476-6927	серебро
Гитарный заповедник Сайт »	Маккинни	6633 Вирджиния Пкви Маккинни, Техас 75071 ТЕЛЕФОН: (972)540-6420	серебро
Магазин тембров Гитары Сайт »	Аддисон	15317 Мидуэй Роуд Аддисон, Техас 75001 ТЕЛЕФОН: 972-661-8663	серебро плюс

Юта

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Акустическая музыка Сайт »	Солт-Лейк-Сити	857 Е 400 С Солт-Лейк-Сити, Юта 84102 ТЕЛЕФОН: (801) 531-7066	серебро
Лучшее в музыке Сайт »	Орем	444 З 800 С Орем, Юта 84057 ТЕЛЕФОН: 801-802-8022	серебро
Гитарный центр Ривердейл Сайт »	Ривердейл	5430 Freeway Park Dr Riverdale, UT 84405 ТЕЛЕФОН: (801) 773-7030	серебро
Гитары Main Street	Логан	29 S Main St. Логан, Юта 84321 ТЕЛЕФОН: 435-752-3055	серебро
Музыка Ривертона Сайт »	Сэнди	9491 Юг 255 Запад Сэнди, Юта 84070 ТЕЛЕФОН: 801-255-8300	серебро

Вирджиния

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Ремонт гитар Accu-Tech Сайт »	Саффолк	3612 Итака Трейл Саффолк, Вирджиния 23435 ТЕЛЕФОН: 757-582-0525	серебро плюс
Альфа Музыка Сайт »	Вирджиния-Бич	3234 бульвар Вирджиния-Бич Вирджиния-Бич, Вирджиния 23452 ТЕЛЕФОН: 757-486-2001	серебро
Музыкальная мельница Сайт »	Роанок	21 Салем Авеню ЮВ Роанок, Вирджиния 24011 ТЕЛЕФОН: 540-982-6686	серебро

Вермонт

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Инструменты SB MacDonald Custom Сайт »	Честер	660 Mattson Rd Честер, VT 5143 ТЕЛЕФОН: 802-875-7397	золото

Вашингтон

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Музыкальная компания Коул Сайт »	Спокан	816 West Garland Ave. Spokane, WA 99205 ТЕЛЕФОН: 509-244-3001	серебро
Пыльные струны Сайт »	Сиэтл	3406 Фремонт-авеню N Сиэтл, Вашингтон 98103 ТЕЛЕФОН: (206) 634-1662	золото
Музыка Хьюго Хелмера Сайт »	Берлингтон	1025 Goldenrod Rd Burlington, WA 98233 ТЕЛЕФОН: 360-757-0270	серебро
Гитарные работы Майка Лулла Сайт »	Бельвю	12031 Northup Way STE 206 Bellevue, WA 98005 ТЕЛЕФОН: 425-643-8074	серебро
Ремонт гитары South Sound Сайт »	Такома	323 Puyallup Ave STE D Пожалуйста, назначьте встречу Tacoma, WA 98421 ТЕЛЕФОН: 253-220-3525	серебро плюс

Висконсин

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Магазин гитар Дейва Милуоки	Милуоки	914 S 5th St Милуоки, Висконсин 53204 ТЕЛЕФОН: 608-790-9816	серебро плюс
Мастерская мастера Сайт »	Грин Бэй	1778 Main Street Грин Бэй, Висконсин 54302 ТЕЛЕФОН: 920-450-8798	серебро

Западная Виргиния

Название	Город	Адрес	Ремонт Уровень
Гитары Роджера Морилло Сайт »	Сент-Олбанс	121A 4-я авеню Сент-Олбанс, Западная Вирджиния 25177 ТЕЛЕФОН: 304-550-3375	серебро плюс

ИЗДАТЕЛЬСТВО CSIRO | Микробиология Австралия

ИССЛЕДОВАНИЕ СТАТЬЯ (открытый доступ)

Предыдущий Следующий Содержание Том 42(1)

Эрик Де Клерк

+ Принадлежности автора

— Принадлежности автора

KU Leuven, Отделение микробиологии, иммунологии и трансплантологии, Институт медицинских исследований Rega, Herestraat 49, 3000 Левен, Бельгия. Тел.: + 32 16 37 90 20; Электронная почта: [email protected]

Microbiology Australia 42(1) 47-53 https://doi.org/10.1071/MA21013
Подано: 5 февраля 2021 г. Принято: 3 марта 2021 г. Опубликовано: 12 апреля 2021 г.

Journal Compilation © The Authors 2021 Open Access CC BY, опубликовано (CSIRO Publishing) от имени ASM

Abstract

По сравнению с вакцинами противовирусные препараты для сдерживания COVID-19(инфекция SARS-CoV-2) развивались гораздо более низкими темпами. Эффективность фавипиравира (у хомяков) доказана, но только в очень высоких дозах, что невозможно для людей. Ремдесивир является единственным противовирусным препаратом, одобренным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, но его безопасность не подвергалась тщательной оценке. EIDD-1931 и EIDD-2801 клинически не оценивались. Ингибиторы M ^pro (протеазы) также должны быть подвергнуты клиническим исследованиям эффективности и безопасности. Ремдесивир является С-нуклеозидом, и этот класс соединений нуждается в дальнейшей оценке. Полианионные вещества, препятствующие адсорбции вируса на клетках-хозяевах, не исследованы. Их можно вводить ингаляционно. Кортикостероиды (например, дексаметазон), хотя и стимулируют вирус, а не подавляют его, могут противодействовать «цитокиновому шторму». Комбинация (двух или более) соединений, упомянутых выше, может обеспечить повышенную пользу за счет синергетического взаимодействия.

Введение

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов ()…ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

В настоящее время вакцины более популярны, чем противовирусные препараты, в попытках обуздать COVID-19. Тем не менее, для вакцин необходимы определенные требования, которые a fortiori могут применяться и к противовирусным препаратам. Эти требования следуют правилу 5: эффективность, безопасность, доступность, практичность и стоимость.

В качестве успеха вакцинации часто упоминается использование вируса осповакцины как ответственного за глобальную (всемирную) ликвидацию вируса натуральной оспы (оспы), объявленную Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 1980 г. Из всех прививок осповакцина является единственной вирусной вакциной, которой можно приписать это уникальное достижение. Описаны эффективные вакцины против полиомиелита, такие как вакцины, первоначально разработанные Джонасом Солком и Альбертом Сабином, но полная ликвидация полиовируса, хотя и ожидалась, до сих пор не достигнута.

В отношении вируса гриппа защитные вакцины по-прежнему необходимо ежегодно корректировать, а также в отношении некоторых других вирусных инфекций, таких как желтая лихорадка [единственная вирусная инфекция, для которой открытие вакцины было признано Нобелевской премией (Макс Тейлер) ], болезнь по-прежнему распространена, так как передается комарами ( Aedes Aegypti ), а также может происходить от животных-резервуаров (приматов).

Для вируса гепатита В (ВГВ) доступны как противовирусные препараты, так и вакцины, но для других вирусных инфекций, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вакцинация (пока что) оказалась неосуществимой или ненужной [вирус гепатита С (ВГС)] , так как можно ожидать, что использование противовирусных препаратов прямого действия (ПППД) устранит вирус, или нецелесообразно (человеческие риновирусы), поскольку существует слишком много серотипов (> 100).

SARS-CoV-2 должен находиться в Coronaviridae (род: бета-коронавирус). Первым появившимся видом был SARS-CoV-1 (SARS означает «тяжелый острый респираторный синдром») в 2003 году. Затем последовал MERS-CoV (MERS: ближневосточный респираторный синдром) в 2012 году и SARS-CoV-2 в 2019 году (COVID -19). Потенциальные противовирусные препараты против ОРВИ были предложены в 2006 г. ¹ и против COVID-19 в 2020 г. ² .

Мишени для противовирусных препаратов (таблица 1)

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов (). ..ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

Интерферон

Интерферон был первоначально открыт в 1957 году Айзексом и Линденманном ³ как вещество, вырабатываемое организмом для блокирования («препятствования») вирусной инфекции, в casu influenza. За последние десятилетия интерферон был официально одобрен для лечения нескольких вирусных инфекций, включая HBV и HCV, несмотря на некоторые нежелательные побочные эффекты, которые неотъемлемо связаны с экзогенным введением интерферона, то есть лихорадка, усталость и недомогание.

Таблица 1. Репликативный цикл SARS-CoV-2 предлагает несколько возможных мишеней для химиотерапевтического вмешательства, как и ВИЧ.

При лечении COVID-19 он может действовать как палка о двух концах. В зависимости от реакции хозяина и стадии заболевания интерферон (будь то α- или β-интерферон) может при некоторых состояниях из-за своего противовирусного действия благоприятно влиять на течение заболевания, но, будучи сам по себе цитокином, может также ухудшать течение болезни. инфекция, участвуя или усугубляя цитокиновый шторм, который может сопровождать инфекцию SARS-CoV-2.

Рибавирин

Рибавирин (виразол) является первым аналогом нуклеозида, когда-либо описанным как противовирусное средство широкого спектра действия ⁴ . Сообщалось, что он эффективен при лечении лихорадки Ласса (геморрагическая лихорадка (HF) арена вирусной инфекции) ⁵ . В сочетании с (пегилированным) интерфероном-α рибавирин использовался почти целое десятилетие (2000-2010 гг.) для лечения гепатита С, где теперь он был заменен более эффективными ПППД.

Хотя традиционно считается противовирусным средством, его основной механизм действия, ингибирование биосинтеза GTP, как следствие ингибирование дегидрогеназы IMP ⁶ , также совместимо с иммунодепрессивным эффектом ⁷ . В качестве противовирусного агента рибавирин может не обладать достаточной эффективностью, чтобы блокировать репликацию SARS-CoV-2, но в качестве иммунодепрессанта он может проявить желаемую полезность для ограничения цитокинового шторма, сопровождающего инфекцию SARS-CoV-2.

(Гидрокси)хлорохин

Утверждается, что (гидрокси)хлорохин без указания механизма его действия ингибирует репликацию SARS-CoV-2 in vitro (гидроксихлорохин более эффективен, чем хлорохин) ^{8 – 10} . Однако Hoffmann и др. . определенно исключили, что хлорохин может ингибировать репликацию SARS-CoV-2 в клетках легких человека (Calu-3) ¹¹ . Также Каптейн и др. . ¹² обнаружили, что гидроксихлорохин совершенно неактивен против инфекций SARS-CoV-2 у хомяков. Таким образом, нет веских причин для дальнейшей поддержки его использования при лечении COVID-19.

Полианионные вещества

На протяжении более полувека полианионные соединения рассматривались как потенциальные противовирусные агенты: т. е. двухцепочечные РНК, такие как поли(I).поли(С), как индукторы интерферона и сульфатированные полисахариды, такие как сульфат декстрана, как ингибиторы Адсорбция ВИЧ. Структурно родственный полисульфонат сурамина, первоначально идентифицированный как мощный (мышиный) ингибитор обратной транскриптазы (RT) ¹³ был первым соединением, блокирующим ВИЧ-инфекцию, как in vitro ¹⁴ , так и in vivo ¹⁵ .

Сульфатированные полисахариды охватывают чрезвычайно широкое семейство соединений, включая природные (морские) вещества, такие как каррагинаны, полученные из морских водорослей ¹⁶ . Можно ожидать, что эти соединения будут блокировать адсорбцию всех оболочечных вирусов, включая коронавирусы. Удивительно, что никогда не сообщалось об активности каких-либо сульфатированных (или анионных) полимеров против SARS-CoV-2.

Полианионные вещества могут не подходить для системного введения, поскольку при таком введении они не могут легко достигать своих клеток-мишеней, но они могут быть пригодны для местного введения, т. е. ингаляции, которые могут хорошо подходить для терапии SARS-CoV- 2 инфекция.

Ингибиторы протеазы

Комбинация лопинавира с ритонавиром (последний для увеличения периода полувыведения первого из плазмы за счет ингибирования цитохрома P450) была официально одобрена в качестве специфического дуэта ингибиторов протеазы ВИЧ для лечения ВИЧ-инфекций, как и 8 других Ингибиторы протеазы ВИЧ (например, саквинавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, фосампренавир, атазанавир, типранавир и дарунавир). Удивительно, что лопинавир и ритонавир (а позже и некоторые другие ингибиторы протеазы ВИЧ) были рекомендованы для лечения инфекций SARS-CoV-2.

Эта заявка была создана в связи с тем, что лопинавир и ритонавир, как сообщалось, проявляли ингибирующую активность in vitro в отношении SARS-CoV-2 ^{17 – 19} . Поэтому обнадеживает тот факт, что у госпитализированных взрослых пациентов с тяжелой формой COVID-19 лечение лопинавиром (+ ритонавиром) не давало дополнительных преимуществ, помимо стандартного лечения ²⁰ .

Протеаза ВИЧ принципиально отличается от основной протеазы коронавируса М ^pro или 3CL ^pro , который с 2003 года считается привлекательной мишенью для разработки препаратов против SARS ²¹ . Репрезентативное соединение, α-кетоамид 13b (рис. 1), оказалось высокоэффективным в ингибировании репликации SARS-CoV-2 в клетках легких человека Calu-3 ²² . Это соединение может подойти для ингаляционного введения при лечении COVID-19.

Рисунок 1. α-кетоамид 13b.

В целом, α-кетоамиды демонстрируют низкие микромолярные значения EC ₅₀ против широкого спектра коронавирусов и энтеровирусов ²³ . Остается выяснить, имеет ли какой-либо из α-кетоамидов, и если да, то какой, практическую пользу в терапии (или профилактике) COVID-19 любым путем, то есть ингаляционным, пероральным или парентеральным. Это потребует углубленного изучения клинических кандидатов α-кетоамидов на предмет их безопасности, клинической эффективности и фармакокинетического и динамического профиля.

Основная протеаза SARS-CoV-2 M ^pro (3CL ^pro ) также может быть нацелена на ряд соединений, несущих альдегидную группу, которая может быть ковалентно связана с цистеином 145 M ^pro . Это было показано для соединений 11a и 11b ²⁴ . Соединение 11a (рис. 2) также проявляло низкую цитотоксичность и ингибировало репликацию SARS-CoV-2 в клетках Vero E6 при EC ₅₀ , равной 0,53 мкМ. Авторы пришли к выводу, что соединение 11а может быть хорошим кандидатом для дальнейшего изучения.

Рисунок 2. Соединение 11a.

Ратнаяке и др. . ²⁵ описал несколько ингибиторов 3C-подобных протеаз, также содержащих альдегидную группу, причем одним из ведущих соединений является соединение 6e (рис. 3), которое блокирует репликацию SARS-CoV-2 в первичных эпителиальных клетках дыхательных путей человека [EC ₅₀  : 0,17 мкМ в анализе FRET (резонансный перенос энергии флуоресценции)]; он увеличил выживаемость с 0 до 100% в мышиной модели инфекции MERS-CoV.

Рисунок 3. Соединение 6e.

Хаттори и др. . ²⁶ сообщили, что индолхлорпиридиниловый эфир, GRL-0920 (рис. 4), может полностью блокировать инфекцию SARS-CoV-2 в клетках Vero E6 (независимо от того, сверхэкспрессирует ли TMPRSS2 или нет (EC ₅₀ ≃ 9 мкМ) в результате ковалентная связь с Cys 145 и His 41. Обладает ли GRL-0920 или любой другой индолхлорпиридиниловый эфир какой-либо терапевтической или профилактической ценностью против COVID-19.у человека еще предстоит определить.

Рис. 4. GRL-0920.

Ингибиторы RdRp (РНК-зависимая РНК-полимераза)

Помимо M ^pro , RdRp SARS-CoV-2 также может рассматриваться в качестве привлекательной мишени для разработки специфических ингибиторов SARS-CoV-2. Структура этого фермента (полимераза nsp12, связанная с кофакторами nsp7 и nsp8) была опубликована в 2019 г. ²⁷ . Вскоре после этого Чиен и его сотрудники, в том числе Р.Н. Kirchdoerfer сообщил, что RdRp SARS-CoV-2 может ингибироваться 5′-трифосфатными формами софосбувира, AZT (3′-азидо, 2′, 3′-дидезокситимидин, азидотимидин) и FdT (3′-фтор -2′,3′-дидезокситимидин, аловудин) и 5′-дифосфатный метаболит тенофовира, которые после их включения в продукт RdRp будут действовать как терминатор цепи последнего ²⁸ .

То, что софосбувир, азидотимидин и аловудин могли бы это сделать, было снова повторено в статье, опубликованной Ju 9.3960 и др. . ²⁹ . Затем эмтрицитабин и тенофовир, активные соединения, присутствующие в препаратах Truvada ^® и Descovy ^® , используемых в качестве PrEP (доконтактной профилактики) для предотвращения ВИЧ-инфекции, были выделены в качестве терминаторов цепи для SARS-CoV-2 RdRp ³⁰ . Это вдохновило некоторых авторов на проведение некоторых исследований молекулярного докинга ³¹ . Это заставило меня, в свою очередь, предостеречь, что разработка противовирусных препаратов должна основываться на тщательном тестировании противовирусной активности, которое не может быть заменено молекулярным докингом 9. 3970 32 .

Тем временем количество аналогов нуклеозидов, которые, как утверждается, действуют против RdRp SARS-CoV-2 в соответствии с тем же методом modus operandi (включение с последующим обрывом цепи), увеличилось до еще 11 молекул, включая карбовиртрифосфат, ставудинтрифосфат, ганцикловира трифосфат, энтекавир трифосфат и цидофовира дифосфат ³³ . Поскольку этот список соединений включает в себя ряд противовирусных препаратов, официально одобренных для лечения ВИЧ, ВГВ и герпесвирусных инфекций, весьма сомнительно, если не маловероятно, что какое-либо из этих соединений может быть применимо для лечения COVID-19..

Фавипиравир

Фавипиравир (T-705; рис. 5) — аналог пиразина, официально одобренный в Японии и Южной Корее для лечения инфекций, вызванных вирусом гриппа. Было показано, что он активен в отношении широкого спектра (+)РНК- и (-)РНК-вирусов, включая вирусы геморрагической лихорадки RVA ³⁴ . Сообщалось, что у хомяков он обладает мощной противовирусной активностью против инфекции SARS-CoV-2, но только в высоких дозах (1 г/кг два раза в день) ¹² . Сомнительно, чтобы такие высокие дозы были безопасны для человека. Клинические испытания фавипиравира в настоящее время продолжаются в нескольких странах ³⁵ .

Рисунок 5. Фавипиравир.

Активность фавипиравира in vitro против SARS-CoV-2 не наблюдалась в экспериментах, проведенных профессором Масанори Баба (личное сообщение, 2020 г.). Чтобы быть противовирусно активным, фавипиравир должен соответствовать двум требованиям. Как аналог пиразина, он должен быть сначала преобразован фосфорибозилтрансферазой, которая, подобно гипоксантин/гуанинфосфорибозилтрансферазе (4GPT), превращает фавипиравир непосредственно в рибозил-5′-монофосфат фавипиравира, который затем должен быть дополнительно фосфорилирован до 5′-дифосфата и 5′- трифосфата до того, как последний смог действовать как ингибитор RdRp SARS-CoV-2. Экспериментально не было показано, может ли последний (после удаления его дифосфатного фрагмента) действовать как ингибитор или, возможно, как необлигатный терминатор цепи синтеза вирусной РНК. Такая возможность не исключена, так как фавипиравир содержит карбоксамид (-CO-NH ₂ ), который имитирует часть C ₆ -N ₁ гуанина. который был бы склонен к спариванию оснований (через образование водородной связи) с цитозином (ср. спаривание оснований Уотсона-Крика).

NHC (

N ⁴ -гидроксицитидин, EIDD-1931)

β-D- N ⁴ -Гидроксицитидин (NHC, EIDD-1931; рисунок 6 a ) проявляет активность против различных неродственных РНК-вирусов, включая грипп, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), эболавирус ( EBOV), альфа- и коронавирусы ^{36 – 40} .

Рис. 6. ( a ) EIDD-1931. ( б ) EIDD-2801.

Перорально биодоступное пролекарство EIDD-1931, а именно его 5′-изопропиловый эфир EIDD-2801 (рис. 6 b ), оказалось ингибирующим SARS-CoV-2 в культурах эпителиальных клеток дыхательных путей человека и множественных коронавирусов. у мышей ⁴¹ .

С механистической точки зрения можно ожидать, что NHC, если он преобразуется в его 5′-трифосфат, будет мешать RdRp SARS-CoV-2 и действовать, если он включен в вирусную РНК, как возможная необлигатная цепь. терминатора из-за спаривания оснований через водородные связи с гуанином. Эта механистическая точка зрения, возможная клиническая эффективность NHC (EIDD-1931) и его пролекарства EIDD-2801, а также все необходимые оценки безопасности и фармакокинетики еще предстоит провести.

Ремдесивир

Ремдесивир (Veklury ^® ; рис. 7 a ) в настоящее время является единственным соединением, официально одобренным FDA США для лечения COVID-19 в дозе 200 мг в первый день с последующим приемом один раз в день. 100 мг на общую продолжительность 5 дней, все внутривенно. Если у пациента не наблюдается клинического улучшения, курс лечения может быть продлен до 10 дней. Родителем Ремдесивира является GS-441524 (Рисунок 7 9). 3960 b ), который является преобладающим метаболитом, достигающим легких. Утверждалось, что GS-441524 превосходит Ремдесивир в лечении COVID-19 ⁴² .

Рисунок 7. ( a ) Ремдесивир (Веклюри ^® ). ( б ) ГС-441524.

GS-441524 был первоначально синтезирован Чунг У Кимом и его коллегами из Gilead Sciences в 2012 г. ⁴³ . Цель состояла в том, чтобы найти активность против HCV, но была обнаружена активность против широкого спектра РНК-вирусов с RdRp в качестве фермента-мишени.

О том, что ремдесивир был активен против репликации SARS-CoV-2 in vitro , впервые сообщил Ван 4 февраля 2020 г. В этом исследовании также сообщалось об активности пенцикловира.

То, что Ремдесивир должен быть эффективным против SARS-CoV-2, можно было предсказать на основании его активности как против эпидемических, так и против зоонозных коронавирусов ⁴⁴ и различных эндемичных и зоонозных дельтакоронавирусов человека с сильно отличающейся РНК-зависимой РНК-полимеразой ⁴⁵ .

Мишенью действия Ремдесивира против SARS-CoV-2 является его RdRp ^{46 , 47} . Включение 5′-трифосфата ремдесивира (в виде его 5′-монофосфата) в положение i вызывает прекращение синтеза РНК в положении i+3 ^{48 , 49} .

Ремдесивир доказал свою эффективность при лечении инфекции MERS CoV и SARS-CoV-2 у макак-резусов ^{50 , 51} . Для достижения клинической пользы лечение следует начинать на ранних стадиях вирусной инфекции.

Клинические исследования Ремдесивира на людях дали смешанные результаты. 10 апреля 2020 г. Грейн и др. . ⁵² сообщили, что использование Ремдесивира из сострадания для пациентов с тяжелой формой COVID-19привело к клиническому улучшению у 36 из 53 пациентов (68%). 29 апреля 2020 года Ван и др. . ⁵³ сообщили, что в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом многоцентровом исследовании ремдесивир не ассоциировался со статистически значимыми клиническими преимуществами. 22 мая 2020 года Бейгель и др. . ⁵⁴ сообщили, что Ремдесивир превосходил плацебо в сокращении времени до выздоровления у взрослых, госпитализированных с COVID-19. 27 мая 2020 г. Гольдманн и др. . ⁵⁵ сообщили, что у пациентов с тяжелой формой COVID-19, не нуждающихся в ИВЛ, не было существенной разницы между 5-дневным курсом и 10-дневным курсом Ремдесивира. 21 августа 2020 года Spinner и др. . ⁵⁶ сообщили, что среди пациентов с COVID-19 средней степени тяжести, рандомизированных на 10-дневный курс Ремдесивира, не было статистически значимой разницы в клиническом состоянии по сравнению со стандартной терапией через 11 дней после начала лечения; пациенты, рандомизированные на 5-дневный курс ремдесивира, имели статистическую разницу в клиническом статусе по сравнению со стандартной терапией, но эта разница имела неопределенное клиническое значение.

В Европе официальное разрешение на продажу Ремдесивира от Европейского агентства по лекарственным средствам (EMA) все еще находится на рассмотрении. Производитель Gilead Sciences установил цену в размере 2340 долларов США за 5-дневный курс лечения в конце июня 2020 года. Теперь вопрос заключается в том, будет ли Remdesivir для лечения COVID-19 в Европе обеспечивать соотношение цены и качества ⁵⁷ ?

Несмотря на то, что ремдесивир одобрен в США и ожидается его одобрение в ЕС, ряд вопросов, связанных с ремдесивиром, еще предстоит решить, т. е. пероральная биодоступность, безопасность, оптимальная дозировка, оптимальный способ введения, фармакодинамика и терапия, риск резистентности развитие, взаимосвязь структура-активность (SAR) и т. д.

С-нуклеозиды

Тот факт, что Ремдесивир, единственный противовирусный препарат, который был официально одобрен FDA США для лечения COVID-19, является С-нуклеозидом, делает его первым С-нуклеозидом в истории, когда-либо одобренным как С-нуклеозид. -нуклеозид. В отличие от N-нуклеозидов, к которым относятся все аналоги нуклеозидов, присутствующие в настоящее время на рынке противовирусных (или противоопухолевых) препаратов, С-нуклеозиды не подвержены фосфоролитическому расщеплению, которое с помощью неорганического фосфата (Pi) расщепляет N-гликозидную связь между гетероциклическим кольцом (например, пуриновым или пиримидиновым) и фрагментом сахара (например, рибозы или дезоксирибозы). Фосфоролитическое расщепление в норме осуществляется пуриновой или пиримидинфосфорилазой, ответственной за совершенно обратимую реакцию общего типа Нуклеозид + Pi Пурин/пиримидин + (дезокси)рибоза – MP, которая протекает как при деградации (катаболизме), так и при биосинтезе ( спасение) нуклеотидов.

Потенциальное терапевтическое применение Ремдесивира можно было предвидеть, когда в 2016 году я написал, что С-нуклеозиды следует пересмотреть в качестве противовирусных средств ⁵⁸ . В качестве примера можно привести пиразофурин (, он же пиразомицин ), который, как мы обнаружили в 1970-х годах, обладает противовирусными свойствами, намного превосходящими рибавирин ⁵⁹ . Нет экспериментальных доказательств того, что, за исключением GS-441524 и его фосфорамидата (Ремдесивир), любые другие аналоги С-нуклеозидов или их фосфорамидаты будут эффективны против COVID-19., но эта возможность до конца не изучена.

Заключение

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов (). ..ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

Нехватка противовирусных препаратов для лечения инфекции SARS-CoV-2, доступных в настоящее время, контрастирует с обилием вирусных вакцин, которые были разработаны для предотвращения инфекции. Кроме того, мы не знаем, как именно SARS-CoV-2 может развить устойчивость к этим противовирусным препаратам и/или сколько вариантов вируса существует сегодня или может появиться в будущем.

Наиболее вероятными кандидатами в противовирусные препараты в первую очередь являются те, которые нацелены на основную вирусную протеазу (M ^pro ) и вирусную РНК-зависимую РНК-полимеразу (RdRp), хотя также может предполагаться прикрепление (адсорбция) вируса к клеткам-хозяевам в качестве потенциальной цели.

Ситуация с COVID-19 может в некоторой степени напоминать ранние дни СПИДа, при этом основное различие между COVID-19 и СПИДом состоит в том, что при СПИДе никогда не было перспективы эффективной вакцинации, тогда как для COVID-19, у нас слишком много либо присутствующих, либо ожидающих.

Для лечения COVID-19 имеется лишь несколько противовирусных препаратов, но мы узнали из ВИЧ-инфекции, а также туберкулеза, что можно предусмотреть комбинации лекарств, чтобы добиться синергизма, уменьшить индивидуальные дозы и снизить риск развития лекарственной устойчивости.

Конфликт интересов

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов ()…ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.

Приложение

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов ()…ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

С момента написания этой статьи (январь – февраль 2021 г.) и рецензирования сообщалось о новых потенциальных противовирусных препаратах для лечения COVID-19, таких как: (1) AT-511, объявленный как «свободная базовая форма» АТ-527 ⁶⁰ , но в основном такое же соединение, как описано Berliba et al . ⁶¹ ; (2) PF-07304814 и PF-00835231 (ингибиторы протеазы SARS-CoV-2 3CL) ⁶² ; и (3) ALG-09711 ⁶³ , который будет напрямую ингибировать ингибитор протеазы SARS-CoV-2 3CL, и K777 ⁶⁴ , который будет делать это косвенно ( через ингибирование катепсина L).

Благодарности

Перейти >>В началоВведениеЦели для антивирусных препаратов ()…ЗаключениеКонфликты интересовДополнениеБлагодарностиСсылкиБиография

Это исследование не получило специального финансирования.

Каталожные номера

[1] De Clercq, E. (2006) Потенциальные противовирусные препараты и противовирусные стратегии против коронавирусной инфекции SARS. Expert Rev. Anti Infect. тер. 4 , 291–302.
| Потенциальные противовирусные препараты и противовирусные стратегии против коронавирусной инфекции SARS.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 16597209PubMed |

[2] Ли, Г. и Де Клерк, Э. (2020) Варианты терапии нового коронавируса 2019 года (2019-nCoV). Нац. Преподобный Друг Дисков. 19 , 149–150.
| Варианты лечения нового коронавируса 2019 года (2019-nCoV).Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32127666PubMed |

[3] Айзекс А. и Линденманн Дж. (1957) Вирусное вмешательство. I. Интерферон. Проц. Р. Соц. Лонд. Б биол. науч. 147 , 258–267.
| Вирусное вмешательство. I. Интерферон.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 13465720PubMed |

[4] Сидвелл, Р. В. и др. (1972) Противовирусная активность широкого спектра действия Виразола: 1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид. Наука 177 , 705–706.
| Противовирусная активность широкого спектра действия виразола: 1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 4340949PubMed |

[5] McCormick, JB et al. (1986) Лихорадка Ласса. Эффективная терапия рибавирином. Н. англ. Дж. Мед. 314 , 20–26.
| Лихорадка Ласса. Эффективная терапия рибавирином.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 3^2PubMed |

[6] Стритер, Д.Г. и др. (1973) Механизм действия 1-β-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамида (Виразола), нового противовирусного средства широкого спектра действия. Проц. Натл. акад. науч. США 70 , 1174–1178.
| Механизм действия 1-β-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамида (виразола), нового противовирусного средства широкого спектра действия.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 4197928ПубМед |

[7] Поттер, CW и др. (1976) Противовирусное, иммунодепрессивное и противоопухолевое действие рибавирина. Природа 259 , 496–497.
| Противовирусное, иммунодепрессивное и противоопухолевое действие рибавирина.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 1256547PubMed |

[8] Ван, М. и др. (2020) Ремдесивир и хлорохин эффективно ингибируют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro . Сотовые Res. 30 , 269–271.
| Ремдесивир и хлорохин эффективно ингибируют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro .Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32020029PubMed |

[9] Лю, Дж. и др. (2020) Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно ингибирует инфекцию SARS-CoV-2 in vitro . Сотовый Дисков. 6 , 16.
| Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно ингибирует инфекцию SARS-CoV-2 in vitro .Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 33731711PubMed |

[10] Yao, X. и др. (2020) Противовирусная активность in vitro и прогноз оптимизированной схемы дозирования гидроксихлорохина для лечения тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2). клин. Заразить. Дис. 71 , 732–739.
| Противовирусная активность in vitro и прогноз оптимизированной схемы дозирования гидроксихлорохина для лечения тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2).Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32150618PubMed |

[11] Хоффманн, М. и др. (2020) Хлорохин не ингибирует заражение клеток легких человека вирусом SARS-CoV-2. Природа 585 , 588–590.
| Хлорохин не ингибирует инфицирование клеток легких человека SARS-CoV-2.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32698190PubMed |

[12] Каптейн, С.Дж.Ф. и др. (2020) Фавипиравир в высоких дозах обладает мощной противовирусной активностью у хомяков, инфицированных SARS-CoV-2, тогда как гидроксихлорохин не обладает активностью. Проц. Натл. акад. науч. США 117 , 26955–26965.
| Фавипиравир в высоких дозах обладает мощной противовирусной активностью у хомяков, инфицированных SARS-CoV-2, тогда как гидроксихлорохин не обладает активностью. Академия GoogleАкадемия Google |

[13] Де Клерк, Э. (1979) Сурамин: мощный ингибитор обратной транскриптазы РНК опухолевых вирусов. Рак Летт. 8 , 9–22.
| Сурамин: мощный ингибитор обратной транскриптазы РНК-опухолевых вирусов.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google |

[14] Мицуя, Х. и др. (1984) Сурамин защищает Т-клетки in vitro от инфекционного и цитопатического действия HTLV-III. Наука 226 , 172–174.
| Сурамин защищает Т-клетки in vitro от инфекционного и цитопатического действия HTLV-III.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 60
PubMed |

[15] Бродер, С. и др. (1985) Влияние сурамина на инфекцию HTLV-III/LAV, проявляющуюся саркомой Капоши или комплексом, связанным со СПИДом: клиническая фармакология и подавление репликации вируса in vivo . Ланцет 326 , 627–630.
| Влияние сурамина на инфекцию HTLV-III/LAV, проявляющуюся саркомой Капоши или СПИД-ассоциированным комплексом: клиническая фармакология и подавление репликации вируса in vivo .Crossref | Академия GoogleАкадемия Google |

[16] Witvrouw, M. and De Clercq, E. (1997) Сульфатированные полисахариды, извлеченные из морских водорослей, в качестве потенциальных противовирусных препаратов. Ген. Фармакол. 29 , 497–511.
| Сульфатированные полисахариды, извлеченные из морских водорослей, в качестве потенциальных противовирусных препаратов.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google |

94PubMed |

[17] Чу, К.М. и др. (2004) Роль лопинавира/ритонавира в лечении атипичной пневмонии: первоначальные вирусологические и клинические данные. Грудная клетка 59 , 252–256.
| Роль лопинавира/ритонавира в лечении атипичной пневмонии: первоначальные вирусологические и клинические данные. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 14985565PubMed |

[18] Чен, Ф. и др. (2004) In vitro чувствительность 10 клинических изолятов коронавируса SARS к избранным противовирусным соединениям. Дж. Клин. Вирол. 31 , 69–75.
| In vitro чувствительность 10 клинических изолятов коронавируса SARS к избранным противовирусным соединениям.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 15288617PubMed |

[19] Ву, С.Ю. и др. (2004) Небольшие молекулы, нацеленные на коронавирус человека с тяжелым острым респираторным синдромом. Проц. Натл. акад. науч. США 101 , 10012–10017.
| Небольшие молекулы, нацеленные на коронавирус человека с тяжелым острым респираторным синдромом. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 15226499PubMed |

[20] Цао, Б. и др. (2020) Испытание лопинавира-ритонавира у взрослых, госпитализированных с тяжелой формой Covid-19. Н. англ. Дж. Мед. 382 , 1787–1799 гг.
| Испытание лопинавира-ритонавира у взрослых, госпитализированных с тяжелой формой Covid-19.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32187464PubMed |

[21] Ананд, К. и др. (2003) Структура основной протеиназы коронавируса (3CLpro): основа для разработки препаратов против ОРВИ. Наука 300 , 1763–1767.
| Структура основной протеиназы коронавируса (3CLpro): основа для разработки препаратов против атипичной пневмонии.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 12746549ПабМед |

[22] Чжан, Л. и др. (2020) Кристаллическая структура основной протеазы SARS-CoV-2 обеспечивает основу для разработки улучшенных ингибиторов α-кетоамида. Наука 368 , 409–412.
| Кристаллическая структура основной протеазы SARS-CoV-2 обеспечивает основу для разработки улучшенных ингибиторов α-кетоамида. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32198291PubMed |

[23] Чжан, Л. и др. (2020) α-Кетоамиды как ингибиторы репликации коронавируса и энтеровирусов широкого спектра действия: структурный дизайн, синтез и оценка активности. J. Med. хим. 63 , 4562–4578.
| α-Кетоамиды как ингибиторы репликации коронавируса и энтеровирусов широкого спектра действия: структурный дизайн, синтез и оценка активности. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32045235PubMed |

[24] Дай, В. и др. (2020) Структурный дизайн потенциальных противовирусных препаратов, нацеленных на основную протеазу SARS-CoV-2. Наука 368 , 1331–1335.
| Основанный на структуре дизайн потенциальных противовирусных препаратов, нацеленных на основную протеазу SARS-CoV-2. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32321856PubMed |

[25] Ратнаяке, г. н.э., и др. (2020) Ингибиторы 3C-подобной протеазы блокируют репликацию коронавируса in vitro и улучшают выживаемость мышей, инфицированных MERS-CoV. наук. Перевод Мед. 12 , eabc5332.
| Ингибиторы 3C-подобной протеазы блокируют репликацию коронавируса in vitro и улучшают выживаемость мышей, инфицированных MERS-CoV.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32747425PubMed |

[26] Хаттори, С.И. и др. (2020) GRL-0920, индолхлорпиридиниловый эфир, полностью блокирует инфекцию SARS-CoV-2. МБио 11 , e01833-20.
| GRL-0920, индолхлорпиридиниловый эфир, полностью блокирует инфекцию SARS-CoV-2. Академия GoogleАкадемия Google | 32820005PubMed |

[27] Кирхдорфер, Р.Н. и Уорд, А.Б. (2019) Структура полимеразы nsp12 SARS-CoV, связанной с кофакторами nsp7 и nsp8. Нац. коммун. 10 , 2342.
| Структура полимеразы nsp12 SARS-CoV, связанной с кофакторами nsp7 и nsp8. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 31138817PubMed |

[28] Чиен, М. и др. (2020) Аналоги нуклеотидов как ингибиторы полимеразы SARS-CoV-2, ключевой мишени для лекарств от COVID-19. J. Proteome Res. 19 , 4690–4697.
| Аналоги нуклеотидов как ингибиторы полимеразы SARS-CoV-2, ключевой мишени для лекарств от COVID-19.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 326ПубМед |

[29] Ju, J. и др. (2020) Аналоги нуклеотидов как ингибиторы полимеразы SARS-CoV. Фармакол. Рез. Перспектива. 8 , e00674.
| Аналоги нуклеотидов как ингибиторы полимеразы SARS-CoV. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 33124786PubMed |

[30] Jockusch S.et al2020 Трифосфаты двух компонентов DESCOVY и TRUVADA являются ингибиторами полимеразы SARS-CoV-2.bioRxiv2020.04.03.022939

10.1101/2020.04.03.022939

[31] Эльфикий, А.А. (2020) Рибавирин, ремдесивир, софосбувир, галидесивир и тенофовир против РНК-зависимой РНК-полимеразы SARS-CoV-2 (RdRp): исследование молекулярной стыковки. Науки о жизни. 253 , 117592.
| Рибавирин, ремдесивир, софосбувир, галидесивир и тенофовир против РНК-зависимой РНК-полимеразы SARS-CoV-2 (RdRp): исследование молекулярной стыковки.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32222463PubMed |

[32] Де Клерк, Э. (2020) Письмо в редакцию. Науки о жизни. 252 , 117714.
| Письмо в редакцию.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32334012PubMed |

[33] Джокуш, С. и др. (2020) Библиотека аналогов нуклеотидов терминирует синтез РНК, катализируемый полимеразами коронавирусов, вызывающих SARS и COVID-19. Противовирусный рез. 180 , 104857.
| Библиотека аналогов нуклеотидов терминирует синтез РНК, катализируемый полимеразами коронавирусов, вызывающих SARS и COVID-19..Перекрестная ссылка | Академия GoogleАкадемия Google | 32562705PubMed |

[34] De Clercq, E. (2019) Новые аналоги нуклеозидов для лечения вирусных инфекций геморрагической лихорадки. Хим. Азиатский J. 14 , 3962–3968.
| Новые аналоги нуклеозидов для лечения инфекций, вызванных вирусом геморрагической лихорадки.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 31389664PubMed |

[35] Ду, Ю.Х. и Чен, Х.П. (2020) Фавипиравир: фармакокинетика и опасения по поводу клинических испытаний в 2019 г.-nCoV инфекция. клин. Фармакол. тер. 108 , 242–247.
| Фавипиравир: фармакокинетика и опасения по поводу клинических испытаний инфекции 2019-nCoV. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32246834PubMed |

[36] Рейнард, О. и др. (2015) Идентификация нового рибонуклеозидного ингибитора репликации вируса Эбола. Вирусы 7 , 6233–6240.
| Идентификация нового рибонуклеозидного ингибитора репликации вируса Эбола.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 26633464PubMed |

[37] Уракова, Н. и др. (2018) β-d- N 4-гидроксицитидин является мощным анти-альфавирусным соединением, вызывающим высокий уровень мутаций в вирусном геноме. Дж. Вирол. 92 , e01965-17.
| β-d- N ⁴ -гидроксицитидин является мощным соединением против альфавируса, вызывающим высокий уровень мутаций в вирусном геноме.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 29899097PubMed |

[38] Юн, Дж.Дж. и др. (2018) Перорально эффективный аналог рибонуклеозида широкого спектра действия, ингибитор гриппа и респираторно-синцитиальных вирусов. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62 , e00766-18.
| Перорально эффективный аналог рибонуклеозида широкого спектра действия, ингибитор гриппа и респираторно-синцитиальных вирусов.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 298

PubMed |

[39] Агостини, М.Л. и др. (2019) Низкомолекулярный противовирусный β-d- N 4-гидроксицитидин ингибирует интактный для корректуры коронавирус с высоким генетическим барьером устойчивости. Дж. Вирол. 93 , e01348-19.
| Низкомолекулярный противовирусный β-d- N ⁴ -гидроксицитидин ингибирует интактный коронавирус с высоким генетическим барьером устойчивости.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 31578288PubMed |

[40] Тутс, М. и др. (2019) Характеристика перорально эффективного противогриппозного препарата с высоким барьером резистентности у хорьков и эпителия дыхательных путей человека. наук. Перевод Мед. 11 , eaax5866.
| Характеристика перорально эффективного противогриппозного препарата с высоким барьером резистентности у хорьков и эпителия дыхательных путей человека.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 31645453PubMed |

[41] Шихан, Т.П. и др. (2020) Пероральный биодоступный противовирусный препарат широкого спектра действия ингибирует SARS-CoV-2 в культурах эпителиальных клеток дыхательных путей человека и несколько коронавирусов у мышей. наук. Перевод Мед. 12 , eabb5883.
| Пероральный биодоступный противовирусный препарат широкого спектра действия ингибирует SARS-CoV-2 в культурах эпителиальных клеток дыхательных путей человека и множественные коронавирусы у мышей.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32253226PubMed |

[42] Ян, В.К. и Мюллер, Ф.Л. (2020) Преимущества исходного нуклеозида GS-441524 по сравнению с ремдесивиром для лечения Covid-19. АКС Мед. хим. лат. 11 , 1361–1366.
| Преимущества исходного нуклеозида GS-441524 перед ремдесивиром при Covid-19обработка.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32665809PubMed |

[43] Чо, А. и др. (2012) Синтез и противовирусная активность ряда 1′-замещенных 4-аза-7,9-дидеазааденозин С-нуклеозидов. Биоорг. Мед. хим. лат. 22 , 2705–2707.
| Синтез и противовирусная активность ряда 1′-замещенных 4-аза-7,9-дидеазааденозина C-нуклеозидов. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 22446091ПубМед |

[44] Шихан, Т.П. и др. (2017) Противовирусный препарат широкого спектра действия GS-5734 ингибирует как эпидемические, так и зоонозные коронавирусы. наук. Перевод Мед. 9 , eaal3653.
| Противовирусный препарат широкого спектра действия GS-5734 ингибирует как эпидемические, так и зоонозные коронавирусы. Академия GoogleАкадемия Google | 28659436PubMed |

[45] Браун, А.Дж. и др. (2019) Противовирусный препарат широкого спектра действия ремдесивир ингибирует эндемические и зоонозные дельтакоронавирусы человека с помощью сильно дивергентной РНК-зависимой РНК-полимеразы. Противовирусный рез. 169 , 104541.
| Противовирусный препарат широкого спектра действия ремдесивир ингибирует эндемические и зоонозные дельтакоронавирусы человека с помощью сильно отличающейся РНК-зависимой РНК-полимеразы. Академия GoogleАкадемия Google | 31233808PubMed |

[46] Гао, Ю. и др. (2020) Структура РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса COVID-19. Наука 368 , 779–782.
| Структура РНК-зависимой РНК-полимеразы COVID-19вирус.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32277040PubMed |

[47] Гордон, CJ и др. (2020) Ремдесивир представляет собой противовирусный препарат прямого действия, который ингибирует РНК-зависимую РНК-полимеразу коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома с высокой эффективностью. J. Biol. хим. 295 , 6785–6797.
| Ремдесивир — это противовирусный препарат прямого действия, который с высокой эффективностью ингибирует РНК-зависимую РНК-полимеразу коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома. Академия GoogleАкадемия Google | 32284326PubMed |

[48] Агостини, М.Л. и др. (2018) Чувствительность коронавируса к противовирусному ремдесивиру (GS-5734) опосредована вирусной полимеразой и корректирующей экзорибонуклеазой. МБио 9 , e00221-18.
| Чувствительность коронавируса к противовирусному ремдесивиру (GS-5734) опосредована вирусной полимеразой и корректирующей экзорибонуклеазой.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 2

76PubMed |

[49] Шеннон, А. и др. (2020) Ремдесивир и SARS-CoV-2: структурные требования к активным сайтам экзонуклеазы nsp12 RdRp и nsp14. Противовирусный рез. 178 , 104793.
| Ремдесивир и SARS-CoV-2: структурные требования к активным сайтам экзонуклеазы nsp12 RdRp и nsp14. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32283108PubMed |

[50] де Вит, Е. и др. (2020) Профилактическое и терапевтическое лечение ремдесивиром (GS-5734) на модели инфекции MERS-CoV у макак-резусов. Проц. Натл. акад. науч. США 117 , 6771–6776.
| Профилактическое и терапевтическое лечение ремдесивиром (GS-5734) на модели макаки-резус с инфекцией MERS-CoV. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32054787PubMed |

[51] Уильямсон, Б.Н. и др. (2020) Клинические преимущества ремдесивира у макак-резусов, инфицированных SARS-CoV-2. Природа 585 , 273–276.
| Клиническая польза ремдесивира у макак-резусов, инфицированных SARS-CoV-2.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32516797ПубМед |

[52] Грейн, Дж. и др. (2020) Сострадательное использование ремдесивира для пациентов с тяжелой формой Covid-19. Н. англ. Дж. Мед. 382 , 2327–2336.
| Сострадательное использование ремдесивира для пациентов с тяжелой формой Covid-19.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32275812PubMed |

[53] Ван, Ю. и др. (2020) Ремдесивир у взрослых с тяжелой формой COVID-19: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое многоцентровое исследование. Ланцет 395 , 1569–1578.
| Ремдесивир у взрослых с тяжелым течением COVID-19: рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое, многоцентровое исследование. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32423584PubMed |

[54] Бейгель, Дж.Х. и др. (2020) Ремдесивир для лечения Covid-19 – окончательный отчет. Н. англ. Дж. Мед. 383 , 1813–1826 гг.
| Ремдесивир для лечения Covid-19 – окончательный отчет.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32445440PubMed |

[55] Goldman, JD et al. (2020) Ремдесивир в течение 5 или 10 дней у пациентов с тяжелой формой Covid-19. Н. англ. Дж. Мед. 383 , 1827–1837 гг.
| Ремдесивир в течение 5 или 10 дней у пациентов с тяжелой формой Covid-19.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32459919PubMed |

[56] Спиннер, К.Д. и др. (2020) Влияние Ремдесивира по сравнению со стандартным лечением на клиническое состояние через 11 дней у пациентов с COVID-19 средней степени тяжести: рандомизированное клиническое исследование. JAMA 324 , 1048–1057.
| Влияние Ремдесивира по сравнению со стандартным лечением на клиническое состояние через 11 дней у пациентов с COVID-19 средней степени тяжести: рандомизированное клиническое исследование. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 32821939PubMed |

[57] Даль-Ре, Р. и др. (2021) Ремдесивир для лечения COVID-19 в Европе: обеспечит ли он соотношение цены и качества? Ланцет Респир. Мед. 9 , 127–128.
| Ремдесивир для COVID-19в Европе: будет ли это соотношение цены и качества?Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 33341157PubMed |

[58] De Clercq, E. (2016) C-нуклеозиды, подлежащие пересмотру. J. Med. хим. 59 , 2301–2311.
| С-нуклеозиды будут пересмотрены.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 26513594PubMed |

[59] Descamps, J. and De Clercq, E. (1978) Противовирусная активность широкого спектра действия пиразофурина (пиразомицина). In Текущие материалы по химиотерапии 10-го Международного конгресса по химиотерапии (Зигенталер, В., Люти, Р., ред.), 18–23 сентября 1977 г., Цюрих, Швейцария. п. 354. Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии.

[60] Good S.S.et al2020 AT-527 является мощным ингибитором репликации in vitro SARS-CoV-2, вируса, ответственного за пандемию COVID-19.bioRxiv2020.08.11.242834.

[61] Berliba, E. и др. (2019) Безопасность, фармакокинетика и противовирусная активность АТ-527, нового пролекарства на основе пуриновых нуклеотидов, у пациентов, инфицированных ВГС, с циррозом печени и без него. Антимикроб. Агенты Чемотер. 63 , e01201-19.
| Безопасность, фармакокинетика и противовирусная активность AT-527, нового пролекарства на основе пуриновых нуклеотидов, у пациентов, инфицированных ВГС, с циррозом печени и без него. Crossref | Академия GoogleАкадемия Google |

[62] Хоффман, Р. Л. и др. (2020) Открытие ковалентных ингибиторов протеаз коронавируса 3CL на основе кетона для потенциального терапевтического лечения COVID-19. J. Med. хим. 63 , 12725–12747.
| Открытие ковалентных ингибиторов протеаз коронавируса 3CL на основе кетона для потенциального терапевтического лечения COVID-19.Crossref | Академия GoogleАкадемия Google | 33054210PubMed |

[63] Vandyck K. et al2021 ALG-097111, мощный и селективный ингибитор 3-химотрипсиноподобной цистеиновой протеазы SARS-CoV-2, проявляет эффективность in vivo на сирийском хомяке model.bioRxiv2021.02.14.431129.

[64] Mellott D. et al2020 Ингибитор цистеиновой протеазы блокирует инфекцию SARS-CoV-2 в клетках человека и обезьяны.bioRxiv2020.10.23.347534

10.1101/2020.10.23.347534

Биография

Эрик Де Клерк , доктор медицинских наук, почетный профессор KU Leuven (Бельгия) и с 2007 года (по настоящее время) преподает курс «Химия на службе Медицина» на факультете естественных наук Южночешского университета (Ческе-Будеёвице, Чехия) по совместной программе с Университетом Кепплер (Линц, Австрия). В 2010 году вместе с доктором Энтони С. Фаучи он получил премию доктора Пола Янссена за биомедицинские исследования. Он (совместно) открыл ряд противовирусных препаратов, используемых в настоящее время для лечения ВПГ (валацикловир), ВВО (бривудин), ЦМВ (цидофовир), ВГВ [адефовира дипивоксил, тенофовира дизопроксилфумарат (TDF) и тенофовира алафенамид (TAF)]. и ВИЧ-инфекции (TDF, TAF). Комбинация TDF с эмтрицитабином (Truvada ^® ) был одобрен во всем мире для доконтактной профилактики (ДКП) ВИЧ-инфекции.

Абстрактный PDF (438 КБ) Экспорт цитирования Процитировано (1)

Просмотр размеров

Европа PMC

Биомакромолекулы. Авторская рукопись; доступно в PMC 2012 12 декабря.

Опубликовано в окончательной редакции как:

Биомакромолекулы. 2011 12 декабря; 12(12): 4373–4385.

Published online 2011 Nov 16. doi: 10.1021/bm201360v

PMCID: PMC3237717

NIHMSID: NIHMS339213

PMID: 22082257

, ^{1, #} , ^{1, #} , ¹ , ² и ^{1, *}

Информация об авторе Информация об авторских правах и лицензии Отказ от ответственности

Связанные данные

Дополнительные материалы

Поли(2-аминоэтилметакрилат) (ПАЭМ) гомополимеры с определенной длиной цепи и узким распределением молекулярной массы были синтезированы с использованием радикальной полимеризации с переносом атома (ATRP), и было проведено всестороннее исследование для оценить коллоидные свойства полиплексов PAEM/плазмидной ДНК, поглощение и субклеточный перенос полиплексов в антигенпрезентирующие дендритные клетки (DC) и биологические характеристики PAEM в качестве потенциального носителя ДНК-вакцины. PAEM с разной длиной цепи (45, 75 и 150 повторяющихся звеньев) показал различную силу в конденсации плазмидной ДНК в узкодисперсные наночастицы с очень низкой цитотоксичностью. Более длинная полимерная цепь приводила к более высоким уровням общего клеточного и ядерного поглощения плазмидной ДНК, но более короткие полимерные цепи способствовали внутриклеточному и внутриядерному высвобождению свободной плазмиды из полиплексов. Несмотря на свою простую химическую структуру, PAEM очень эффективно трансфицировал ДК in vitro в среде с сывороткой или без нее и приводил к фенотипическому созреванию ДК. Когда использовали модельную антиген-кодирующую плазмиду овальбумина, трансфицированные ДК стимулировали активацию наивного CD8 ⁺ Т-клеток для производства высоких уровней интерферона-γ. Эффективность трансфекции, созревание ДК и активация Т-клеток CD8 ⁺ показали различную степень зависимости от длины полимерной цепи. Эти структурно определенные катионные полимеры могут иметь большой потенциал в качестве эффективных носителей ДНК-вакцин и иммуностимулирующих адъювантов. Они также могут служить в качестве системы модельного материала для выяснения структурных и внутриклеточных механизмов доставки полимер-опосредованной ДНК-вакцины.

В последние годы ДНК-вакцины продемонстрировали значительные перспективы для многочисленных медицинских вмешательств — от профилактических вакцин, нацеленных на вирусные, бактериальные или паразитарные инфекции, до потенциальных терапевтических средств для лечения инфекционных заболеваний, рака и аутоиммунных заболеваний ¹ . ДНК-вакцинация имеет преимущества перед обычными вакцинами из-за ее простоты, гибкости и безопасности. Плазмидная ДНК, кодирующая представляющий интерес белковый антиген, является основным компонентом состава ДНК-вакцины. В идеале, антигенпрезентирующие клетки (АПК), трансфицированные ДНК-вакциной, должны эндогенно экспрессировать кодируемый антиген, процессировать и презентировать антигенные пептидные фрагменты через молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС), что приводит к генерации антиген-специфических иммунных ответов. Наиболее важные АПК, дендритные клетки (ДК) ² широко считаются идеальными клетками-мишенями для ДНК-вакцин. Ожидается, что устойчивая презентация антигена из DC в сочетании с созреванием DC будет генерировать надежный адаптивный клеточный иммунитет, который особенно необходим для борьбы с раком и вирусной инфекцией ³ .

Для доставки генов было разработано большое количество катионных полимеров с разнообразными структурами и свойствами ^4–6 , некоторые из которых были оценены для доставки ДНК-вакцины ⁷ . Несмотря на большие усилия в прошлом, проектирование полимеров в качестве носителей ДНК-вакцин было затруднено из-за огромного количества возможных комбинаций физико-химических переменных и сложной биологической/иммунологической среды, в которой используются носители. В течение многих лет было показано, что молекулярная масса или длина цепи полимеров оказывает существенное влияние на доставку ДНК. Взаимосвязь между молекулярной массой полимера и эффективностью трансфекции была изучена на многих полимерах, таких как разветвленный полиэтиленимин (PEI) ⁸ , поли(2-диметиламиноэтилметакрилат) (PDMAEMA) ⁹ , клик-полимеры трегалозы и олигоэтиленамина ¹⁰ и полифосфорамидат (PPA) ¹¹ , и это лишь некоторые из них. Как правило, увеличение молекулярной массы увеличивает экспрессию генов. Однако существуют некоторые расхождения ^{8, 12,13} , и фундаментальное понимание влияния линейной длины поликатионной цепи на процесс переноса генов, особенно в контексте доставки ДНК-вакцины в иммунные клетки, остается неуловимым.

Методы контролируемой полимеризации, такие как радикальная полимеризация с переносом атома (ATRP) ^14,15 , позволяют простым способом получать катионные полимеры с определенной длиной цепи. Недавно мы синтезировали диблок-сополимеры полиэтиленгликоль- блок -поли(2-аминоэтилметакрилат) (ПЭГ- b -ПАЭМ) с узким молекулярно-массовым распределением с помощью ATRP и показали, что длина катионного блока оказывает существенное влияние на как полимерный носитель взаимодействует с плазмидной ДНК и как полиплексы взаимодействуют с ДК ¹⁶ . Хотя диблок-сополимеры PEG-b -PAEM являются полезными модельными системами, они обладают низкой эффективностью экспрессии трансгена в ДК, что является существенным недостатком, который ограничивает их практическое использование в ДНК-вакцинации.

В этом исследовании мы сосредоточились на гомополимерах поли(2-аминоэтилметакрилата) (ПАЭМ) с определенной длиной цепи и узким молекулярно-массовым распределением. Мы всесторонне исследовали коллоидные свойства полиплексов PAEM/плазмиды (включая стабильность, размер частиц и заряд), поглощение и внутриклеточный перенос ДК, а также биологические/иммунологические свойства in vitro (включая цитотоксичность, эффективность трансфекции, созревание ДК и активацию наивных клеток). CD8 ⁺ Т-клетки для производства интерферона-γ), с целью дальнейшего выяснения влияния длины полимерной цепи на доставку ДНК в DC и для оценки практической ценности PAEM в качестве носителя ДНК-вакцины и иммуностимулирующего адъюванта.

Материалы

Толуол (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) высушивали при кипячении с обратным холодильником над натрием и перегоняли. N -( трет -бутоксикарбонил)аминоэтилметакрилат ( t BAM) синтезировали, как описано ¹⁷ . Этил-α-бромизобутират, хлорид меди (I) (CuCl) и 2,2′-дипиридил (bPy) были приобретены у Sigma-Aldrich. 3-[4,5-Диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид (MTT), фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS), модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM), эмбриональную бычью сыворотку (FBS) и трипсин. приобретен у Invitrogen (Карлсбад, Калифорния). Мышиные клетки DC 2.4 (АТСС, Манассас, Вирджиния) инкубировали в среде DMEM, содержащей 10% FBS, 10 мМ HEPES, 100 ЕД/мл пенициллина/стрептомицина, при 37°C и во влажной атмосфере, содержащей 5% CO 9 .4123 2 . В различных экспериментах использовали три разные ДНК-плазмиды: (1) плазмиду с зеленым флуоресцентным белком (pEGFP-N1), используемую для оценки свойств полиплекса и трансфекции генов; (2) плазмида люциферазы светлячка (pCMV-Luc), используемая в исследованиях клеточного поглощения и внутриклеточного переноса, а также в качестве отрицательного контроля в экспериментах по трансфекции; (3) плазмида куриного овальбумина (pCMV-OVA), используемая в экспериментах по созреванию DC и активации Т-клеток CD8 ⁺ . Все три плазмиды содержали промотор CMV. Другие химикаты и растворители были приобретены у Sigma-Aldrich и использовались без дополнительной очистки.

Синтез поли(2-аминоэтилметакрилата) (PAEM)

ATRP t BAM следовал процедуре, модифицированной Tang et al. ¹⁶ . В стеклянную двугорлую колбу загружали т БАМ, CuCl, bPy и трижды дегазировали систему. Добавляли высушенный дегазированный толуол и этил α-бромизобутират в качестве инициатора и смесь нагревали при 80°C в течение 8 часов. Реакцию останавливали, подвергая систему воздействию воздуха. Затем реакционный раствор разбавляли дихлорметаном и пропускали через колонку с основным оксидом алюминия для удаления комплекса меди. Продукт дважды осаждали гексаном и сушили в вакууме при комнатной температуре в течение 2 сут. Для получения P 9 использовали три различных соотношения подачи мономера к инициатору (50:1, 100:1, 200:1).5169 т гомополимеров БАМ с различной длиной цепи. Для удаления Boc-групп 0,8 г P t BAM растворяли в 5 мл трифторуксусной кислоты (TFA) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем ТФУ удаляли выпариванием, а масляный остаток трижды промывали диэтиловым эфиром. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием, дважды промывали диэтиловым эфиром и сушили в течение ночи в вакууме. Затем полимеры промывали водным раствором NaOH при pH 9,0 и подвергали диализу (MWCO 3500) против дистиллированной деионизированной воды в течение 3 дней. Конечные полимеры ПАЭМ получали лиофилизацией.

Характеристика полимеров

Спектры ЯМР ¹ H и ¹³ C полимеров получены на спектрометре Varian Unity (300 МГц) с использованием CDCl ₃ (для P t BAM12) и D 9 O (для ПАЭМ) в качестве растворителей. Химические сдвиги регистрировали в м.д. и относили к тетраметилсилану (ТМС) и D ₂ O соответственно. Эксперименты по гель-проникающей хроматографии (ГПХ) для анализа P t BAM проводили при 35°C в CHCl ₃ со скоростью потока 1 мл/мин с использованием жидкостной хроматографии Hewlett-Packard серии 1100, оснащенной тремя колонками смешанного типа PL gel 5 мкм (колонки Jordi Gel с размерами пор 500, 103 и 104 Å) и Детектор показателя преломления Packard 1047A. Прибор для ГПХ калибровали по полистирольным стандартам (Polymer Laboratories, Амхерст, Массачусетс). Все растворы образцов перед анализом фильтровали через фильтр 0,22 мкм.

Анализ замедления геля

Полиплексы с соотношением N:P в диапазоне от 1/8 до 16 получали добавлением 25 мкл раствора полимера в 20 мМ HEPES (pH 7,4) к 25 мкл раствора плазмиды ДНК (0,2 мкг/мкл в 20 мМ HEPES, pH 7,4) встряхивали в течение 10 с, инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре и анализировали электрофорезом на 1,0% агарозном геле, содержащем 0,5 мкг/мл бромистого этидия.

Анализ конкуренции с гепарином

Для определения силы связывания ДНК полимерами с различной длиной цепи полиплексы с соотношением N:P, равным 8, инкубировали с возрастающими концентрациями гепарина (от 0,1 до 0,9 МЕ на мкг ДНК) в течение 20 мин. при комнатной температуре и анализируют электрофорезом в агарозном геле.

Исключение бромистого этидия (ЭБ)

Растворы полимеров добавляли к предварительно смешанным растворам ЭБ и плазмиды с различными соотношениями N:P от 1/8 до 32 и инкубировали в течение 30 мин. Интенсивность флуоресценции ЭТ регистрировали с помощью считывателя планшетов Bio-Tek Synergy HT с длиной волны возбуждения 530/25 нм и длиной волны испускания 59 нм.0/35 нм. В качестве контроля использовали раствор ДНК/ЭБ без какого-либо полимера.

Динамическое рассеяние света (DLS) и измерение дзета-потенциала

Средний гидродинамический диаметр и индекс полидисперсности полиплексов в буфере HEPES (20 мМ) при 25°C определяли с использованием анализатора частиц ZetaPlus (Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY; лазер мощностью 27 мВт, падающий пучок 658 нм, угол рассеяния 90°). Полиплексы с соотношением N:P в диапазоне от 1/4 до 32 готовили, как описано выше, и разбавляли в 20 раз до конечного объема 2 мл в буфере HEPES перед измерением. Одновременно определяли дзета-потенциал полиплексов с использованием модуля ZetaPal анализатора частиц.

Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ)

Морфологию и размер полиплексов при соотношении N:P, равном 8, изучали с помощью просвечивающего электронного микроскопа JEOL 1200 EXII. Образцы для ТЭМ готовили путем нанесения капли раствора полиплекса на покрытые углеродом ЭМ сетки с последующим отрицательным окрашиванием фосфорно-вольфрамовой кислотой (1,0%, рН 4~5).

Анализ цитотоксичности

Цитотоксичность свободных полимеров оценивали с помощью МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид) ¹⁸ . Клетки DC 2.4 высевали в 96-луночные планшеты по 6000 клеток на лунку и культивировали с полимерами различных концентраций в течение 24 ч в среде DC 2.4 (DMEM с низким содержанием глюкозы, 10% FBS, 10 мМ HEPES, 100 ЕД/мл пенициллина/стрептомицина). при 5% CO ₂ и 37°C. В каждую лунку добавляли МТТ в PBS (5 мг/мл, 20 мкл) до конечной концентрации 0,5 мг/мл. Через 4 часа непрореагировавший МТТ удаляли аспирацией. Кристаллы формазана растворяли в 150 мкл ДМСО и измеряли оптическую плотность при 570 нм с использованием планшетного ридера Bio-Tek Synergy HT. Жизнеспособность клеток рассчитывали как [Поглощение клеток, подвергшихся воздействию полимеров]/[Поглощение клеток, культивируемых без полимеров] в процентах.

Флуоресцентное мечение полимера и плазмиды

Для исследований внутриклеточного переноса как полимеры PAEM, так и ДНК-плазмида были ковалентно помечены флуорофорами. PAEM метили сукцинимидиловым эфиром карбоновой кислоты Oregon Green 488 (Invitrogen) с использованием ранее описанного метода ¹⁹ с последующей очисткой диализом (MWCO 3500). Плазмиду ДНК метили флуорофором Cy5 с использованием набора MIRUS LabelIT (Mirus, Madison, WI) в соответствии с протоколом производителя. После реакции мечения плазмиду ДНК очищали от избытка красителя путем преципитации этанолом в соответствии с протоколом производителя. И очищенный меченый полимер PAEM, и плазмида ДНК хранились при -20°C до использования.

Клеточное поглощение и субклеточный трафик

Клетки DC 2.4 высевали в 4-луночные предметные стекла LabTek II (Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания) при плотности 100 000 клеток на лунку в 1 мл среды. Чтобы визуализировать клеточное поглощение и внутриклеточную диссоциацию полиплекса, полиплексы формировали с использованием флуоресцентно меченного PAEM и плазмиды люциферазы. Перед трансфекцией среду DC 2.4 удаляли, клетки промывали один раз теплым PBS и заменяли бессывороточной клеточной средой DC 2.4. Клетки инкубировали с полиплексами в течение 1, 4 или 24 ч при 37°С, 99% влажности и 5% CO ₂ . Для 24-часовых образцов бессывороточную среду удаляли через 4 часа, клетки дважды промывали теплым PBS и заменяли полной средой DC 2.4, содержащей 10% сыворотки, и инкубировали еще 20 часов. Перед визуализацией с помощью конфокальной микроскопии в каждую камеру добавляли Hoechst 33342 (Invitrogen) в конечной концентрации 30 мкМ для окрашивания ядер клеток, а образцы промывали и фиксировали с помощью фиксирующего буфера BD Cytofix (BD Bioscience, Сан-Хосе, Калифорния). согласно протоколу производителя. Затем ячейки были смонтированы с помощью SlowFade Gold 9.3970 © реагент против выцветания (Invitrogen), накрытый покровным стеклом и запечатанный прозрачным лаком для ногтей. Изображения клеток получали с помощью конфокального микроскопа Olympus FV-1000, оснащенного иммерсионным объективом Olympus 60x/1,42 NA (Center Valley, PA). Интенсивность флуоресценции каждого флуорофора регулировали с помощью отдельных положительных контролей с одним флуорофором и отрицательных контролей только для клеток. Метку Cy5 возбуждали при 643 нм, а определение эмиссии устанавливали при 670 нм. Hoechst 33342 возбуждали при 405 нм, а излучение регистрировали при 451 нм. Пределы визуализации (z-срезы) были установлены для сбора верхней и нижней границ клеток с размером шага 0,4 мкм и разрешением 800 пикселей. Для каждого образца собирали изображения не менее трех полей зрения.

Сенсибилизированное излучение Förster Resonance Energy Transfer (FRET) использовалось для проверки результатов диссоциации полиплекса через 24 часа, полученных с использованием метода колокализации трехмерной флуоресценции. Перед визуализацией полимеры PAEM метили Oregon Green-488, как описано выше, а плазмиду люциферазы метили Cy3 с использованием набора MIRUS LabelIT в соответствии с протоколом производителя. Трансфекцию клеток DC 2.4 проводили в соответствии с теми же процедурами, которые описаны выше. Клетки DC 2.4 также трансфицировали контролями FRET, состоящими из немеченого PAEM в комплексе с Cy3-плазмидой и меченого Oregon Green-488 PAEM в комплексе с немеченой плазмидой в отдельных индивидуальных лунках. Через 24 часа клетки промывали PBS, фиксировали BD-Cytofix в соответствии с протоколом производителя, монтировали с использованием среды против выцветания SlowFade Gold и получали флуоресцентные изображения. Три различных поля зрения были визуализированы для каждого из контрольных образцов FRET и образцов полиплекса FRET в соответствии с протоколом FRET с сенсибилизированной эмиссией Olympus.

Для определения эндолизосомной колокализации клетки DC 2.4 трансфицировали полиплексами, образованными немеченым PAEM и плазмидой люциферазы, меченной Cy5. За 30 минут до визуализации клетки окрашивали Hoechst 33342 в течение 20 минут, а затем LysoTracker Green DND-26 (Invitrogen) в конечной концентрации 100 нМ в соответствии с протоколом производителя. Затем клетки промывали PBS и заливали аскорбиновой кислотой в конечной концентрации 5 мкМ, чтобы свести к минимуму фотообесцвечивание. Флуорохром LysoTracker Green возбуждали при 488 нм, а эмиссию регистрировали при 520 нм. Все образцы хранились на льду до получения изображений. 9. Импортированные конфокальные изображения были открыты в отдельных цветовых компонентах и ​​преобразованы в 8-битные изображения. Затем из каждого изображения случайным образом выделяли отдельные клетки, используемые для анализа. Клеточное поглощение Cy5-меченой плазмиды измеряли путем индивидуальной пороговой обработки z-срезов каждой клетки и расчета общей площади пикселей в интересующей области (ROI), нарисованной вокруг клеточной мембраны. Внутриклеточную диссоциацию полиплекса количественно определяли путем измерения степени колокализации между PAEM, меченной Oregon Green 488, и плазмидой, меченной Cy5. Для каждого сложного компонента пороговое значение определялось индивидуально для каждого z-среза. Рассчитывали общую площадь пикселя сигнала Cy5-плазмиды. Колокализация двух флуорофоров измерялась как пространственное перекрытие между двумя отдельными пороговыми изображениями в единице общей площади пикселя с использованием плагина колокализации ImageJ. Процент диссоциации полиплекса определяли как единицу вычитания отношения между общей площадью пикселя, локализованной по Орегонскому зеленому/Cy5, и общей площадью пикселя Cy5. Тот же метод колокализации трехмерной флуоресценции применяли для определения процента эндолизосомной колокализации. Все изображения FRET были проанализированы и количественно оценены с использованием программного обеспечения FV-ASW 1.5 и функции сенсибилизированного излучения точности FRET (pFRET). Программное обеспечение проанализировало срединный z-срез клеток и представило изображения эмиссии образца Oregon Green-488 PAEM, эмиссии образца плазмиды Cy3 и полиплекса pFRET. Ядерную локализацию плазмиды определяли количественно, вычисляя общую площадь пикселя плазмиды Cy5 в области интереса ядерной мембраны. Геометрию ядер определяли путем наложения z-срезов на трехмерные изображения и ортогональные проекции, чтобы убедиться, что сигнал Cy5-плазмиды действительно находится в пределах границ ядра. Всего было проанализировано 30 клеток для каждой экспериментальной группы на основе коэффициента дисперсии 9. 3970 20 (дополнительная информация, рис. S1). Обратите внимание, что интенсивность флуоресценции всех изображений не регулировалась в ImageJ перед количественной оценкой.

Генная трансфекция in vitro

Клетки DC 2.4 высевали в 12-луночные планшеты по 100 000 клеток на лунку и культивировали в течение ночи. Для трансфекции в бессывороточных условиях клеточную среду удаляли и клетки дважды промывали PBS с последующим добавлением среды DC 2.4 без сыворотки. Трансфекция полиплексами плазмиды GFP длилась 4 ч при 5% СО ₂ и 37°С. Затем среду удаляли, клетки дважды промывали PBS и культивировали в средах, содержащих сыворотку, еще 20 ч до регистрации уровня GFP. Для трансфекции в средах, содержащих 10% сыворотки, клетки DC 2.4 инкубировали с полиплексами в течение 24 ч при 5% СО ₂ и 37°С. Клетки собирали обработкой трипсином-ЭДТА, диспергировали в буфере FACS (PBS, содержащем 1% бычьего сывороточного альбумина) и анализировали с использованием проточного цитометра BD LSR II. Клетки DC 2.4 также трансфицировали полиплексами плазмиды люциферазы в тех же условиях для исключения аутофлуоресценции клеток. Процент GFP ⁺ клеток определяли с помощью Flowjo. Положительные ворота GFP были нарисованы на основе контроля люциферазы, где частота ложноположительных результатов была ограничена до уровня ниже 0,2%.

Созревание DC

Клетки DC 2.4 трансфицировали полиплексами при соотношениях N:P 8 и 16, как описано выше. Через двадцать четыре часа клетки окрашивали меченым PE антителом против мышиного CD40 (Biolegend, Сан-Диего, Калифорния) и анализировали с помощью проточной цитометрии. Необработанные клетки имели незрелый фенотип (iDC, CD40 ^низкий ). Положительные зрелые DC были получены путем стимуляции 2 мкг/мл липополисахарида (LPS, из E. coli , штамм 026:B6, Sigma). Все среды для культивирования клеток, буферы, исходные растворы полимеров и исходные растворы плазмид были протестированы на отсутствие загрязнения эндотоксином с использованием набора для обнаружения эндотоксина LAL в соответствии с инструкциями производителя.

CD8

⁺ Активация Т-клеток

Наивные мыши CD8 ⁺ Т-клетки из лимфатических узлов трансгенных мышей OT-1/PL TCR выделяли, как описано ранее ²¹ . Для определения активации Т-клеток клетки DC 2.4 трансфицировали полиплексами, содержащими плазмиду OVA с сывороткой или без нее, в течение 24 ч, как описано выше. Клетки лимфатических узлов от трансгенных мышей OT-1/PL TCR добавляли в ДК так, чтобы в каждой лунке присутствовало приблизительно 3×10 ⁵ CD8 ⁺ Т-клеток. После совместного культивирования в течение 3 дней супернатант клеточной среды анализировали на IFN-γ с помощью ELISA с использованием набора Ready-Set-Go IFN-γ «Femto-HS» (e-Bioscience, Сан-Диего, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. процедура. В качестве положительного контроля iDC без трансфекции стимулировали пептидом SIINFEKL (New England Peptide, LLC., Gardner, MA) в концентрации 1 мкМ в течение 1 ч и LPS в концентрации 2 мкг/мл в течение ночи перед добавлением Т-клеток.

Статистический анализ

Статистический анализ проведен с использованием двухвыборочного t -критерия Стьюдента с неравной дисперсией. Значения p <0,05 считались статистически значимыми.

Синтез и характеристика гомополимеров PAEM

Мы выбрали простой катионный полимер PAEM в качестве модельного носителя для доставки ДНК-вакцины. Повторяющееся звено PAEM содержит первичный амин в боковой цепи (), который способен эффективно конденсировать любые анионные грузы, включая плазмидную ДНК. ПАЭМ был использован для получения сополимеров для изучения свойств мицелл полиионного комплекса с гепарином 9.3970 22 или олигодезоксинуклеотид ²³ для доставки генов в клетки COS in vitro ^{24, 25} или в качестве противомикробных агентов ¹⁷ . Недавно мы сообщили о серии четко определенных диблок-сополимеров PEG и PAEM, которые могут конденсироваться и доставлять плазмидную ДНК в клетки DC 2.4, и показали, что длина блока PAEM оказывает большое влияние на свойства полиплексов, ген эффективность трансфекции и созревание DC ¹⁶ . Однако из-за наличия ПЭГ-блока диблок-сополимеры имели довольно низкую эффективность трансфекции, что потенциально ограничивает практическое применение полимеров для ДНК-вакцинации. С этой целью здесь мы синтезировали гомополимеры PAEM с четко определенной длиной цепи и провели всестороннее исследование физико-химических свойств полиплексов, взаимодействия полиплекс/ДК, включая внутриклеточный перенос, эффективность трансфекции, фенотипическое созревание ДК и CD8 ⁺ Стимуляция Т-клеток in vitro.

(A) Химическая структура полимера PAEM. (B) Следы ГПХ P t BAM, предшественника PAEM с Boc-защищенными боковыми цепями, с использованием CHCl ₃ в качестве подвижной фазы и скорости потока 1 мл/мин. Среднюю молекулярную массу определяли на основе полистирольных стандартов.

PAEM был синтезирован с использованием ATRP, слегка модифицированного по сравнению с ранее описанным процессом ¹⁶ . На первом этапе ATRP Boc-защищенного мономера аминоэтилметакрилата ( т БМА) инициировали этиловым эфиром α-бромизобутирата с Cu(I)-дипиридильным комплексом в качестве катализатора. Мольное соотношение мономера и инициатора в сырье варьировали для получения Р t БАМ с различной длиной цепи. Три полимера P t BMA были синтезированы с конверсией мономера более 99% (определено с помощью протонного ЯМР, данные не представлены) и выходом более 70%. Кривые ГПХ показали одиночные пики (), а среднечисловая молекулярная масса ( M _n ) трех полимеров была рассчитана равной 0,9.8, 1,66 и 3,37×10 ⁴ с индексом полидисперсности (PDI) 1,19, 1,20 и 1,16 соответственно. Узкое молекулярно-массовое распределение полимеров указывало на то, что реакция ATRP прошла успешно. Анализ протонного ЯМР (не показан) подтверждает химическую структуру всех трех полимеров P t BAM. Средняя степень полимеризации (DP) P t BAM была рассчитана как 45, 75 и 150 на основе анализа ГПХ (), и поэтому три полимера были названы P .т БАМ ₄₅ , П т БАМ ₇₅ , П т БАМ ₁₅₀ соответственно. На втором этапе защитную группу Boc удаляли обработкой TFA. Анализ протонного ЯМР (не показан) подтвердил полное исчезновение сигнала метильного протона Вос-группы при 1,46 м.д., доказывая, что все Вос-группы были удалены. Конечный продукт получали удалением соли ТФУ из слабощелочного раствора с получением ПАЭМ со свободными аминами. Во время удаления ТФК рН строго контролировали, чтобы он был ниже 9.для предотвращения аминолиза группы эфира метакрилата ²⁶ . В целом, этот двухстадийный синтез обеспечивает превосходный контроль над полимеризацией, сравнимый с недавно опубликованным одностадийным синтезом PAEM ²⁶ .

Способность к связыванию и конденсации ДНК зависит от длины полимерной цепи

Анализ замедления в геле качественно выявил разницу в способности связывания ДНК между тремя полимерами PAEM. ПАЭМ ₇₅ и ПАЭМ ₁₅₀ смогли полностью предотвратить миграцию плазмидной ДНК при соотношении N:P 1 и выше. Однако при таком нейтральном соотношении зарядов PAEM ₄₅ мог только частично затормозить миграцию ДНК и достичь полного замедления при соотношении N:P, равном 2 (+). Эксперимент по исключению EB дал более количественную оценку способности PAEM к конденсации ДНК. По мере того, как длина цепи полимеров увеличивалась с DP от 45 до 150, соответственно возрастала способность конденсировать плазмидную ДНК, судя по снижению отношения N:P, при котором половина EB вытеснялась из-за интеркалирования с ДНК, что приводило к снижению флуоресценции. интенсивность ().

Способность к связыванию и конденсации ДНК полимерами PAEM с различной длиной цепи. (A) Анализ замедления гелеобразования полиплексов, приготовленных при различных соотношениях N:P. Стрелки указывают на пороговое значение отношения N:P, при котором происходит замедление миграции ДНК через гель. (B) Исключение бромистого этидия (EB) из-за образования полиплекса. Интенсивность флуоресценции ЭБ в смеси с плазмидой без добавления полимера принимали за 100%. (C) Дестабилизация полиплексов с увеличением концентрации гепарина. Стрелки указывают на пороговую концентрацию гепарина, выше которой происходит распаковка ДНК.

Стабильность полиплексов при соотношении N:P, равном 8, изучали в присутствии увеличивающегося количества гепарина, полианиона, который может конкурировать с ДНК за связывание с поликатионом, с последующим электрофорезом в агарозном геле. Как показано в , пороговая концентрация гепарина, при которой происходило разрушение полиплекса, составляла 0,4, 0,5 и 0,7 МЕ/мкг ДНК для полиплексов PAEM ₄₅ , PAEM ₇₅ и PAEM ₁₅₀ соответственно, что свидетельствует о формировании полиплексов. с более длинными цепями PAEM были более стабильны, чем с короткими. Этот вывод в целом согласуется с выводами других полидисперсных катионных полимерных носителей, таких как PDMAEM 9.3970 9 . Более того, ранее мы наблюдали подобную тенденцию в комплексах ПЭГ-b-ПАЭМ/ДНК ¹⁶ . Интересно, что полиплексы, образованные с ПЭГ-b -ПАЕМ, были более устойчивы к дестабилизации гепарином, чем полиплексы, образованные гомополимером ПАЕМ с той же длиной цепи. Например, при СП 75 пороговая концентрация гепарина составила 0,8 МЕ/мкг ДНК для диблока и 0,5 МЕ/мкг ДНК для гомополимера. Это различие, вероятно, связано со стерическими препятствиями для гепарина, создаваемыми цепями ПЭГ.

Средний размер частиц полиплексов и цитотоксичность не зависят от длины полимерной цепи

Размер наночастиц очень важен для доставки генов в целом и потенциально для нацеливания и интернализации ДК ²⁷ . DLS показал, что независимо от длины цепи PAEM средний размер частиц полиплексов в водном буфере находится в диапазоне от 100 до 200 нм и сильно зависит от соотношения N:P (12). Распределение размера каждого типа полиплекса также было довольно узким с PDI в диапазоне от 0,05 до 0,2. Максимальный размер частиц составлял около 170 нм при нейтральном отношении заряда. При уменьшении или увеличении отношения N:P размер частиц постепенно уменьшался. Между тремя полимерами PAEM с разной длиной цепи нет четкой разницы в размере частиц. Изображения ПЭМ подтвердили результаты DLS, показывая типичные сферические наночастицы на репрезентативном изображении PAEM 9. 4123 75 полиплекс с соотношением N:P 8:1 (). При соотношении N:P 8:1 полиплексы PAEM с разной длиной цепи также имели сходные значения дзета-потенциала около 35 мВ (дополнительная информация, рисунок S2). То, что гидродинамический размер полиплексов не зависит от молекулярной массы полимеров, наблюдалось в других катионных полимерных системах, таких как поли(2-метилакриловая кислота 2-[(2-(диметиламино)-этил)-метил-амино] -этиловый эфир) (pDAMA) при соотношении N:P >5 ²⁸ и клик-полимеры трегалозы при низком соотношении N:P ¹⁰ . Это явление также согласуется с нашим предыдущим сообщением о полиплексах, образованных PEG-b-PAEM и плазмидной ДНК, за исключением отношения N:P, равного 1, при котором размер частиц уменьшался с увеличением длины блока PAEM ¹⁶ .

Средний размер частиц полиплексов и цитотоксичность. (A) Средний размер частиц полиплексов в водном буфере (20 мМ HEPES, pH 7,4) в зависимости от отношения N:P, определенного с помощью DLS. (B) Типичное ПЭМ-изображение полиплексов (соотношение N:P, равное 8), показывающее дискретные конденсированные наночастицы размером ~ 100 нм. Масштабная линейка: 100 нм. (C) Цитотоксичность полимеров PAEM по отношению к клеткам DC 2.4, измеренная с помощью анализа МТТ. Жизнеспособность клеток, культивируемых без полимера, принимали за 100%. * p <0,05 по сравнению с полимерами PAEM при эквивалентных концентрациях.

Цитотоксичность полимеров PAEM оценивали с использованием мышиной линии дендритных клеток, DC 2.4. Все полимеры PAEM, независимо от длины цепи, не были токсичными для клеток DC 2.4 при таких высоких концентрациях, как 10 мкг/мл (10). Жизнеспособность клеток, определенная с помощью анализа МТТ, упала примерно до 70% при концентрации полимера 20 мкг/мл и примерно до 40% при концентрации 40 мкг/мл, но все еще была значительно менее токсична, чем разветвленный ПЭИ (25 кДа) при этих концентрациях. В целом, цитотоксичность полимеров PAEM в ДК не была чувствительна к изменениям длины полимерной цепи, аналогично тому, что наблюдалось с системой PDMAEMA 9. 3970 9 . Отмечается, что все последующие исследования внутриклеточного переноса проводились с использованием концентраций полимера, которые не были токсичными для клеток.

Более длинные цепи PAEM усиливают поглощение полиплексов клетками

Cy5-меченая люциферазная плазмида в комплексе с немеченым PAEM с различной длиной цепи при соотношении N:P, равном 8, использовалась для визуализации клеточного поглощения в клетках DC 2.4 через 1, 4 и 24 часа с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии (). Затем уровень флуоресценции Cy5-плазмиды внутри клеток был количественно определен на основе конфокальных изображений с использованием метода, описанного Akita 9.5169 и др. ²⁰ (). Конфокальные изображения показали, что клеточное поглощение плазмиды началось в течение первого часа трансфекции, при этом все три длины цепи PAEM приводили к одинаковым количествам Cy5-плазмиды внутри клеток. Через 4 часа и 24 часа количество плазмиды, поглощенной клетками, продолжало увеличиваться, и отчетливо прослеживалась зависимость от длины цепи. Количество клеточного поглощения плазмиды в комплексе с PAEM ₁₅₀ было значительно (p < 0,05) выше, чем у любого PAEM ₇₅ или PAEM ₄₅ в 4 часа. Поглощение плазмиды в комплексе с PAEM ₇₅ достигло уровня, сходного с таковым у полиплексов PAEM ₁₅₀ через 24 часа, но оба оставались значительно выше, чем у более коротких полиплексов PAEM ₄₅ (). Эти результаты показывают, что поглощение полиплексов дендритными клетками было более эффективным при использовании относительно более длинных катионных полимеров. Возможно, что более длинные катионные цепи PAEM могут образовывать более стабильные полиплексы (показано на рис.), которые могут сильнее взаимодействовать с клеточной мембраной, чем полиплексы, образованные из более коротких полимерных цепей, что облегчает интернализацию в клетки ²⁹ .

Клеточное поглощение плазмиды. (A) Репрезентативные изображения конфокальной флуоресцентной микроскопии клеток DC 2. 4, трансфицированных полиплексами (соотношение N: P 8) в различные моменты времени. Красный: плазмида, меченная Cy5. Синий: Hoechst 33342, окрашивающий ядра клеток. Показана флуоресценция, наложенная на изображения в белом свете. Масштабная линейка: 25 мкм. (B) Количественная оценка клеточного поглощения. Среднее значение ± стандартная ошибка, подсчитывали 30 клеток для каждого образца, * p <0,05.

Более короткие цепи PAEM облегчают внутриклеточную диссоциацию полиплексов

Для достижения экспрессии трансгена плазмида ДНК должна отделиться от полимерного носителя в какой-то момент после того, как она будет поглощена клетками. Здесь изображения конфокальной флуоресцентной микроскопии использовались для оценки влияния длины полимерной цепи на диссоциацию полиплекса после интернализации (), которое затем было количественно определено путем измерения пространственной колокализации сигналов флуоресценции от Cy5-меченой ДНК-плазмиды и Oregon Green 488-меченого PAEM. в разные моменты времени (). Все три длины цепи PAEM имели одинаковые уровни связанной Cy5-плазмиды (~ 75%) через 1 час. Однако с течением времени процент интактных полиплексов уменьшался, при этом самая высокая скорость диссоциации происходила с самыми короткими PAEM 9.4123 45 . Через четыре часа после трансфекции процент интактных полиплексов PAEM ₄₅ упал ниже 70%. Через 24 ч была установлена ​​четкая зависимость диссоциации полиплекса от длины цепи, при этом самый короткий PAEM ₄₅ имел наименьшую долю (53%) интактных полиплексов. Интересно, что разница в диссоциации между полиплексами PAEM ₇₅ и PAEM ₁₅₀ не была статистически значимой, несмотря на то, что PAEM ₁₅₀ вдвое длиннее PAEM 9.4123 75 (). В целом оказалось, что в течение 24 ч все три типа полиплексов испытывали разную степень диссоциации внутри клеток. Более короткая длина полимерной цепи способствует диссоциации полиплекса в большей степени, чем более длинные цепи, из-за более слабого связывания между короткими полимерными цепями и ДНК, что было подтверждено экспериментом по конкуренции гепарина (12). Эти результаты, полученные с использованием метода колокализации трехмерной флуоресценции, могут быть подтверждены измерением FRET (вспомогательная информация, рисунок S4), показывающим более низкий pFRET в полиплексах с более короткими цепями PAEM. Эти результаты продемонстрировали возможность использования полимеров с определенной длиной цепи для модуляции времени диссоциации полиплекса и, в свою очередь, для контроля экспрессии трансгена.

Внутриклеточная диссоциация полиплексов. (A) Репрезентативные изображения конфокальной флуоресцентной микроскопии клеток DC 2.4, трансфицированных полиплексами (соотношение N:P 8) через 24 часа. Красный: плазмида, меченная Cy5. Зеленый: полимер с маркировкой Oregon Green. Синий: Hoechst 33342, окрашивающий ядра клеток. Стрелки указывают на полиплексы, которые остались интактными или диссоциированными (помечены как «низкие» или «высокие» соответственно). (B) Количественная оценка диссоциации внутриклеточного полиплекса. Среднее значение ± стандартная ошибка, подсчитывали 30 клеток для каждого образца, * р <0,05.

Локализация в эндолизосомах явно не зависит от длины полимерной цепи

Совместная локализация Cy5-меченой плазмидной ДНК и эндолизосомы наблюдалась с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии () и количественно оценивалась путем расчета степени перекрытия между флуоресцентными сигналами Cy5 и LysoTracker Green , маркер эндолизосомы (). В отличие от клеточного поглощения и диссоциации полиплексов, не было общей зависимости от длины цепи для эндолизосомной локализации полиплексов. Все три полимера показали одинаковый уровень захвата эндолизосом через 1 час (примерно от 25 до 35%, статистически значимой разницы нет), который увеличился примерно до 55% через 24 часа. Интересно, что за исключением PAEM ₁₅₀ , эндолизосомальное ущемление полиплексов PAEM ₄₅ и PAEM ₇₅ увеличилось с 1 до 24 часов. Возможно, полиплексы покидали эндосомы так же быстро, как и в течение первого часа интернализации, но в более поздние сроки они повторно захватывались кислыми субклеточными везикулами (такими как аутофагосомы). Альтернативно, вместо выхода из эндосомы, большинство полиплексов миновало эндоцитозный путь и интернализовалось другими (такими как кавеолярно-опосредованные) путями. Выяснение механизмов интернализации полиплексов PAEM/ДНК потребует дальнейших исследований.

Эндолизосомальная локализация плазмиды. (A) Репрезентативные изображения конфокальной флуоресцентной микроскопии клеток DC 2.4, трансфицированных полиплексами (соотношение N:P 8) через 24 часа. Красный: плазмида, меченная Cy5. Зеленый: LysoTracker Green. Синий: Hoechst 33342, окрашивающий ядра клеток. Стрелки указывают на области, где плазмида была или не была локализована в эндолизосоме (помечены как «высокая» или «низкая» соответственно). низкая степень локализации плазмиды, оставшейся интактной (низкая) или диссоциированной (высокая). (B) Количественная оценка плазмиды, локализованной в эндолизосоме. Среднее значение ± стандартная ошибка, подсчитывали 30 клеток для каждого образца, * р <0,05.

Более длинные цепи PAEM способствуют локализации полиплексов в ядре, но не способствуют высвобождению свободной плазмиды

Эффективность переноса плазмиды в ядро ​​наблюдали с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии () и количественно оценивали с использованием следующих трех параметров: (1) суммарная интенсивность флуоресценции Су5-плазмиды (включая полиплексы и свободную плазмиду) внутри ядра; (2) интенсивность флуоресценции свободной плазмиды внутри ядра; и (3) количество клеток с детектируемым флуоресцентным сигналом Cy5-плазмиды (в виде полиплекса или свободного) в ядре (). Были приняты меры для того, чтобы учитывались только сигналы Cy5-плазмиды в пределах границ ядер. Через час после трансфекции небольшое количество Cy5-плазмиды было обнаружено в ядрах 1 или 2 клеток из 30 исследованных отдельных клеток. Через четыре часа в ядрах менее 10 клеток было обнаружено несколько больше сигнала Cy5. К 24 ч, подобно тому, что наблюдалось при клеточном поглощении (), общее количество Cy5-плазмиды, локализованной в ядре, зависело от длины полимерной цепи, при этом PAEM ₇₅ и PAEM ₁₅₀ демонстрируют значительно более высокое (p < 0,05) поглощение ядром, чем PAEM ₄₅ (). В ядре было обнаружено больше клеток, трансфицированных с помощью PAEM ₇₅ и PAEM ₁₅₀ с Cy5-плазмидой (14 и 16 из 30 клеток), чем с PAEM ₄₅ (10 из 30 клеток). Что еще более важно, имелось значительное количество ядерной Cy5-плазмиды, которая, по-видимому, диссоциировала от полимерного носителя к 24 часам (24). Хотя самый длинный PAEM ₁₅₀ доставил в ядро ​​наибольшее количество свободной Cy5-плазмиды, доля свободной плазмиды была ниже 0,5 – наименьший из трех полимеров. В совокупности оказалось, что более длинные цепи PAEM способствуют общему клеточному поглощению и последующему поглощению плазмиды ядром, но если полимерная цепь была слишком длинной, то высвобождение свободной плазмиды из полимера могло быть затруднено. Поскольку для эффективной экспрессии трансгена требуется максимальное количество свободной плазмиды в ядре, более идеальным может быть использование полимера с умеренной длиной цепи (например, DP 75), чтобы облегчить как ядерный транспорт, так и диссоциацию полиплексов внутри ядра. .

Ядерная локализация плазмиды и диссоциация полиплексов. (A) Репрезентативные изображения конфокальной флуоресцентной микроскопии клеток DC 2.4, трансфицированных полиплексами (соотношение N:P 8) через 24 часа. Красный: плазмида, меченная Cy5. Зеленый: полимер с маркировкой Oregon Green. Синий: ядра клеток, окрашенные Hoechst 33342, обведены пунктирными белыми линиями. Стрелки указывают на области, где в ядре обнаружен плазмидный сигнал.

Показаны примеры клеточных ядер, содержащих свободную плазмиду («высокий уровень»), плазмиду, связанную с полиплексом («низкий уровень»), или отсутствие плазмиды («нет»). (B) Монтаж z-срезов клеточного ядра. Стрелки в кадрах 15–21 обозначают плазмидный сигнал внутри ядра. Стрелки в кадрах 25-30 указывают на плазмидный сигнал на краю ядерной мембраны. (C) Количественная оценка количества плазмиды (свободной и связанной с полиплексом), локализованной в ядре клетки. Верхняя часть столбцов представляет собой количество свободной плазмиды. Среднее значение ± стандартная ошибка, подсчитывали 30 клеток для каждого образца, * р <0,05. Цифры представляют собой частоту клеток в популяции из 30 клеток, которые содержали положительный сигнал плазмиды внутри своих ядер.

Трансфекция ДК in vitro с сывороткой и без нее

PAEM-опосредованную трансфекцию клеток DC 2.4 плазмидой GFP проводили в культуральной среде в отсутствие или в присутствии 10% сыворотки, а уровень экспрессии GFP определяли с помощью проточной цитометрии (). Чтобы исключить любую возможную интерференцию аутофлуоресценции клеток, ДК, трансфицированные в идентичных условиях, но с использованием плазмиды люциферазы, служили в качестве отрицательного контроля для установки GFP 9. Ворота 3970 + (дополнительная информация, рисунок S3). В бессывороточных условиях эффективность трансфекции клеток DC 2.4, измеренная процентным содержанием клеток GFP ⁺ , варьировалась от 10% до 35% () и зависела как от длины полимерной цепи, так и от соотношения N:P (). В целом, более длинная полимерная цепь обеспечивает более высокую трансфекцию, за исключением самого длинного PAEM ₁₅₀ при высоких соотношениях N:P (16 и 24). В частности, при отношении N:P, равном 8, зависимость трансфекции от длины цепи оказалась согласующейся с количеством свободной (транскрипционно-активной) плазмиды, обнаруженной в ядре клетки (1).

Эффективность трансфекции клеток DC 2.4 полиплексами определяли с помощью проточной цитометрии. (A) Репрезентативные точечные диаграммы трансфицированных клеток. Ворота GFP ⁺ были установлены на основе клеток, трансфицированных плазмидой люциферазы (рис. S3). (B, C) Количественная оценка процента клеток GFP ⁺ , трансфицированных в отсутствие (B) или в присутствии (C) 10% сыворотки. * р <0,05.

При трансфекции в средах, содержащих сыворотку, общий уровень трансфекции был намного ниже, чем в средах без сыворотки, при всех протестированных соотношениях N:P, но более длинная цепь при высоких соотношениях N:P (16 и 24) действительно достигала трансфекции достигает 10% (). Аналогичное снижение эффективности трансфекции из-за выделения сыворотки было зарегистрировано для многих катионных полимеров с различной молекулярной структурой ^30–32 , и причина часто связывается с дестабилизацией полиплексов сывороточными белками. Мы обнаружили, что самый длинный PAEM ₁₅₀ был способен образовывать самые стабильные полиплексы среди трех протестированных полимеров и что он действительно достиг самого высокого уровня экспрессии трансгена, несмотря на присутствие сыворотки. По сравнению с блок-сополимерами PEG-b-PAEM, о которых мы сообщали ранее ¹⁶ , гомополимеры PAEM продемонстрировали гораздо более высокую эффективность трансфекции ДК, культивируемых в бессывороточной среде, по-видимому, из-за того факта, что положительно заряженные полиплексы гомополимера PAEM/ДНК могут быть усваивается клетками более эффективно. Другим потенциальным фактором может быть то, что, хотя известно, что пэгилирование повышает коллоидную стабильность полиплексов, слишком большая стабильность может препятствовать диссоциации полиплексов внутри клеток, что приводит к меньшей трансфекции генов.

Созревание ДК in vitro с сывороткой и без нее

В качестве связи между врожденным и адаптивным иммунным ответом состояние созревания ДК важно для успешной вакцинации ДНК. Сообщалось, что некоторые катионные полимеры, включая производные полилизина ³³ , PEI ³⁴ , хитозан ³⁵ и поли(β-аминоэфиры) ³⁶ , усиливают иммунный ответ, но возможность индукции созревания DC такими катионными полимерами не установлено. Здесь мы исследовали состояние созревания мышиных клеток DC 2.4 после обработки полиплексами PAEM/ДНК in vitro. В качестве положительного и отрицательного контролей ДК, обработанные ЛПС, повышали экспрессию маркера созревания CD40, в то время как голая плазмида ДНК не оказывала никакого эффекта (1). В бессывороточных условиях воздействие полиплексов при соотношениях N:P, равном 8 и 16, индуцировало сильную активацию CD40 на уровнях, подобных или превышающих LPS, но корреляция между уровнем CD40 и длиной цепи PAEM не была выражена. (). Присутствие 10% сыворотки в среде для культивирования клеток ослабляло степень созревания ДК при соотношении N:P, равном 8, но не 16. Однако при обоих соотношениях N:P корреляция между длиной полимерной цепи и созреванием ДК была очевидной: полиплексы с более длинной цепью PAEM вызывали более высокую активацию CD40. Эти данные свидетельствуют о том, что в качестве носителей ДНК-плазмиды полимеры PAEM могут быть потенциально хорошими адъювантами из-за их способности стимулировать созревание DC, что является необходимым условием для создания адаптивных иммунных ответов. Кроме того, ранее мы сообщали, что ПЭГ- b Блок-сополимеры -PAEM индуцировали созревание DC мышиного костного мозга в зависимости от длины цепи ¹⁶ . Было бы интересно сравнить стимулирующую способность гомополимеров и блок-сополимеров ПЭГ рядом друг с другом. Несмотря на это, предполагается, что такое созревание DC, стимулируемое катионными полимерами, по крайней мере, частично связано со стрессом и цитотоксичностью, вызванными полимерами ²¹ .

Созревание клеток DC 2.4 с помощью полиплексов, отмеченных активацией CD40. (A) Репрезентативный набор данных проточной цитометрии клеток, трансфицированных полиплексами или LPS или только голой ДНК, в присутствии или в отсутствие сыворотки. Заштрихованная область — необработанные ДК. Цифры представляют собой значения средней интенсивности флуоресценции. (B) Количественная оценка созревания DC. Уровень CD40 нормализовался по отношению к необработанным ДК. * р <0,05.

ДК, трансфицированные полиплексом, активировали антигенспецифический CD8

⁺ Т-клетки in vitro

Чтобы оценить потенциальную практическую полезность полимеров PAEM для доставки ДНК-вакцины, мы оценили способность PAEM, доставляющего модельный антиген, активировать наивный CD8 ⁺ Т-клетки. Через 24 часа после трансфекции клеток DC 2.4 в отсутствие или в присутствии сыворотки наивные OVA-специфические CD8 ⁺ Т-клетки, собранные у мышей, инкубировали с DC в течение 3 дней. OVA-специфическую активацию Т-клеток определяли путем количественного определения уровня продукции IFN-γ. Мы обнаружили, что в бессывороточных условиях ДК, трансфицированные полиплексом, стимулировали продукцию IFN-γ Т-клетками на уровне положительного контроля – ДК, стимулированные ЛПС и CD8 ⁺ Т-клеточный эпитоп из OVA, пептид SIINFEKL (). Величина продукции IFN-γ зависела от уровня эффективности генной трансфекции DCs (), то есть при соотношении N:P, равном 8, более длительная PAEM продуцировала больше IFN-γ, тогда как при соотношении N:P, равном 16, PAEM с промежуточная длина цепи (DP = 75) приводила к самой высокой продукции IFN-γ (2). Для трансфекции ДК в присутствии сыворотки уровень IFN-γ снова коррелировал с эффективностью трансфекции в тех же условиях (), снижаясь до уровня, близкого к фоновому, при соотношении N:P, равном 8, и восстанавливаясь, приближаясь к уровню сыворотки. свободный уровень при соотношении N:P 16 (+). В совокупности корреляция между длиной полимерной цепи, эффективностью трансфекции и активацией Т-клеток была очевидной. Это также свидетельствует о том, что полимеры PAEM могут быть потенциально эффективными носителями ДНК-вакцины для индуцирования антиген-специфического Т-клеточного иммунитета. Необходима дальнейшая оценка эффективности PAEM при вакцинации ДНК in vitro и in vivo.

CD8 ⁺ Активация Т-клеток. ДК трансфицировали полиплексами, содержащими модельный антиген (OVA), кодирующий плазмиду, в отсутствие или в присутствии сыворотки. В качестве контроля использовали необработанные DC и DC, стимулированные пептидом SIINFEKL плюс LPS. Продукцию IFN-γ CD8 ⁺ OVA-специфическими Т-клетками определяли количественно с помощью ELISA.

PAEM представляет собой структурно простой член семейства поли(аминоалкилметакрилатов). Он имеет очень гибкую полиметакрилатную основу и высокую плотность положительного заряда при физиологическом pH благодаря первичным боковым цепям амина, что способствует образованию компактных полиплексов наноразмеров. Было бы интересно посмотреть, как дальнейшие изменения структуры полимера могут повлиять на перенос генов и взаимодействие с DCs, например, использование более длинных алкильных цепей между центром заряда и основной цепью полимера ^37,38 . Кроме того, прямое сравнение между PAEM и структурно подобным, но более широко изученным носителем гена, PDMAEMA, который имеет боковые цепи третичных аминов ³⁹ , может помочь понять влияние типа центра положительного заряда на формирование и внутриклеточную транспортировку полиплексы в ДК.

Катионные полимеры PAEM с точно контролируемой длиной цепи были синтезированы и охарактеризованы для доставки плазмидной ДНК в антигенпрезентирующие дендритные клетки. В ходе всестороннего исследования мы выявили корреляции между длиной полимерной цепи и коллоидными свойствами полиплексов, эффективностью трансфекции, поглощением дендритными клетками и субклеточным транспортом, а также способностью индуцировать созревание DC и CD8 9. 3970 + Активация Т-клеток модельной ДНК-вакциной. Таким образом, структурно простой и определенный полимер PAEM является не только полезным модельным материалом для понимания взаимосвязи структура-функция в невирусной доставке генов, но также может быть практически эффективным носителем иммуностимулирующей ДНК-вакцины.

1_si_001

Нажмите здесь для просмотра. ^{(200K, pdf)}

Авторы благодарят д-ра Джона Олфеста за предоставление клеток DC 2.4, д-ра Мэтта Мешера за предоставление мышей OT-1/PL, д-ра Роберта Транквилло за использование флуоресцентного планшетного ридера, д-ра , Марку Хиллмайеру за использование системы GPC и Лаборатории обработки биомедицинских изображений (BIPL) Университета Миннесоты за помощь в конфокальной микроскопии и количественном анализе изображений. К. Ван выражает признательность за поддержку NSF (грант BES0547613), NIH (грант R01CA129189) и Министерства обороны США (через субподрядный грант WU-07-151/W81XWH-06-1-0677 Вашингтонского университета в Сент-Луисе). Р. Тан выражает признательность за поддержку Китайской программы «Новый век, выдающиеся таланты в университетах» (№ NCET-10-0435), Национального фонда естественных наук Китая (№ 21004030, 50873080), Фонда естественных наук провинции Цзянсу. Китая (№ BK2010145) и Фонды фундаментальных исследований центральных университетов Китая (JUSRP21013).

Имеющаяся вспомогательная информация: результаты расчета CoV, измерения дзета-потенциала, контроль люциферазы для трансфекции GFP, данные FRET, динамика генной трансфекции во времени. Этот материал доступен бесплатно в Интернете по адресу http://pub.acs.org.

1. Laddy DJ, Weiner DB. Int Rev Immunol. 2006; 25: 99–123. [PubMed] [Google Scholar]

2. Меллман И., Штейнман Р.М. Клетка. 2001; 106: 255–258. [PubMed] [Google Scholar]

3. Rock KL, Shen L. Immunol Rev. 2005; 207:166–183. [PubMed] [Google Scholar]

4. Pack DW, Hoffman AS, Pun S, Stayton PS. Nat Rev Drug Discov. 2005; 4: 581–593. [PubMed] [Google Scholar]

5. Минцер М.А., Симанек Э.Е. Chem Rev. 2009; 109: 259–302. [PubMed] [Google Scholar]

6. Вонг С.Ю., Пелет Дж.М., Патнэм Д. Prog Polym Sci. 2007;32:799–837. [Google Scholar]

7. Нгуен Д.Н., Грин Дж.Дж., Чан Дж.М., Лонг Р., Андерсон Д.Г. Adv Mater. 2009; 21: 847–867. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

8. Godbey WT, Wu KK, Mikos AG. J Biomed Mater Res. 1999; 45: 268–275. [PubMed] [Google Scholar]

9. Layman JM, Ramirez SM, Green MD, Long TE. Биомакромолекулы. 2009;10:1244–1252. [PubMed] [Google Scholar]

10. Шринивасачари С., Лю Ю.М., Преветт Л.Е., Рейнеке Т.М. Биоматериалы. 2007; 28: 2885–2898. [PubMed] [Академия Google]

11. Рен Ю, Цзян С. А., Пань Д., штаб-квартира Мао. Биомакромолекулы. 2010; 11:3432–3439. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

12. Breunig M, Lungwitz U, Liebl R, Fontanari C, Klar J, Kurtz A, Blunk T, Goepferich A. J Gene Med. 2005; 7: 1287–1298. [PubMed] [Google Scholar]

13. Morimoto K, Nishikawa M, Kawakami S, Nakano T, Hattori Y, Fumoto S, Yamashita F, Hashida M. Mol Ther. 2003; 7: 254–261. [PubMed] [Google Scholar]

14. Матияшевски К., Ся Дж. Х. Хим. ред. 2001; 101:2921–2990. [PubMed] [Google Scholar]

15. Heath WH, Senyurt AF, Layman J, Long TE. Макромоль Хим Физ. 2007; 208:1243–1249. [Google Scholar]

16. Танг Р.П., Палумбо Р.Н., Нагараджан Л., Крогстад ​​Э., Ван С. Дж. Контрольный релиз. 2010; 142: 229–237. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

17. Kuroda K, DeGrado WF. J Am Chem Soc. 2005; 127:4128–4129. [PubMed] [Google Scholar]

18. Mosmann T. J Immunol Methods. 1983; 65: 55–63. [PubMed] [Академия Google]

19. Годби В.Т., Ву К.К., Микос А.Г. Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96: 5177–5181. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

20. Akita H, Ito R, Khalil IA, Futaki S, Harashima H. ​​Mol Ther. 2004; 9: 443–451. [PubMed] [Google Scholar]

21. Palumbo RN, Zhong X, Wang C. J. Control Release. 2011 г.: 10.1016/j.jconrel.2011.08.037. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Dufresne MH, Leroux JC. Фарм Рез. 2004; 21: 160–169. [PubMed] [Академия Google]

23. Dufresne MH, Elsabahy M, Leroux JC. Фарм Рез. 2008;25:2083–2093. [PubMed] [Google Scholar]

24. Dubruel P, Christiaens B, Rosseneu M, Vandekerckhove J, Grooten J, Goossens V, Schacht E. Биомакромолекулы. 2004; 5: 379–388. [PubMed] [Google Scholar]

25. Zhu CH, Jung S, Si GY, Cheng R, Meng FH, Zhu XL, Park TG, Zhong ZY. J Polym Sci Pol Chem. 2010;48:2869–2877. [Google Scholar]

26. He LH, Read ES, Armes SP, Adams DJ. Макромолекулы. 2007; 40:4429–4438. [Академия Google]

27. Манолова В., Флейс А., Бауэр М., Шварц К., Саудан П., Бахманн М.Ф. Евр Дж Иммунол. 2008; 38: 1404–1413. [PubMed] [Google Scholar]

28. Funhoff AM, van Nostrum CF, Koning GA, Schuurmans-Nieuwenbroek NME, Crommelin DJA, Hennink WE. Биомакромолекулы. 2004; 5:32–39. [PubMed] [Google Scholar]

29. Джонс Н.А., Hill IRC, Stolnik S, Bignotti F, Davis SS, Garnett MC. Biochim Biophys Acta-Gene Struct Express. 2000;1517:1–18. [PubMed] [Google Scholar]

30. Dash PR, Read ML, Barrett LB, Wolfert M, Seymour LW. Джин Тер. 1999;6:643–650. [PubMed] [Google Scholar]

31. Guo WJ, Lee RJ. J Управление выпуском. 2001; 77: 131–138. [PubMed] [Google Scholar]

32. Kuo JHS. Биотехнология Appl Biochem. 2003; 37: 267–271. [PubMed] [Google Scholar]

33. Locher CP, Putnam D, Langer R, Witt SA, Ashlock BM, Levy JA. Иммунол Летт. 2003; 90: 67–70. [PubMed] [Google Scholar]

34. Lisziewicz J, Trocio J, Whitman L, Varga G, Xu JQ, Bakare N, Erbacher P, Fox C, Woodward R, Markham P, Arya S, Behr JP, Lori F. Джей Инвест Дерматол. 2005; 124: 160–169.. [PubMed] [Google Scholar]

35. Рой К., штаб-квартира Мао, Хуан С.К., Леонг К.В. Нат Мед. 1999; 5: 387–391. [PubMed] [Google Scholar]

36. Greenland JR, Liu HN, Berry D, Anderson DG, Kim WK, Irvine DJ, Langer R, Letvin NL. Мол Тер. 2005; 12: 164–170. [PubMed] [Google Scholar]

37. Ke JH, Wei MF, Shieh MJ, Young TH. J Biomater Sci-Polym Ed. 2011; 22:1215–1236. [PubMed] [Google Scholar]

38. Wong SY, Sood N, Putnam D. Mol Ther. 2009; 17: 480–490. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

39. Тао Л., Лю Дж. К., Тан Б. Х., Дэвис Т. П. Макромолекулы. 2009;42:4960–4962. [Google Scholar]

Оригинальный Les Paul Mini GT

JavaScript отключен. Для лучшего опыта, пожалуйста, включите JavaScript в вашем браузере, прежде чем продолжить.

• Автор темы Техас07R8
• Дата начала 16 октября 2008 г.

Техас07R8

Старший член

• 16 октября 2008 г.

• #1

Я видел эти удивительные Les Tall mini Lesters, и они потрясающие, я бы хотел иметь такой. Сначала я подумал, что это недавняя идея, но обнаружил, что Gibson на самом деле сделал несколько для Les Paul, и они были золотыми топ-мини.

Вот фото оригинального 52 и мини, оба с золотым верхом. Наслаждаться!

 

клюсон

Старший член

• 16 октября 2008 г.

• #2

в Японии тоже есть, по-моему, в масштабе 1/3

 

пинефд

В.И.П. Участник

• 16 октября 2008 г.

• #3

Отличное фото, Текс! Спасибо за публикацию! Я никогда не видел эту картинку.

Вот фотография, которая вдохновила меня на создание моих октавных гитар… это обложка журнала Guitar World за март 83 года:

 

Техас07R8

Старший член

• 16 октября 2008 г.

• #4

пинефд сказал:

Это отличное фото, Текс! Спасибо за публикацию! Я никогда не видел эту картинку.

Вот фотография, которая вдохновила меня на создание моих октавных гитар. .. это обложка журнала Guitar World за март 83 года:

Нажмите, чтобы развернуть…

Ничего себе, посмотрите на дату, март 83 года. Чувак, я просто никогда не знал о них раньше. У тебя тоже классная обложка. Это фото было взято из моего LP-книги. В нем еще куча странных Les Paul.

Взгляните на эту фотографию, это всего лишь часть его частной коллекции, чертовски потрясающе!

и эти:

 

Хьюи

Старший член

• 16 октября 2008 г.

• #5

Интересно, почему их так и не сделали, может лады крошечные??

 

Вы должны войти или зарегистрироваться, чтобы ответить здесь.

MINI Humbucker LP Deluxe

• maxiblues
• 6 февраля 2012 г.
• Гибсон Лес Пол

Ответы

7

просмотров

2К

7 февраля 2012 г.

dspelman

Les Paul ’70s Tribute — Ваше мнение о мини-хамбакерах?

• 2manyGuitars
• 19 апреля 2017 г.
• Гибсон Лес Пол

Ответы

2

просмотров

703

20 апреля 2017 г.

Callaway

Les Paul «Deluxe»

• Аксторфер
• 21 декабря 2014 г.
• Гибсон Лес Пол

2

Ответы

22

просмотров

2К

23 декабря 2014 г.

Indeedido

Вот мой проект «Телюкс». 1-й пробег 60-го трибьюта GT с мини

• NRBQ
• 22 июля 2012 г.
• Гибсон Лес Пол

Ответы

16

просмотров

932

23 июля 2012 г.

НРБК

Les Paul GT 1956 года — Craigslist

• BuzzHaze
• 14 ноября 2011 г.
• Гибсон Лес Пол

Ответы

2

просмотров

970

14 ноября 2011 г.